鹌鹑MC3R基因多态性与体重关系的研究

以MC3R基因为候选基因,根据鸡的MC3R基因序列(GenBank登录号:AB017137)在编码区设计2对引物,采用PCR-SSCP和DNA测序技术检测该基因在蛋用鹌鹑群体中的单核苷酸多态性(SNPs),同时对候选基因与鹌鹑体重的相关性进行分析。结果表明,鹌鹑MC3R基因在所测序列的27(G→A)和138(C→T)碱基处发生了2个突变,检测到AA、BB、CC、AB、AC、BC6种基因型;A等位基因频率为0.347,B等位基因频率为0.218,C等位基因频率为0.435。方差分析结果显示,MC3R基因型显著影响公、母鹌鹑的体重。因此推测MC3R基因可以作为影响和控制鹌鹑体重的候选基因。     

鸽黑素皮质素受体4基因多态性与生长性状及体组成的相关研究

通过比对GenBank中鸡、鹅黑素皮质素受体4（MC4R,melanocortin receptor）基因DNA序列,找出保守序列设计引物,克隆了鸽的MC4R基因编码区985bp序列,与鹅、鸡、短尾猊、北极狐和犬类的同源性分别为94%、94%、91%、84%和84%。利用PCR-SSCP技术和DNA测序方法检测两群体鸽MC4R基因编码区序列的单核苷酸多态性,共检测出两个多态位点,最小二乘分析表明,T933C基因型对肉鸽群体活重、屠体重、全净膛有显著影响（P＜0.05）,对野生鸽群体生长性状无影响（P＞0.2）,多重比较显示,该位点AA基因型个体的活重、屠体重、全净膛显著高于BB基因型个体（P＜0.05）。MC4R基因可能是影响鸽生长性状和体组成的主效基因或与主效基因相连锁。     

鹌鹑FATP1、TBC1D1基因多态性及其与屠宰性状的关联分析

FATP1和TBC1D1基因在禽类糖类代谢和脂肪代谢中扮演着重要的角色,在家禽选育过程中可作为影响屠宰性能的候选基因。为了提高鹌鹑的屠宰性能,本试验选择145只鹌鹑作为试验材料,通过非探针高分辨率熔解曲线(HRM)的方法对其进行FATP1和TBC1D1基因分型,并与屠宰性状(活重、屠体重、腿肌重、胸肌重、全净膛重、半净膛重、胸肌率、腿肌率)进行关联分析。结果表明:FATP1基因有一个多态位点存在AA、AG、GG 3种基因型,AA基因型鹌鹑的活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重和胸肌重显著高于AG、GG基因型(P0.05),且AA基因型鹌鹑的屠宰性能均明显高于其他两种类型的鹌鹑;AG、GG基因型间差异不显著(P0.05),AA基因型鹌鹑的胸肌率高于AG基因型和GG基因型,GG基因型腿肌率高于AA基因型和AG基因型,但差异均不显著(P0.05)。TBC1D1基因在变异位点处存在TT、TG和GG 3种基因型,TT基因型鹌鹑的半净膛重、全净膛重和胸肌重均显著高于TG基因型(P0.05);TT基因型鹌鹑的活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重和胸肌重均显著高于GG基因型(P0.05),TT基因型鹌鹑的腿肌率、胸肌率均高于TG基因型和GG基因型,但差异不显著(P0.05)。说明AA、TT基因型有可能是影响朝鲜鹌鹑屠宰性状的主效基因型,在选种中可作为辅助选择的分子标记。     

京海黄鸡MC4R基因多态性及其与生长性能的关联分析

研究以140只京海黄鸡为试验材料，以MC4R为候选基因，采用PCR-SSCP和DNA测序技术分析了MC4R基因在京海黄鸡群体中的多态性。结果表明：MC4R基因编辑区第662bp处有G→C碱基的点突变，在京海黄鸡中检测到AA、AB、BB3种基因型，A等位基因的频率为0．929．B等位基因的频率为0．071。经过基因型与生长性能的关联分析得知：不同基因型与京海黄鸡4、8、12周龄体重差异显著（P〈0．05），与16周龄体重差异极显著（P〈0．01）。由此推测，MC4R基因可能对于鸡生长性能具有很大的影响或与控制生长性能的主基因连锁。     

吉林白鹅类胰岛素生长因子Ⅱ的SNP及其与屠体性状的相关性分析

试验设计了5对引物,采用PCR-SSCP方法对吉林白鹅肉用品系85只个体类胰岛素生长因子Ⅱ（IGFⅡ）进行了SNP检测,分析其群体遗传结构,并对SNP与屠体性状的相关性进行了研究。结果表明,在IGFⅡ外显子3中存在3种基因型AA、AB、BB基因型,基因型频率分别为0.7647、0.1412、0.0941,AA为优势基因型;存在2种等位基因A、B,基因频率分别为0.8353、0.1647,A为优势等位基因。IGFⅡ外显子3中发现1处SNP位点（A→G）,该突变为沉默突变,未引起氨基酸序列改变。对3种基因型进行方差分析,结果发现,BB基因型个体半净膛重、肝脏重显著高于AA、AB基因型（P＜0.05）;腿肉重BB基因型极显著高于AA基因型（P＜0.01）;基因型对全净膛重、翅重、胸肉重无显著影响（P＞0.05）。     

鸡MSTN基因多态性及其与屠体性状的关联分析

为了探明肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因对鸡屠体性状的影响,以优质鸡S3系为研究对象,采用PCR-RFLP及测序技术进行多态性检测.结果发现MSTN基因存在G195C和A234G 2个突变位点,均出现3种基因型.公鸡群体在G195C位点处于非Hardy-Weinberg平衡状态(P＜0.05),各群体在G195C和A234G位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P＞0.05).最小二乘方差分析显示,MSTN基因A234G位点处GG基因型S3系优质公鸡半净膛率和全净膛率显著高于AG基因型(P＜0.05),而AA型与GG型和AG型在这两项上差异不显著(P＞0.05);G195C位点CC基因型S3系优质母鸡的半净膛率、全净膛率、胸肌重和腿肌重均显著高于GG基因型(P＜0.05),GC型与GG型和CC型均不显著(P＞0.05).因此,MSTN可能是影响鸡骨骼肌生长的一个主效基因或与控制该性状的主效基因连锁,能够作为候选基因用于地方鸡屠体性状的分子标记辅助选择.     

大白猪MC4R、CDC16基因多态性及其与生长性状的关联分析

本研究旨在利用高分辨率熔解曲线(high resolution melt,HRM)分型方法检测大白猪黑素皮质素受体(melanocortin-4 receptor,MC4R)和细胞分裂周期蛋白16(cell division cycle 16,CDC16)基因的多态性,并对其与大白猪的生长性状进行关联性分析。试验共采集246头大白猪的耳组织样提取基因组DNA,对小群体样本进行PCR扩增后,通过测序方法寻找两个基因在该群体中的多态性位点,针对已发现的多态性位点设计HRM专用引物,利用HRM方法对大群体进行多态性检测,将所得结果与大白猪生长性状进行关联性分析。结果表明,在MC4R基因序列中检测到1个突变位点2207AG,2个等位基因:A和G,3个基因型:AA、AG和GG;在CDC16基因第18外显子上检测到了1个突变位点837TC,2个等位基因:T和C,2种基因型:TT和CT。χ~2适合性检验结果显示,2个基因的基因型频率和等位基因频率在2个种群中分布差异不显著,符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。多态信息含量(PIC)分析显示,MC4R基因在2个群体中均处于中度多态(0.25PIC0.5),而CDC16基因在2个群体中均处于低度多态(PIC0.25)。关联分析结果发现,MC4R基因对大白猪体重及日增重具有显著影响(P0.05),CDC16基因对大白猪体高、体长和体重等均具有显著影响(P0.05)。综上所述,MC4R与CDC16基因对大白猪的生长发育具有一定的影响,为后续大白猪肉质性状与生长性状的现代分子选育提供参考。     

比格犬MC3R和MC4R基因多态性与体重相关性的研究

犬体重是重要的经济性状,为探讨犬MC3R和MC4R基因多态性与犬体重性状的关系,本研究利用PCR-R FLP、AS-PCR方法对120只比格犬MC4R基因T101N位点,MC3R基因的A167T位点,G291A位点的不同基因型与体重的关系进行最小二乘分析、结果表明:对于MC4R基因NN基因型的比格犬体重显著高于其他2个基因型(P<0.05),而MC3R基因中TT和AA基因型的比格犬体重则显著高于其他2个基因型(P<0.05)。在MC4R基因型一致时,NNTT和NNAA基因型的犬体重显著高于其他合并基因型(P<0.01),NNTTAA合并基因型的犬体重最高,MMAAGG基因型犬体重最低。实验结果表明,MC3R和MC4R基因可以作为犬体型的候选基因,可筛选MC3R和MC4R合并基因型的犬用于培育不同体重的犬。     

京海黄鸡POU1F1基因多态性及其与生长性能的遗传效应分析

采用PCR-SSCP和DNA测序技术检测POU1F1基因在京海黄鸡中的单核苷酸多态性(SNPs),并对不同基因型与京海黄鸡生长性能的相关性进行了分析.结果表明:在POU1F1基因第三外显子第5 231 bp位置有A→T碱基的点突变,在京海黄鸡群体中检测到AA、AB、BB 3种基因型,A等位基因的频率为0.500,B等位基因的频率为0.500.基因型与生长性能的关联分析得知:POU1F1基因不同基因型显著影响京海黄鸡各周龄体重,AB型显著高于从型和BB型(P<0.01).因此,推测POU1F1基因可能是影响鸡生长性状的主效基因或与主效基因紧密连锁的标记基因,并且能够在分子标记辅助选择中用于对鸡生长性状的遗传改良和固定.     

鹌鹑ESR1基因的外显子8多态性与早期生长性能的关联分析

为了探讨雌激素受体基因(ESR)多态性对鹌鹑早期生长性能的影响,试验采用PCR-RFLP法,对3个鹌鹑群体(中国黄羽鹌鹑、朝鲜鹌鹑、北京白羽鹌鹑)进行ESR1基因外显子8的多态性检测,并与鹌鹑早期生长性能进行关联分析。结果表明:ESR1基因外显子8在3个鹌鹑群体中均检测到3种基因型,分别为TT、CC、CT基因型,ESR1基因外显子8在北京白羽鹌鹑和朝鲜鹌鹑中都以TT基因型频率为最高(0.708和0.500),而在中国黄羽鹌鹑中以CT基因型频率为最高(0.521)。在中国黄羽鹌鹑群体中CC基因型的体重、胸宽、胸深、胸骨长、体长显著性高于TT基因型(P0.05);朝鲜鹌鹑的TT基因型胫长和体重显著高于CC基因型(P0.05);鹌鹑ESR1外显子8多态性对北京白羽鹌鹑的早期生长性能无显著影响(P0.05)。说明ESR1基因可以作为有价值的候选基因应用于蛋用鹌鹑的分子标记辅助选择。     

Xanthophylls increased HDLC level and nuclear factor PPARγ, RXRγ and RARα expression in hens and chicks

This study was designed to investigate effects of xanthophylls on serum lipid profile (triglyceride, TG; cholesterol, CHO; high‐density lipoprotein cholesterol, HDLC; and low‐density lipoprotein cholesterol, LDLC) and nuclear factor (peroxisome proliferator‐activated receptor gamma, PPARγ; PPAR gamma coactivator 1 alpha, PGC1α; retinoid X receptor gamma, RXRγ; and retinoic acid receptor alpha, RARα) gene expression of breeding hens and chicks. In experiment 1, 432 hens were divided into three groups and fed diets supplemented with 0 (as control group), 20 or 40 mg/kg xanthophylls. Blood was sampled at 7, 14, 21, 28 and 35 days of trial. Liver, duodenum, jejunum and ileum were sampled at 35 days of trial. Results showed that serum HDLC level of hens was increased after dietary 40 mg/kg xanthophyll addition for 21, 28 and 35 days, while serum TG, CHO and LDLC were not affected. Xanthophyll addition also increased PPARγ expression in jejunum, RXRγ expression in duodenum and jejunum, and RARα expression in liver and duodenum. Experiment 2 was a 2 × 2 factorial design. Male chicks hatched from 0 or 40 mg/kg xanthophyll diet of hens were fed diet containing either 0 or 40 mg/kg xanthophylls. Liver, duodenum, jejunum and ileum were sampled at 0, 7, 14 and 21 days after hatching. Blood samples were also collected at 21 days. Results showed that in ovo xanthophylls elevated PPARγ in duodenum and jejunum, and RXRγ and RARα in liver of chicks mainly within 1 week after hatching, while dietary xanthophylls increased serum HDLC level and PPARγ and RXRγ in liver from 2 weeks onwards. In conclusion, our research suggested xanthophylls can regulate serum lipid profile and nuclear factor expression in hens and chicks.     

核桃细菌性疫病菌特性及其与核桃内生菌的竞争作用

为了明确本实验室前期分离得到的一株核桃细菌性疫病菌Xaj DW3F3的相关特性及其与寄主内生菌的竞争能力。对该病原细菌进行了显微观察、生物膜形成测定,不同培养基上多糖和色素含量,以及18项生理生化指标测定。通过毛细管法和滴落法观察其趋化作用,并测试其与寄主内生菌的竞争能力。结果表明,病原菌DW3F3为杆状、极生鞭毛、有运动性并能形成生物膜。其在YPGA、King’B 和NA培养基上生长较好,产生多糖和色素较多。病原菌有较强的耐盐性,致死温度达60℃,对纤维素和淀粉都有较强的分解能力,对NaCl和寄主叶片表现出一定的趋性。在其与核桃叶部内生菌的共培养中表现出一定竞争优势。该病菌菌DW3F3有树生黄单胞菌核桃致病变种（Xanthomonas arboricola pv.juglandis,Xaj）的基本特征及致病相关特性,这些特征可能与其致病性强及病害难以控制有关。     

Cloning and expression of pigeon IFN-γ gene

This is the first paper describing the cloning of pigeon IFN-γ gene (PiIFN-γ) and the analysis of the in vitro expressed recombinant protein. The PiIFN-γ gene was identified by RT-PCR as a 498 bp, fragment coding for a precursor protein of 165 amino acids instead of 164 amino acids, as observed in the other avian species. The recombinant protein was expressed in vitro by an eukaryotic system and the biological properties of the cytokine were tested using a chicken macrophage cell line. The high degree of amino acid and nucleotide identity, shared with the ChIFN-γ, and the fact that the pigeon protein was functional on chicken cells, indicates a cross-reactivity between pigeon and chicken IFN-γ. The detection of the PiIFN-γ could represent an useful instrument in understanding the role played by this cytokine in immune response related to vaccinations and infectious diseases in the pigeon.     

喜树碱对NIH/3T3细胞TLR3表达及活化的影响

为研究喜树碱(CPT)对小鼠成纤维细胞NIH/3T3中Toll样受体3(TLR3)的表达及活化的影响,本实验利用CCK-8试剂盒测定了CPT在不同浓度下、不同作用时间对NIH/3T3细胞的毒性作用,并确定CPT对NIH/3T3细胞的基本无毒浓度为1μg/mL。通过流式细胞术检测CPT作用NIH/3T3细胞表明,TLR3平均荧光强度与对照组相比显著增强,表明TLR3表达增加。此外,ELISA试剂盒检测结果显示CPT作用后IFN-β表达量增加,并高于阳性对照组,差异极显著(p<0.01)。本研究表明CPT对NIH/3T3细胞的TLR3具有显著的激动作用。     

miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和成脂分化的影响

为探讨miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和成脂分化的影响,通过化学修饰的miR-23b-3p模拟物成功转入3T3-L1前脂肪细胞后,利用CCK-8法和流式细胞术检测过表达miR-23b-3p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响;并通过实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞周期基因CyclinD1和CDK4以及成脂标志基因PPARγ和FABP4的表达情况;油红O染色测定甘油三酯积累情况。结果显示,过表达miR-23b-3p抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,导致细胞G1期阻滞,CyclinD1、CDK4在mRNA和蛋白水平极显著下调;在3T3-L1前脂肪细胞成脂分化过程中,miR-23b-3p的表达水平上调;过表达miR-23b-3p促进3T3-L1前脂肪细胞甘油三酯积累,PPARγ、FABP4在mRNA和蛋白水平显著或极显著上调。结果表明,miR-23b-3p能够抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖并促进其分化为成熟脂肪细胞。     

JARID2对牛卵丘细胞H3K9me3、H3K27me3的甲基化修饰作用

本试验利用RNAi方法抑制牛卵丘细胞中JARID2基因mRNA的表达水平,通过免疫荧光方法检测H3K4me3、H3K9me3、H3K27me3、H3K36me3的甲基化程度。结果表明,在牛卵丘细胞中存在JARID2的表达,并且存在H3K9me3、H3K27me3的甲基化修饰,但没有检测到H3K4me3、H3K36me3的甲基化修饰。通过siRNA对牛卵丘细胞中JARID2 mRNA的表达进行成功抑制后,转染组JARID2的表达量明显下降,但H3K4me3、H3K27me3表达量无明显变化,而H3K9me3、H3K27me3表达量明显下降,即JARID2在mRNA水平上能够影响H3K9me3、H3K27me3的甲基化修饰程度,而对H3K4me3、H3K36me3的甲基化修饰无明显作用。     

Plasma and milk concentrations of vitamin D3 and 25-hydroxy vitamin D3 following intravenous injection of vitamin D3 or 25-hydroxy vitamin D3.

Plasma levels of vitamin D3 or 25-hydroxyvitamin D3 in ewes after administration of a single massive intravenous dose of vitamin D3 (2 X 10(6) IU) or 25-hydroxy vitamin D3 (5 mg) were determined at zero, one, two, three, five, ten and 20 days postinjection. In six ewes injected with vitamin D3 conversion of vitamin D3 to 25-hydroxy vitamin D3 resulted in a six-fold increase in the plasma 25-hydroxy vitamin D3 level within one day. Elevated levels were maintained until day 10 but by day 20 a substantial decline in the plasma 25-hydroxy vitamin D3 level had occurred. Peak levels of vitamin D3 were reached one day after injection and then continuously declined until day 20. Administration of 25-hydroxy vitamin D3 increased plasma concentrations of 25-hydroxy vitamin D3 to fivefold higher levels than those observed when vitamin D3 was injected, with approximately threefold higher levels of 25-hydroxy vitamin D3 maintained for five days. On day 10 and day 20 ewes which were injected with 25-hydroxy vitamin D3 still maintained plasma levels of 25-hydroxy vitamin D3 which were twice as high as those of ewes injected with vitamin D3. In six ewes injected with vitamin D3, a sharp increase in vitamin D3 level in milk occurred within one day and more than a tenfold elevation of milk vitamin D3 concentrations were maintained for ten days. By 20 days the milk vitamin D3 level had returned to preinjection levels. These observations suggest that indirect supplementation of the suckling ruminant with vitamin D3 may be achieved through maternal injection and subsequent mammary transfer.     

牛UCP3和MYH1基因启动子在C2C12和3T3-L1细胞中的启动活性分析

为阐明牛解偶联蛋白3（uncoupling protein 3,UCP3）和肌球蛋白重链1（myosin heavy chain 1,MYH1）基因启动子的核心区及其在小鼠C2C12和3T3-L1两种细胞株中的启动活性,本研究利用PCR、双荧光素酶和脂质体转染等方法进行关岭牛UCP3和MYH1基因启动子的扩增、重组载体构建和启动子活性分析。结果显示,试验成功构建了pGL3-Basic-UCP3-pro和pGL3-Basic-MYH1-pro重组真核表达载体,分别转染至小鼠C2C12和3T3-L1细胞后发现,UCP3、MYH1基因启动子的核心区分别为UCP3-P6（－385~+3 bp）和MYH1-P5（－255~+15 bp）区域;pGL3-Basic-MYH1-P2~pGL3-Basic-MYH1-P5在C2C12细胞中启动子活性均高于3T3-L1细胞,表明MYH1基因启动子活性在成肌细胞C2C12中较高。本研究阐明了UCP3和MYH1基因启动子的核心区及其启动子活性,为进一步研究UCP3和MYH1基因的转录调控机理提供了科学依据。     

雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白表达的影响

[目的]利用雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞进行刺激,检测与分析绵羊输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白表达的变化。[方法]以5代内的绵羊输卵管上皮细胞作为研究对象,通过qPCR及Western blot检测添加10-8 mol/L的雌二醇（以等量培养基替代雌二醇作为对照组）作用0、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 h后输卵管上皮细胞pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白的表达情况。[结果]在绵羊输卵管上皮细胞中添加10-8 mol/L雌二醇后,随着作用时间的延长,pik3r3、Akt、mapk3基因mRNA及蛋白的表达量整体呈先升高、后降低趋势。与作用0 h相比,pik3r3基因的mRNA表达量（P<0.01）及蛋白表达量（P<0.05）在雌二醇作用1.5 h时达到最高峰,Akt、mapk3基因的mRNA表达量（P<0.01）及蛋白表达量（P<0.05）在雌二醇作用2.5 h时达到最高峰。雌二醇作用3.0 h时,pik3r3、Akt、mapk3基因的mRNA表达量相比0 h都显著（P<0.05）提高。[结论]输卵管上皮细胞中pik3r3、Akt、mapk3基因的表达受到雌二醇调控。高浓度雌激素促进pik3r3、Akt、mapk3基因的高表达,这可能与生殖道的天然防御有关,并可能通过该途径提高机体自身免疫应答能力。