猪瘟荧光抗体的制备及其在自然感染病例中的应用

用硫酸铵盐析法从抗猪瘟高免血清中提取免疫球蛋白，应用搅拌标记异硫氰酸荧光素（FITC），葡聚糖凝胶G-25层析除去标记物中游离的荧光素，制备出猪瘟荧光抗体（CSF—FA）。经测定．标记荧光抗体的染色效价为1：4。用此浓度荧光抗体，结合常规诊断检测猪瘟，从33例采自陕西省不同地区自然发病猪的扁桃体中检出猪瘟阳性病例7份，阳性率21．3％（7／33）。结果表明，制备的荧光抗体诊断猪瘟敏感性高、特异性强；陕西省猪瘟自然感染发病率高。     

猪瘟荧光抗体的制备及应用评价

制备猪瘟荧光抗体并用于猪只活体扁桃体组织抹/涂片检测。将制备的猪瘟高免血清采用硫酸铵分级沉淀法纯化免疫球蛋白,反向透析法标记荧光素,过葡聚糖凝胶柱(Sephadex G-50)去除游离荧光素,通过扁桃体组织匀浆吸附去除异嗜性或交叉反应抗体。以5?S做稀释液,以RT-PCR检测阳性样本的冰冻切片确定其最大稀释度为1/60,最佳工作浓度为1/30,阻抑试验证明荧光为特异荧光。用标记的荧光抗体检测活体扁桃体样本39份,检出阳性11份,与IDEXX猪瘟抗原检测试剂盒复核结果完全吻合。结果表明,本实验所制备的猪瘟荧光抗体具有很高的灵敏性和特异性,可用于猪瘟净化中扁桃体组织抹/涂片检测。     

猪瘟三种快速诊断方法的比较

本试验运用电镜负染、荧光抗体染色、间接－ELISA三种方法对新疆南疆地区收集的7份猪瘟RT－PCR阳性病料进行了检测，发现：电镜负染法检出阳性病料2份，荧光抗体染色法检出阳性病料6份、间接－ELISA法检出阳性病料6份。结果表明荧光抗体染色、间接－ELISA都有很好的敏感性和特异性，其中间接－ELISA法可作为基层对猪瘟进行快速诊断的首选方法。     

猪瘟病毒胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

为建立一种猪瘟病毒的快速检测方法，采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金，选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体，对胶体金标记抗体采用低温超速离心法进行纯化，组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测，同时用直接荧光抗体试验和RT—PCR做平行试验。结果显示，用试纸条检测猪瘟病毒，10min左右即可显示结果，试纸条、直接猪瘟荧光抗体试验和RT—PCR的阳性检出率依次为36．36％（4／11）、45．45％（5／11）和72．72％（8／11）。表明，用胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟病毒操作简便，需时短，可以用于猪瘟的流行病学调查。     

犬瘟热荧光抗体技术的应用研究

用硫酸铵盐析法和蔗糖梯度离心法，从犬瘟热病毒人工感染犬的肝，脾中浓度提纯犬瘟热病毒，以其免疫家兔，制备兔抗犬瘟热病毒免疫血清，再经硫酸铵沉淀与ＱＡＥ－葡聚糖凝胶Ａ５０层析提取ＩｇＧ，于４℃低速搅拌标记异硫氰酸荧光素，制成兔抗犬瘟热病毒抗原荧光抗体。用上述荧光抗体检测２１只犬瘟热病毒人工感染犬和３５只自然感染犬的１１６份白细胞，抗原阳性１０９份，而健康犬，传染性肝炎犬，犬细小病毒肠炎犬的３７份血液白     

鸡传染性喉气管炎病毒的荧光抗体检测

建立了一种鸡传染性喉气管炎(ILT)的荧光抗体检测技术，用荧光素标记ILT兔源超免疫血清抗体，对15份人工感染ILT病鸡、5份ND病鸡和10份健康鸡的气管分泌物进行了检测，并对该技术做了特异性和敏感性测定。结果显示，人工感染ILT病鸡的阳性检出率高达100％，ND病鸡和健康鸡的阳性检出率均为0；该ILT兔源超免疫血清荧光抗体检测技术特异性强、敏感性高。     

猪流行性腹泻病毒荧光抗体的制备及应用

本研究旨在建立一种可辅助猪流行性腹泻病毒（PEDV）分离鉴定的直接荧光抗体检测方法。借助基因工程技术融合表达PEDV S1基因中和抗原表位区域（COE）,层析柱法纯化兔源免疫球蛋白IgG,搅拌法标记荧光素。通过Western blotting和动物免疫试验测定表达融合蛋白的抗原性,间接ELISA方法测定免疫后的抗体效价,直接免疫荧光法测定标记荧光抗体的特异性,梯度稀释方法测定标记抗体的最佳工作浓度。结果显示,本研究成功将423 bp的S1基因中和抗原表位COE进行融合表达,表达蛋白大小约40 ku,蛋白命名为pGEX-6P/COE;Western blotting检测结果表明,融合蛋白具有良好的反应原性;ELISA检测结果显示,免疫后35 d的血清抗体效价达1：25 600;与猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）、猪瘟病毒（CSFV）及猪细小病毒（PPV）等均无非特异性反应,标记的荧光抗体具有良好的特异性,最佳工作稀释度为1：32~1：64。综上所述,本试验制备的直接免疫荧光抗体可用于细胞平台上的PEDV快速检测,能直观地提供相关检测数据,对于病毒分离过程的取舍具有重要指导意义。     

用于检测猪瘟抗体的免疫金标试纸条的研制与应用研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜的检测区，在其下端附着胶体金标记的猪瘟抗原，组成免疫金标试纸条，根据胶体金免疫层析原理，用该试纸条建立检测猪瘟抗体水平的免疫金标检测法。再用本试纸条检测法与Dot-ELISA及间接血凝法对298份猪、鸡、鸭、鹌鹑、兔、鼠、羊血清进行猪瘟抗体检测，结果符合率达100%。试验结果表明，本法与Dot-ELISA及间接血凝法一样特异、敏感和微量，而且检测时间短、直观，结果容易判定，适用于大面积猪瘟抗体监测普查。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

猪瘟野毒感染抗体阻断ELISA检测方法的建立与初步评价

以猪瘟野毒E2蛋白为包被抗原、辣根过氧化物酶标记的猪瘟野毒单抗作为酶标抗体,建立检测猪瘟野毒抗体的阻断ELISA方法.猪瘟野毒E2最适包被浓度为0.03 μg/mL,待检血清最适稀释度为1∶4,酶标猪瘟野毒单抗稀释度为1∶1 000.用建立的阻断ELISA方法检测369份临床阴性血清,计算阻断率,确定临界值,阻断率＞4...     

应用荧光抗体法诊断猪瘟的研究 Ⅰ 对人工感染猪瘟猪扁桃体冰冻切片荧光抗体法诊断的研究

Solorzand(1962)首先提出用荧光抗体法诊断猪瘟,认为此法不仅敏感,而且特异性亦高。1963年Stair,1964年Aikenct等应用组织切片和压片做了猪瘟荧光抗体法的研究。1963年Mengeling等应用猪肾继代细胞(РК—15)进行了猪瘟荧光抗体的研究。1969年须原贤治等报导了应用扁桃体冰冻切片荧光抗体染包诊断猪瘟的方法。目前,美、日、法、荷等国均已广泛采用荧光抗体法做为常规的猪瘟诊断方法。荧光抗体     

用自制荧光抗体检测湖羊传染性胸膜肺炎

为实现对湖羊传染性胸肺炎病的准确快速诊断而建立的荧光抗体诊断法,通过利用核酸蛋白检测仪,用G50过滤提取IgG,并用荧光素进行标记,制备出了湖羊传染性胸膜肺炎荧光抗体,同时用培养法、乳胶平板凝集法、间接血凝法对荧光抗体法进行了验证,表明该方法能在较短时间内对湖羊支原体肺炎做出准确诊断,与其他病之间无交叉反应,具有快速、准确、特异性高的特点。     

猪瘟兔化弱毒疫苗的临床试验

1效力 用我国生产的猪瘟兔化弱毒牛睾丸细胞苗免疫无猪瘟抗体及抗原的易感猪，每头皮下注射1头份，14天后分别攻击猪瘟野毒，每头皮下注射猪瘟血毒2毫升。结果表明，猪瘟弱毒细胞苗对9株野毒均具有坚强的保护力，免疫组100％保护，对照组76．5％死亡。以猪瘟荧光抗体法（HCFA）检查，     

猪流行性腹泻病毒荧光抗体的制备及应用

本研究旨在建立一种可辅助猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离鉴定的直接荧光抗体检测方法。借助基因工程技术融合表达PEDVS1基因中和抗原表位区域(COE),层析柱法纯化兔源免疫球蛋白IgG,搅拌法标记荧光素。通过Western blotting和动物免疫试验测定表达融合蛋白的抗原性,间接ELISA方法测定免疫后的抗体效价,直接免疫荧光法测定标记荧光抗体的特异性,梯度稀释方法测定标记抗体的最佳工作浓度。结果显示,本研究成功将423bp的S1基因中和抗原表位COE进行融合表达,表达蛋白大小约40ku,蛋白命名为pGEX-6P/COE;Western blotting检测结果表明,融合蛋白具有良好的反应原性;ELISA检测结果显示,免疫后35d的血清抗体效价达1∶25 600;与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪细小病毒(PPV)等均无非特异性反应,标记的荧光抗体具有良好的特异性,最佳工作稀释度为1∶32~1∶64。综上所述,本试验制备的直接免疫荧光抗体可用于细胞平台上的PEDV快速检测,能直观地提供相关检测数据,对于病毒分离过程的取舍具有重要指导意义。     

直接免疫荧光检测禽呼肠孤病毒方法的建立

本研究利用经纯化的原核表达禽呼肠孤病毒(ARV)结构蛋白σ3作为免疫抗原,免疫兔子三次,血清效价达到27时采血分离血清.用硫酸铵沉淀法浓缩纯化血清中的IgG,纯化的IgG用荧光素FITC加以标记.利用制备的荧光标记特异性抗体和对反应条件进行优化,建立了表达σ3蛋白荧光抗体检测ARV的诊断方法.结果经纯化获得特异性抗ARV结构蛋白σ3的荧光标记IgG抗体.用标记的抗体检测ARV病毒感染的单层细胞,出现特异性的荧光.用建立的σ3-FA方法检测接种疑似ARV感染的病料的鸡胚原代成纤维细胞,检出的阳性样品与病毒分离结果一致.表明本研究建立的σ3-FA方法检测ARV病毒有较好的特异性,可用于ARV感染的临床样品检测.     

某猪场猪瘟强毒、弱毒抗体水平的检测

应用猪瘟单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验方法，对河南某猪场47份母猪血清进行猪瘟抗体检测，有5份血清呈猪瘟强毒抗体阳性，阳性率为10.6%，猪瘟弱毒抗体阳性率为95.7%，其群体保护率为93％。在9份仔猪血清中，猪瘟强毒抗体为阴性，猪瘟弱毒抗体阳性率为22％，只有17％的群体保护率。检测结果表明：该猪场可能有猪瘟强毒感染。     

IBDV强毒株与弱毒株对SPF鸡侵染过程的研究

用DIG标记PS19探针和异硫氰酸荧光素标记的鸡抗IBDV IgG，对人工接种IBDV强毒株Hrb和弱毒细胞适应株Ts后不同时间段的法氏囊、盲肠扁桃体、脾、肾、肝、胸腺、大腿及胸部肌肉的石蜡切片分别进行原位杂交和荧光抗体检测。同时将各时间段每种组织的石蜡切片进行HE染色以观察组织破坏情况。结果发现，用原位杂交和荧光抗体两种方法首先分别于接种Hrb后8h和16h在法氏囊中检测到IBDV的阳性信号，然后依次是盲肠扁桃体、脾、肾、肝、胸腺。侵害程度以法氏囊最重。实验结果表明：Hrb毒株在组织中复制速度快，并迅速在SPF鸡体内传播。Ts毒株侵染较轻，对器官组织无损伤。     

供快速检测猪瘟抗体的酶标抗体试验(ELA)的建立和评价

好些作者已认为酶标记抗体可以用于疾病的血清学诊断。本文描述为美国农业部动植物检疫总所(APHIS,USDA)建立的快速筛选程序作为检测猪瘟抗体之用。酶标抗体试验(ELA)的原理与间接荧光抗体试验(IFA)相似。它是用一种抗品种IgG共价结合于辣根过氧化物酶,代替用不同荧光化合物所标记的     

疑似猪瘟病料猪伪狂犬病的检测

本试验利用荧光抗体法和乳胶凝集试验对来自新疆境内的20份疑似猪瘟病料和230份血清进行检测。结果在疑似猪瘟病料中15份猪瘟阳性,6份为猪伪狂犬病阳性,其中4份呈双阳性。230份血清中,猪伪狂犬病中检测,25份阳性,阳性率11%,结果提示:新疆区域内猪伪狂犬病的存在及感染情况应引起重视。     

大通县猪瘟防治工作通过“稳定控制县”的考核验收

大通县猪瘟防治工作于１９９９年６月２４日经省、市有关部门领导和专家考核，通过了猪瘟防治达到“稳定控制县”标准的验收。现就其考核验收结果报告如下：１　考核方法：按照青牧医（１９９９）１３４号文《青海省猪瘟防治考核验收办法》中规定的要求方法进行。２　考核结果：１９９６～１９９８年连续三年全县未发生猪瘟。猪三联苗预防注射密度三年平均为９７４７％。三年之中用猪瘟荧光抗体试验检验疑似病死猪肾脏１４２份，结果均为阴性。１９９６～１９９８年用ＥＬＩＳＡ试验检测免疫３０～４０日后的猪血清３６４份，其免疫抗体阳…