人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理初探

以不同浓度的人参总皂苷与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖抑制作用,并通过琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理。实验结果表明:人参总皂苷对MSB-1细胞的增殖存在抑制作用,并呈剂量-时间依赖性,人参总皂苷与MSB-1细胞培养72 h后的半数抑制浓度为:340.41μg/mL,其95%可信限为:(340.41±33.7)μg/mL。流式细胞术测定表明,人参总皂苷抑制了MSB-1细胞DNA的合成。琼脂糖凝胶电泳分析、荧光检测和透射电镜观察表明,人参总皂苷可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡。     

马立克病肿瘤细胞系MSB-1的致病性研究

鸡马立克病(Marek's disease,MD)是由马立克病病毒(Marek's disease virus,MDV)引起的一种淋巴细胞增生性传染病.MD作为研究病毒性肿瘤发生、发展和免疫的重要动物模型为我们提供了利用自然宿主来研究淋巴瘤形成的各个方面的机会,同时MD也是世界上第一个能用疫苗预防的肿瘤病,在兽医学、基础科学和比较肿瘤学的研究方面已做出了重要贡献.MSB-1就是从鸡马立克病淋巴瘤建立起来的细胞系,试验通过接种MSB-1细胞于易感鸡群,对MSB-1细胞的致病性进行研究,旨在为进一步利用该细胞系探讨MDV的致瘤机理提供依据.     

人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用及其机理

以不同质量浓度的人参皂苷Rh2与马立克氏病肿瘤细胞系MSB-1细胞共同作用,利用改良MTT法测定了人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖抑制作用,并通过流式细胞术、荧光检测和电镜形态学观察等方法探讨其抑制机理.结果显示:人参皂苷Rh2对MSB-1细胞的增殖存在押制作用,并呈剂量依赖性,人参皂苷Rh2与MSB-1细胞培养72 h后的半敷抑制质量浓度为0.65 mg/L;流式细胞术测定表明,人参皂苷Rh2可阻滞MSB-1细胞于S期;荧光检测和透射电镜观察表明,人参皂苷Rh2可以诱导部分MSB-1细胞发生凋亡.     

人参总皂苷及其衍生物抗Ⅰ型马立克氏病毒作用的电镜观察

应用透射电镜负染技术，观察人参总皂苷及其衍生物对Ⅰ型马立克氏病毒（MDVI）作用后病毒颗粒结构改变情况，旨在深入探讨人参总皂苷及其衍生物抗MDV的作用机理。结果显示，病毒颗粒变形，大小不均匀．核心缺损或均质化，包膜裸露或破损以及病毒颗粒凝集融合成块，结构模糊不清。在相同条件下衍生物比人参总皂苷对MDV的破坏作用强。提示人参总皂苷及其衍生物在体外对MDVⅠ（MDV—Ⅰ）病毒颗粒的形态结构、表面成分和分散均有破坏作用，而衍生物作用更加显著。     

细胞病变观察法检测人参皂苷及其衍生物抗马立克氏病病毒的作用

为探讨人参皂苷及其衍生物体外抗马立克氏病病毒的作用机理,采用体外细胞培养法,在药物安全浓度范围内,测定人参皂苷及其衍生物对马立克氏病病毒(MDV)感染鸡胚成纤维细胞(CEF)的保护效果。结果显示,修饰前的人参皂苷和修饰后的衍生物7具有较好的抗病毒效果。表明人参皂苷和衍生物7可以减轻病毒对CEF细胞的损伤程度。     

潜伏期马立克氏病病鸡血清型病毒L-meq、meq基因的比较及遗传分析

从潜伏期感染马立克氏病病毒(MDV)鸡淋巴组织中提取基因组DNA,采用梯度PCR的方法获得MDV的L-meq、meq基因,将其插入pMD18-T克隆载体,经测序并进行了序列分析。结果表明,L-meq、meq基因同源性很高,L-meq中只有180bp与meq不同。但是采用同样的方法在发病期病鸡淋巴组织中却只能获得MDV的meq基因。为了进一步研究发病期L-meq基因消失的原因,试验对L-meq、meq基因的氨基酸序列的结构域进行了分析。结果表明,L-meq基因中含有9个PRR(proline-rich-reapts)区域,meq中含有6个PRR区域,从而推断PRR区域可能与基因的转录激活及调控病毒DNA复制的功能有关,该180bp插入序列也许能解释初期感染MDV不致瘤的原因,同时也意味着L-meq基因对于潜伏期的维持是必要的。     

马立克氏病病毒致瘤基因meq功能研究的概述

马立克氏病病毒 (Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＭＤＶ)之众多已得到鉴定的基因中 ,目前有 3个基因即 132 ｂｐｒ、ｐｐ38、ｍｅｑ被认为可能与致瘤相关。其中 ,ｍｅｑ与 132 ｂｐｒ两个基因是ＭＤＶ 1所特有 ,已证实 132 ｂｐｒ的拷贝数与毒株的致弱程度有关 ,ｐｐ38则被证实可抑制机体的免疫应答。ｍｅｑ基因由于具有与致瘤基因ｊｕｎ/ ｆｏｓ家族类似的分子结构 ,因此 ,我们有理由认为ｍｅｑ基因在ＭＤＶ致病、致瘤中可能发挥重要的作用。本课题在国家自然科学基金和广西自然科学基金的资助下 ,历经 5年由三个单位共同攻关…     

人参皂苷及其衍生物抗马立克病病毒作用的超微结构和病理变化观察

为了探讨人参皂苷及其衍生物抗马立克氏病病毒的作用机制.采用马立克氏病毒感染的雏鸡作为模型,人参皂苷及其衍生物口服给药途径,动态观察不同时间段,试验鸡的器官病理变化和脾脏、法氏囊的组织超微结构改变.结果发现人参皂苷及其衍生物组的器官病变程度明显低于病毒对照组,法氏囊和脾脏的超微结构病变轻于病毒对照组,说明人参皂苷及其衍生物在体内可以通过保护机体免疫器官来发挥抗病毒作用.     

人参皂苷及其衍生物抗马立克氏病毒的作用

用马立克氏病毒(Marek′s disease virus,MDV)人工感染雏鸡为疾病模型,采取人参皂苷及其衍生物口服,通过间接免疫荧光试验动态观察人参皂苷及其衍生物能否减少MDV抗原在组织中的分布。结果人参皂苷组、衍生物组被检组织的阳性细胞数量明显比盐酸吗啉胍阳性对照组被检组织的阳性细胞数量少。表明人参皂苷及其衍生物抗MDV效果要优于盐酸吗啉胍。     

人参皂苷及其衍生物体内抗鸡马立克氏病毒的病理组织学观察

为探讨人参皂苷及其衍生物体内抗马立克氏病毒的作用机理,试验用马立克氏病毒人工感染雏鸡模型,口服人参皂苷及其衍生物,动态观察雏鸡的组织病理学变化,并比较治疗组和病毒对照组的病变差异.结果人参皂苷和衍生物治疗组的组织结构病变程度均低于病毒对照组.说明人参皂苷及其衍生物可以降低病毒对组织的损害程度,增强雏鸡对病毒的抵抗力.     

人参总皂苷及其衍生物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

探讨人参总皂苷及其衍生物对小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响。采用中性红试验和MTT法分别测定总皂苷及其衍生物对巨噬细胞吞噬中性红作用及其代谢功能的影响。结果显示,总皂苷及其衍生物浓度在试验范围内时小鼠巨噬细胞吞噬中性红及其代谢功能均有不同程度的促进作用．而衍生物的促进作用更强,且对巨噬细胞的细胞毒性明显降低。提示衍生物对巨噬细胞的免疫活性优于总皂苷。     

硫酸化人参总皂苷的制备及其对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响

用氯磺酸-吡啶试剂制备了硫酸化人参总皂苷衍生物，采用红外光谱仪检测到制备的硫酸化人参总皂苷衍生物中在1230cm^-1和810cm^-1有硫酸酯键的特征吸收峰。为了初步探讨硫酸化人参总皂苷的免疫学活性．以MTT法测定了人参总皂苷及其衍生物对鸡外周血淋巴细胞增殖的影响。结果表明，150μg／m1人参总皂苷和衍生物均能显著抑制鸡外周血淋巴细胞的增殖（P〈0．05），10μg／ml的衍生物能极显著促进淋巴细胞增殖，与同浓度人参总皂苷相比活性极显著增强（P〈0．01）。实验结果提示，对人参总皂苷进行硫酸化修饰是可行的，经硫酸化后人参总皂苷衍生物的免疫活性明显增强。     

人参总皂苷硫酸化修饰及分析

文献表明糖链在人参皂苷(ginsenoside,GS)的构效关系中占有重要地位[1],一些学者发现GS酶解后生成的脂肪酸酯类化合物[2-3]具有更强抗癌活性,本课题前期工作证实对人参总皂苷(TSPG)进行硫酸(酯)化修饰是可行的,且TSPG经硫酸化修饰后体外对淋巴细胞的增殖活性有促进作用.     

人参总皂苷及其衍生物对小鼠淋巴细胞和NK细胞免疫活性的影响

为了提高人参总皂苷的生物学活性,对其进行了硫酸化修饰,并探讨总皂苷及其衍生物对小鼠脾T、B淋巴细胞增殖（MTT法）和NK细胞杀伤活性（乳酸脱氢酶释放法）的影响。结果表明,2种衍生物质量浓度在50～500 mg/L时可以促进小鼠脾T、B淋巴细胞的分化增殖和NK细胞对YAC-1的杀伤作用,质量浓度较高时促进作用明显优于总皂苷;衍生物质量浓度达到1 400 mg/L时,仍然可以显著促进T淋巴细胞的增殖。试验结果提示,人参皂苷的这种衍生物有可能成为一种毒副作用较小、免疫活性更强的药物。     

硫酸化人参总皂苷体外对免疫活性细胞功能的调节

采用MTT法及形态学观察法研究4种硫酸化人参总皂苷衍生物对体外ConA促淋巴细胞增殖、转化的影响,并采用乳酸脱氢酶释放法探讨了其对NK细胞杀伤活性的影响.结果表明,人参总皂苷对淋巴细胞增殖影响不明显,较高质量浓度(>150 mg/L)能抑制淋巴细胞增殖(P<0.01);硫酸化人参总皂苷衍生物2、3在一定质量浓度下都能明显或极明显增加淋巴细胞(鸡的外周血淋巴细胞,小鼠脾淋巴细胞)增殖活性(P<0.05,P<0.01),且所试质量浓度硫酸化人参总皂苷衍生物的D值显著或极显著高于同质量浓度人参总皂苷(P<0.05.P<0.01);人参总皂苷、衍生物2、3都能提高小鼠NK细胞的活性(P<0.01),且衍生物2、3的作用比人参总皂苷更强(P<0.05,P<0.01).结果提示,人参总皂苷经硫酸化修饰后,在体外能明显增强免疫活性细胞功能.     

草原红牛CAPN1基因mRNA表达特性分析

为了进一步揭示CAPN1的功能,本研究采用实时荧光定量PCR技术对草原红牛初生牛与成年牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、瘤胃、十二指肠、背最长肌8种组织中的CAPN1mRNA表达水平进行了分析。结果表明：CAPN1基因在组织中普遍表达,但表达量存在差异。且成年牛的CAPN1基因在肺脏和瘤胃组织中的表达显著高于初生牛（P〈0.05）,成年牛在肝脏、脾脏、肾脏和背最长肌组织中CAPN1基因的表达水平极显著高于初生牛（P〈0.01）。     

Radioprotective effects of an acidic polysaccharide of Panax ginseng on bone marrow cells

An acidic polysaccharide of Panax ginseng (APG), so called ginsan is known to have important immunomodulatory activities. It was recently reported that APG has radioprotective effects in mice but the detailed mechanism was not fully elucidated. This study examined the effects of APG on bone marrow cells (BMs). The phenotypical and functional changes in APG-treated BMs after gamma radiation were studied. The benefit of APG on BMs damaged by gamma radiation was determined by measuring the cell viability. Using 2 different assays, a pretreatment with APG significantly increased the viability of BMs against gamma radiation. APG-treated BMs had a significantly higher amount of IL-12, which is a major cytokine for immune responses, compared with the medium-treated BMs. The expression of MHC class II molecules of APG-treated BMs was also increased, and APG-treated BMs showed significantly higher levels of allogeneic CD4⁺ T lymphocyte proliferation. Furthermore, APG-treated mice had a larger number of BMs after gamma radiation than the control mice, and the BMs of APG-treated mice were successfully cultured into dendritic cells, which are the representative antigen-presenting cells. Overall, this study shows that APG alters the phenotype of BMs, increases the viability and alloreactivity of BMs after gamma radiation both in vitro and in vivo. Therefore, APG may be a good candidate radioprotective agent for BMs.