长寿花组织培养与人工种子的研究

笔者初步研究了长寿花人工种子的制备,包括胚性愈伤组织及胚状体的诱导、人工种子的包埋和萌发。胚性愈伤组织诱导的最适培养基为:MS+2,4 D2mg/L+BA0 2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L;胚状体诱导的最适培养基为:MS+BA2mg/L+NAA0 2mg/L+活性炭4g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L;用无激素MS培养基配制的4%海藻酸钠溶液包埋胚状体,并用2%的CaCl2·2H2O溶液作聚胶化因子,制成人工种子;将人工种子在无激素的MS固体培养基上萌发,萌发率达96%。利用石蜡切片法对胚状体的发生发育过程进行了观察。     

ABA和PEG对胡萝卜体细胞胚诱导和调控的影响

对 ABA和 PEG诱导胡萝卜 (Daucus carota L.)体细胞胚发生及其调控体细胞胚发育的效应进行了研究。在 MS液体培养基中 (含蔗糖 30 g/ L)附加 10 μm ol/ L ABA或 10 0 g/ L PEG6 0 0 0诱导体细胞胚 ,能使其提早发生 7～ 10 d,而且能使子叶胚处于调控状态。确定了 ABA和 PEG在 MS液体培养基中 (含蔗糖 10 g/ L)调控胡萝卜体细胞胚发育的下限浓度分别为 1μmol/ L ABA,2 0 0 g/ L PEG6 0 0 0 ,细胞学观察表明此种状态的胚缺乏营养。采用双向电泳分离出与 ABA和 PEG渗透调节密切相关的特异蛋白质多肽 S1 ,分子质量 2 7.9ku,等电点 6 .0左右     

平阳霉素对小麦幼胚愈伤组织发生及其植株再生的影响

本试验研究了不同浓度的平阳霉素对小麦幼胚离体培养条件下愈伤组织发生及植株再生的影响。结果表明:1.0～1.5mm长的幼胚,在MS+2,4—D2mg/L+NAAO.5mg/L+CH200mg/L固体培养基上,10～40μg/ml的平阳霉素可作为对小麦幼胚外植体离体培养时的适宜诱变浓度。     

西葫芦未受精子房离体培养的影响因素

【目的】探究西葫芦未受精子房离体培养的主要影响因素,以提高其胚状体诱导率和生根品质,增加再生植株数量,丰富西葫芦育种材料。【方法】以西葫芦"春玉一号"未受精子房为材料,分析MS、B5、N6和White 4种基本培养基的诱胚效果;在MS培养基中添加不同质量浓度的6-BA(0,0.5,1.0,2.0mg/L)和NAA(0,0.2,0.5,1.0mg/L),筛选2种激素的最佳组合;之后添加不同质量浓度的2,4-D(0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mg/L),筛选2,4-D的适宜质量浓度;在MS培养基中添加不同质量浓度的NAA(0,0.05,0.1,0.2,0.5,1.0mg/L),分析其对胚状体芽生根效果的影响。【结果】西葫芦未受精子房以MS为基本培养基时胚状体诱导率最高,为16.67%;在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA时的诱导效果最好,诱导率为19.76%;在MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA培养基中添加1.0mg/L 2,4-D可以加快胚珠膨大的速度,增加胚珠转绿的数量,但对出胚的提高效果不显著。MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA有利于提高胚状体芽的生根品质,且根系生长健壮。【结论】MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+1.0mg/L 2,4-D是西葫芦未受精子房离体培养中胚状体诱导的最佳培养基,MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂+0.1mg/L NAA是诱导其胚状体芽生根的较适宜培养基。     

抗性湿地松体胚的发育、成熟与萌发

为加快抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生技术的产业化应用进程,本研究以肌醇浓度、脱落酸(ABA)的添加方式、基本培养基、ABA与聚乙二醇(PEG6000)互作、PEG6000及琼脂糖种类及浓度、活性炭(AC)、ABA、液体悬浮培养等因素对抗性湿地松体胚的发育、成熟与萌发的影响进行研究。结果表明:添加8g/L的肌醇为宜,过高浓度的肌醇则不利于湿地松体胚的发育;ABA可以采用高压灭菌;基本培养基、ABA、PEG6000互作对湿地松体胚的成熟影响很大,基本培养基以LP为最佳,ABA的最适浓度为10mg/L,PEG6000以添加25g/L、50g/L为最佳;在湿地松体胚的成熟培养过程中,PEG6000的浓度不能高于100 g/L;在湿地松体细胞胚的成熟培养基中,添加60g/L蔗糖最合适;湿地松体细胞胚的成熟培养基中添加0.5g/L或1g/L的活性炭最有利于体胚的成熟;培养基的状态对体胚的高频率诱导具有一定的影响,悬浮培养以100mL的三角瓶装30mL的培养液,摇床转速以130r/min为宜,液体转固体时吸取1mL培养液为宜;未建立成熟的体胚发生体系前,以采用固体培养为佳。最佳成熟培养基、激素及部分添加物组合为LP+10mg/L ABA+50g/L PEG6000+60g/L蔗糖+1g/L活性炭。     

香樟子叶胚体胚发生诱导的研究

以香樟的子叶胚为外植体,以 MS 为基本培养基,研究不同植物生长调节剂组合对香樟子叶胚体胚发生诱导的影响。结果表明,配方 MS＋2,4 D 0·5 mg/L＋6 BA 1·0 mg/L＋水解酪蛋白（CH）1·0 g/L 对香樟子叶胚的体胚发生诱导率较高,诱导率为83·3％,平均体胚数为3·4枚,且生长状态较好;香樟体胚经萌发诱导处理后,萌发率可达48％。     

激素对小麦幼胚胚性无性系高频率诱导的影响

研究了 3种外源激素对 3个小麦品种 (系 )幼胚体细胞胚性无性系高频率形成的影响。结果表明 :2 ,4- D能显著促进小麦幼胚体细胞胚性无性系的形成 ,并存在着基因型间的差异 ,在小麦体细胞无性系形成中起主要作用。其最佳适用质量浓度为 2 .0～ 3.0 m g/ L ,2 ,4- D的这种作用能被培养基中加入的细胞分裂素所加强 ,这种作用在不同的细胞分裂素间是有差异的 ,在质量浓度 0 .1～ 2 .0 m g· L- 1 内 ,随 KT浓度的升高 ,6 - BA浓度的降低 ,胚性愈伤诱导率提高     

玫瑰叶片离体培养胚状体的发生

[目的]为玫瑰转基因提供基础物质。[方法]以玫瑰试管苗叶片为外植体,以MS为基本培养基,研究了不同浓度6-苄基腺嘌呤（6-BA）,腺嘌呤硫酸盐（Ad）,萘乙酸（NAA）及其组合对胚状体发生的影响,同时也进行了不同蔗糖浓度对胚状体形成的研究。[结果]6-BA对胚状体的诱导效果较Ad好,NAA与二者配合使用可提高胚状体的发生率,其最佳浓度组合为6-BA0．4mg／L＋Ad0．2mg／L＋N从0．2mg／L。蔗糖20-30g/L有利于胚状体的形成。其组织学观察表明,胚状体起源于叶片气孔附近的上表皮细胞或上表皮下方的叶肉组织细胞,为单细胞起源。[结论]玫瑰叶片诱导胚状体的最佳培养基为：1／2MS＋6-BA0．4mg／L＋Ad0．2mg／L＋NAA0．2mg／L＋蔗糖20～30∥L。     

外源添加物对西葫芦胚状体诱导效果研究

以6个基因型的西葫芦未授粉子房为试材,于MS培养基中分别添加不同质量浓度6-BA(1.0,1.5,2.0mg/L)和TDZ(0.04,0.05,0.06mg/L),筛选最适培养基与出胚材料;获得最适培养基后再分别添加不同质量浓度的NAA,AgNO3或相同质量浓度(20mg/L)秋水仙碱不同时间培养,分析其对西葫芦未授粉子房胚状体诱导的效果。结果表明:1西葫芦未授粉子房在培养基(P5)MS+30g/L Suc.+8g/L Agar+0.05mg/L TDZ上胚状体诱导效果最好,XH13-7为出胚率最高材料;2在P5培养基中添加0.25 mg/L NAA有利于出胚并可适当降低玻璃化率,胚状体诱导率高达10.53%;3添加20mg/L AgNO3显著减少胚状体玻璃化,对出胚影响不明显,玻璃化率仅为11.63%;4添加20mg/L秋水仙碱抑制胚状体发生。     

兴化龙香芋脱毒快繁组培技术体系的建立与优化

以兴化龙香芋茎尖为材料,通过设计L9(33)正交试验,以MS+30. 0 g/L蔗糖+6. 0 g/L琼脂为基本培养基,分别加入不同质量浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、噻苯隆(TDZ)、萘乙酸(NAA)和活性炭,进行兴化龙香芋脱毒快繁组培技术体系的研究。结果表明,兴化龙香芋愈伤组织的最佳诱导培养基为MS+0. 5 mg/L TDZ+1. 0 mg/L 2,4-D+0. 1 mg/L 6-BA+30. 0 g/L蔗糖,不定芽的最佳诱导培养基为MS+0. 5 mg/L TDZ+1. 0 mg/L 2,4-D+0. 1 mg/L 6-BA+30. 0 g/L蔗糖,不定芽增殖的最佳培养基为MS+1. 0 mg/L TDZ+1. 0 mg/L 2,4-D+0. 2 mg/L 6-BA+30. 0 g/L蔗糖,组培苗生根的最佳培养基为1/2 MS+0. 5 mg/L NAA+0. 1 mg/L 6-BA+0. 2 mg/L活性炭+30 g/L蔗糖。     

银杏幼胚培养的多因子正交试验研究

以MS为基本培养基,选用银杏幼胚为试验材料,采用L9(34)正交设计分析比较2,4-D(A因素)、6-BA(B因素)、酸水解酪蛋白(CH,C因素)3个因素及其组合对银杏幼胚愈伤组织诱导率、褐化率及生长量的影响。结果表明:2,4-D 1.0mg/L+6-BA 1.0mg/L+CH 500mg/L组合银杏的幼胚愈伤诱导率最高,为100%,同时该组合处理愈伤组织生长量也最大,增长倍数达8.11倍;而2,4-D 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L组合褐化率最高,为60.3%。经直观分析、方差分析和主因素效应的多重比较后认为,3个因素中,2,4-D对银杏幼胚愈伤诱导率及褐化率的影响最大,极差分别为74.196和63.702;CH对银杏幼胚愈伤生长量影响最大,极差为2.148。银杏愈伤组织诱导及生长的培养基最优组合为MS+2,4-D 1.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+CH 500mg/L。     

凤尾蕨科植物蜈蚣草的组织培养(英文)

[目的]对凤尾蕨科植物蜈蚣草的组织培养方法进行研究。[方法]以野外采集的叶芽为外植体,以1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂为基本培养基,通过激素配比试验,筛选蜈蚣草愈伤组织诱导和继代培养的培养基配方。[结果]从外植体诱导出愈伤组织最佳培养基配方为1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.5g/LPVP+0.1mg/LKT+0.5mg/L2,4-D;从愈伤组织诱导出GGB和从GGB诱导出幼苗最佳培养基配方为1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.5g/LPVP+1.0mg/LKT+0.01mg/L2,4-D;另外,使用1/2MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.5g/LPVP+0.5mg/L2,4-D做继代培养可以使愈伤组织持续增殖。[结论]研究直接使用野外材料组织培养,简化了试验步骤,是一种方便快速的蜈蚣草组培方法。     

凤尾蕨科植物蜈蚣草的组织培养

[目的]对凤尾蕨科植物蜈蚣草的组织培养方法进行研究。[方法]以野外采集的叶芽为外植体,以1/2 MS＋3%蔗糖＋0.7%琼脂为基本培养基,通过激素配比试验,筛选蜈蚣草愈伤组织诱导和继代培养的培养基配方。[结果]从外植体诱导出愈伤组织最佳培养基配方为1/2 MS＋3%蔗糖＋0.7%琼脂＋0.5 g/L PVP＋0.1 mg/L KT＋0.5 mg/L 2,4-D;从愈伤组织诱导出GGB和从GGB诱导出幼苗最佳培养基配方为1/2MS＋3%蔗糖＋0.7%琼脂＋0.5 g/L PVP＋1.0 mg/L KT＋0.01 mg/L 2,4-D;另外,使用1/2 MS＋3%蔗糖＋0.7%琼脂＋0.5 g/L PVP＋0.5 mg/L 2,4-D做继代培养可以使愈伤组织持续增殖。[结论]研究直接使用野外材料组织培养,简化了试验步骤,是一种方便快速的蜈蚣草组培方法。     

玉米自交系幼胚再生体系建立的研究

[目的]探索出玉米高频诱导具有胚性的愈伤组织和植株再生的条件。[方法]以玉米自交系幼胚为外植体,研究了不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导、6-BA浓度对试管苗分化以及IBA浓度对试管苗生根的影响。[结果]2,4-D对玉米胚性率诱导有明显影响,其最佳诱导培养基为N6＋2,4-D 2 mg/L＋水解酪蛋白（CH）500 mg/L＋脯氨酸（pro）500 mg/L＋AgNO310 mg/L;试管苗分化适宜的培养基是N6＋6-BA 0.5 mg/L＋水解酪蛋白500 mg/L;试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS＋IBA 0.5 mg/L。[结论]该研究可为玉米抗病基因的遗传转化和优良抗病玉米品种的培育奠定基础。     

北美蓝云杉体细胞胚发生技术研究

研究北美蓝云杉体细胞胚发生技术,对该树种的胚胎发生机理和建立相关的快繁技术体系等具有一定的理论意义。以成熟胚为外植体,分别对基本培养基、生长调节剂种类和浓度对其体细胞胚发生各阶段的影响进行了研究,同时观察体细胞胚发生过程的形态特征。结果表明:1)胚性愈伤组织诱导培养基,首先在DCR培养基+2,4-D5.0mg/L+6-BA4.0mg/L+KT2.0mg/L诱导15d后,之后转入DCR培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L,胚性愈伤诱导率最高为45.3%;2)胚性愈伤组织保持与增殖培养基为1/2LM培养基+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.5mg/L+KT0.5mg/L+PEG40001.0g/L,胚性愈伤组织增殖率最高为102.27%;3)IBA可促进成熟体细胞胚的诱导,以1/2LM+IBA0.5mg/L+ABA2.0mg/L(以上4种培养基均附加蔗糖30g/L,谷氨酰胺450mg/L,水解酪蛋白500mg/L,琼脂5.0g/L,pH=5.8)的体细胞胚诱导率最高,为38.10%;4)在1/2MS+1.0g/L活性炭的培养基上,体细胞胚萌发,子叶生长但胚根发生较少。北美蓝云杉体细胞胚诱导过程中出现严重的畸形胚现象及生根难的问题,今后有待进一步研究。     

植物生长调节剂不同浓度配比对金发藓原丝体发育的影响

以金发藓（Polytrichum commune Hedw.）为供试藓种,MS液体培养基为培养基质,在培养基质中分别添加两种植物生长调节物质6-BA和2,4-D的9种浓度配比,以不添加植物生长调节剂的MS培养基为对照,探索植物生长调节剂对金发藓原丝体各项生长指标的影响机理。在金发藓原丝体发育阶段,6-BA浓度为0.5 mg/L和2,4-D浓度为1.0 mg/L的处理时,对原丝体主枝的生长发育效果最好,且对原丝体分枝的抑制作用最小,因此金发藓原丝体发育的最佳培养基为：MS（液）＋0.5 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L 2,4-D＋1%蔗糖。     

湿地松器官性愈伤组织诱导与增殖

以湿地松成熟合子胚、胚苗顶芽、下胚轴、胚根为外植体,选用DCR,LP,TX3种培养基,与不同浓度NAA,2,4-D及6-BA组合,研究其器官性愈伤组织诱导、增殖培养的最适条件．结果表明：成熟合子胚、胚苗顶芽是诱导器官性愈伤组织理想的外植体,最佳诱导培养基为TX＋BA0．5mg／L＋NAA2．0mg／L＋30g／L蔗糖,诱导率达50％以上;最佳增殖培养基为TX＋BA0．3mg／L＋NAA 1．0mg／L＋CH 400mg／L＋30g／L蔗糖,继代周期25-30d,增殖率达3．46．     

不同激素配比对南非叶叶片愈伤组织诱导的影响

南非叶是热带地区一种重要的中草药材,主要以扦插繁殖为主,为拓宽繁殖途径,实验以南非叶外植体叶为材料,以不同激素浓度配比诱导其愈伤组织,筛选最佳诱导浓度组合。结果表明:(1)NAA和6-BA各5个浓度梯度组合中,1.5 mg/L NAA+1.5 mg/L 6-BA+0.5 g/L活性碳愈伤组织诱导率最高,为88.3%。即当6-BA为定量时,随着NAA浓度的增加,诱导率也逐渐提高;当NAA浓度为1.5 mg/L时,诱导率达到最佳效果,如继续增加NAA的浓度反而会下降。如单独使用6-BA时,则外植体不分化。(2)在NAA和2,4-D组合中,1.5 mg/L NAA+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 g/L活性碳愈伤组织诱导率最高,达95%。当2,4-D浓度大于0.5 mg/L,单独使用时,外植体也可诱导分化,增殖效果随着2,4-D浓度的增加而增加。     

桃砧木GF677叶片愈伤组织诱导和保存

[目的]研究桃砧木GF677(Prunus amygdalus×Prunus persica)叶片愈伤组织的诱导和保存技术。[方法]以桃砧木GF677试管苗为材料,研究激素含量、基本培养基、AgNO3、暗培养时间、碳源等因素对其叶片愈伤组织诱导和保存的影响。[结果]选取继代时间为28 d左右的试管苗幼嫩叶片,暗培养21 d后转移至光培养进行愈伤组织诱导,较佳的培养基配方为LP基本培养基+TDZ 1.0 mg/L+6-BA 0.6 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+AgNO30.5 mg/L,添加山梨醇20.0 g/L,琼脂6.0 g/L;选取继代时间为21 d左右的愈伤组织暗培养保存,保存较佳的培养基配方为LP基本培养基+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+CH 0.2 g/L,添加蔗糖30.0 g/L,琼脂6.0 g/L。[结论]为桃砧木GF677的遗传转化和无性系变异筛选等工作奠定了基础。     

萝卜诱导愈伤组织的影响因素

以萝卜种子为试材,研究了不同外植体、不同激素、不同激素浓度及继代培养对萝卜外植体形成愈伤组织的影响。结果表明:(1)诱导萝卜愈伤组织最好的外植体为子叶。(2)不同的生长素诱导效果不同,诱导效果为NAA>2,4-D>IBA;(3)萝卜子叶和下胚轴诱导愈伤组织的最佳初代培养基均为MS 3 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。(4)继代培养能促进愈伤组织的形成,子叶和下胚轴的最佳继代培养基分别为:MS 6 mg/L6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂和MS 4 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA 3%蔗糖 0.8%琼脂。