一株野生蘑菇的鉴定

对实验室分离获得的一株野生蘑菇G1菌株进行了初步鉴定。传统形态学观察结果表明,G1菌株子实体菌盖白色,直径2.1~5.6 cm;菌柄粗0.6~1.0 cm,呈中央着生,菌柄和菌褶基端分离;在菌柄上部有单层菌环;有隔菌丝,菌丝体上无锁状联合;一个担子上普遍着生2个担孢子,孢子椭圆形、棕色,孢子的大小为(5.52~6.12)μm×(5.02~5.47)μm。根据形态学特征初步鉴定,G1菌株为蘑菇属双孢蘑菇(Agaricus bisporus)。由Gen Bank数据库进行同源性检索比对可知,G1菌株的ITS(Internal transcribed space)序列与双孢蘑菇的ITS序列同源性最高,为95%。综合形态学观察结果和ITS序列分析结果,最终鉴定G1菌株为双孢蘑菇。     

油茶茶苞病菌的分离与鉴定

采用形态学和分子生物学相结合的方法,对油茶茶苞病菌进行了分离鉴定。结果表明:油茶茶苞病菌担子圆筒形或棍棒形,无色,顶生2～4个小梗;担孢子单孢,无色,倒卵圆形或椭圆形,(9.9～22.3)μm×(4.5～7.4)μm;PDA培养基上菌落正面乳白色至茶黄色,背面茶黄色,生长缓慢,以微循环产孢方式繁殖生长;经rDNA-ITS序列分析,该真菌与Genbank中细丽外担菌(Exobasidium gracile)的同源性达99%。结合形态学特征,确认该病原菌为细丽外担菌(Exobasidium gracile)。     

云南省河口县香蕉枯萎病病原菌的分子鉴定及耐热性研究

为明确云南省红河州香蕉枯萎病病原菌的分类地位,从香蕉茎部分离纯化了疑似病原菌,经致病性测定后,采用ITS序列和形态相结合对分离的病原菌进行了鉴定。结果表明,从红河州香蕉枯萎病病原菌扩增了约700 bp片断,经序列分析该菌与尖孢镰刀菌的菌株Fusarium oxysporum K9,Fusarium oxysporum HLJ_10,Fusarium oxysporum strain TBCui等菌株的相似性均为99%。形态鉴定结果显示该菌菌丝有隔,孢子为镰刀状。结果证明该菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的菌株。     

灰树花的分离与鉴定

采用形态学和分子生物学相结合的方法,对采集自贵州省惠水县的一株担子茵进行鉴定.结果表明:该担子菌担子果有柄,担孢子卵圆形或椭圆形,单胞,透明(5.2～7.6)μm×(3.5～4.5)μm;茵丝无色至淡黄色,少分支;PDA培养基上茵落正面乳白色,背面淡黄色,生长缓慢.经rDNA-ITS序列分析,该真菌与GenBank中灰树花茵(Grifola frondosa)的同源性达100％.结合形态学特征,确认该担子茵为灰树花(G.frondosa).     

豫南野生假蜜环菌生物学特征

通过野外调查和室内试验,对豫南野生假蜜环菌(Armillariella tabescens)形态及生态特征进行了研究。结果表明:野生假蜜环菌在豫南分布普遍,每年6至7月份发生于茶树(Camellia sinensis)和板栗(Castanea mollissima)间作林内或其它阔叶林内。子实体棕褐色,多丛生,形态美,香味浓,具优良商品性状。菌体由菌盖和菌柄组成,无菌托和菌环。菌盖菌肉和菌柄菌肉均由菌丝组成,菌丝无色透明,具隔、具分枝,无锁状联合现象。菌盖表面鳞片由黄棕色菌丝构成,菌丝细胞壁有内凸增厚现象。菌褶延生,子实层由幼担子、担子及担孢子组成。成熟担子顶端产生4粒担孢子。在不同培养基上,菌落及菌丝形态有明显差异。在PSA综合培养基上不产生菌索,暗处可产生较强荧光,并形成菌皮。菌皮由表面粗糙的菌丝和泡囊组成。     

奉新县猕猴桃溃疡病病原菌鉴定

为明确江西省奉新县猕猴桃溃疡病病原菌种类。从该县7个猕猴桃生产基地采集呈典型症状的发病枝条和叶片,采用稀释分离法对其进行病菌分离并作致病性测定,共获得27个致病性细菌菌株。对各菌株进行培养性状、形态特征观察和生理生化测定,结果与文献中对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)的描述相吻合。提取各菌株基因组DNA,分别对其16S rDNA和16S-23S rDNA基因片段进行PCR扩增、测序、序列分析和构建系统发育树,结果各菌株16S rDNA和16S-23S rDNA序列长度均为1 500 bp和280 bp,且菌株间序列完全一致。将获得的两段序列利用Blast程序分别在GenBank中进行同源性搜索,发现其与丁香假单胞菌猕猴桃致病变种同源性均为100%。待鉴定菌株在系统发育树上与该变种处于同一分支。根据实验结果,将奉新县猕猴桃溃疡病的病原鉴定为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种。     

一株猪丹毒丝菌的全基因组测序及SpaA基因分析

本研究测定猪丹毒丝菌临床毒株SG7的全基因组序列,并运用生物信息学方法对测定的全基因组序列及猪丹毒丝菌表面保护性抗原A基因(SpaA)进行分析.SG7菌株的基因组全长为1834291.00 bp,G+C含量为36.3％,基因总数1846个.将SG7菌株与GenBank中8条完整的猪丹毒丝菌全基因组序列进行比较,发现国内...     

基于rDNA-ITS和大亚基的甘蔗凤梨病菌分子鉴定及序列分析

【目的】分析甘蔗凤梨病菌[Ceratocystis paradoxa（de Seynes）Moreau]核酸r DNA-ITS和大亚基区域序列,为甘蔗凤梨病菌的快速、有效分子检测提供技术支持。【方法】从发生凤梨病的新台糖22号（ROC22）地下种茎分离获得1株菌株FL-1,根据柯赫氏法则测定其致病性;将该病菌在PDA培养基进行培养,观察其菌落形态特征,并在光学显微镜下观察分生孢子梗、厚垣孢子、分生孢子的形态特征。用引物ITS1/4和NL1/4分别对该菌株的核酸rD NA-ITS和大亚基序列进行扩增,以MEGA软件的Neighor-joining方法分别构建系统发育树,并用p-distance进行遗传距离分析。【结果】分离菌株FL-1为甘蔗凤梨病致病菌,具有典型的节孢子和厚垣孢子,形态特征与奇异长喙壳菌（C.paradoxa）一致。从菌株FL-1基因组DNA中分别扩增获得499 bp rD NA-ITS和563 bp大亚基片段,其序列均与C.paradoxa其他菌株的同源性为100.0%。系统聚类分析结果表明,两条序列均与C.paradoxa聚为一个独立簇。遗传矩阵分析结果表明,rD NA-ITS和大亚基均与C.paradoxa聚合在一起,种内遗传距离分别为0-0.017和0-0.008,而Ceratocystis属内种间遗传距离分别为0.015-0.106和0.002-0.059。结合分子检测结果和形态学特征,将FL-1鉴定为C.paradoxa。【结论】来自甘蔗的FL-1菌株是C.paradoxa复合群的成员,并被划分在进化复合群的分枝1上。rD NA-ITS和大亚基适合用于甘蔗凤梨病的PCR检测及分子标记。     

谷瘟病菌无毒基因型鉴定及分析

【目的】鉴定不同地区谷瘟病菌（Magnaporthe oryzae）所含无毒基因的类型,确定无毒基因在菌株中的分布及变异情况,为深入研究谷瘟病菌无毒基因变异机制提供参考。【方法】从中国北方谷子主产区不同区域内采集并分离76个谷瘟病菌的单孢菌株,提取其基因组DNA,根据目前已成功克隆的稻瘟病菌的7个无毒基因的核苷酸序列设计特异性引物,进行PCR扩增及电泳检测,并对部分菌株的无毒基因进行测序分析。【结果】在76个谷瘟病菌中,无毒基因ACE1、Avr-pita、Avr1-CO39和AvrPiz-t的扩增率为100％,无毒基因Avr-pik、Avr-pia和Avr-pii的扩增率分别为63.2%、42.1%和21.1%。在谷瘟病菌菌株P11和P34中,Avr1-CO39的扩增条带较预期片段大490 bp,测序结果发现菌株P11和P34中的Avr1-CO39基因序列完全一致,均在启动子区插入了490 bp核苷酸,该插入序列与non-LTR retrotransposon: Mg-SINE的相似度达99.16％。Avr-pita的测序结果发现,谷瘟病菌菌株中的Avr-pita基因序列变异较为丰富,其变异形式主要为单核苷酸的变异,包括单碱基的插入、缺失及多位点的SNP。Avr-pia的变异类型主要为整个无毒基因的缺失,经测序验证等位基因序列分为4种类型。Avr-pia-A与参考序列（AB498873.1）一致,包含10个菌株;Avr-pia-B包含20个菌株,在-116、-109和-16 bp处分别存在C/T、G/T和C/A变异,但与参考序列的CDS区序列相同;Avr-pia-C仅包含菌株P10,在+150 bp处存在T/G变异,但为同义突变;Avr-pia-D仅包含菌株P18,在+212 bp位点处存在C/T变异,导致该变异位点由编码苏氨酸突变为编码异亮氨酸。谷瘟病菌Avr-pii包含3种等位基因类型。Avr-pii-A型与参考序列（AB498874.1）一致,共包含14个菌株;Avr-pii-B型和Avr-pii-C型分别在+139和+64 bp处存在A/G变异,核苷酸的变异导致该位点由编码苏氨酸改为丙氨酸。Avr-pii-B型和Avr-pii-C型变异均为首次报道。单元型分析表明,AG2包含23个菌株,占供试菌株的30.2%,为优势单元型。【结论】明确了不同地区的谷瘟病菌中无毒基因ACE1、Avr-pita、Avr1-CO39和AvrPiz-t不存在地理来源的差异;而无毒基因Avr-pik、Avr-pia和Avr-pii在各地分布有差异。谷瘟病菌AG2单元型为优势单元型,其次是单元型AG1和AG5。     

中国西南红菇属2个新记录种

对2个采自中国西南的红菇属中国新记录种进行了形态学描述和绘图,并基于ITS序列构建了系统发育树.综合形态特征和系统发育分析结果,将这两个种鉴定为近喜马拉雅山红菇(Russula indohimalayana)和拟克姆霍孜红菇(R.pseudokrombholzii).近喜马拉雅山红菇主要特征:菌盖黄绿色,边缘具有条纹,菌褶直生或略弯生,无小菌褶,担孢子宽椭圆形.拟克姆霍孜红菇的主要特征:菌盖红色至紫红色,边缘有明显的条纹,菌褶弯生或略离生,有小菌褶,菌柄白色至灰白色,担孢子宽椭圆形,表面有较高的疣突.     

香菇单核菌丝生长速度与交配型分布的关系

研究分析鉴定了香菇担孢子的交配型,并对各类交配型的比例进行了统计分析.通过4种交配型担孢子的比例变化关系,探讨造成香菇担孢子4种交配型单核体比例偏离1:1:1:1分离的遗传背景.结果表明,交配型因子偏分离与菌落形态、培养条件及单核体间交配反应的特征无关,不同菌株4种交配型的担孢子在菌落形态上有较大的差异,但这些菌落形态与交配型比例之间没有相关性;4种单核体之间发生亲和性反应的形态特征有多种形式,这些形态特征与交配型比例之间亦没有直接的联系;但同一双核菌株的F1代担孢子的萌发能力、生长速度是有差异的,从而导致有些菌株的担孢子中4种交配型分布不均衡,甚至导致有些菌株中只能检测到2种或3种交配型的担孢子.     

小麦纹枯病菌拮抗链霉菌SCY505的筛选与鉴定

从河南省许昌地区的小麦田土样中分离到1株对小麦纹枯病菌有稳定拮抗作用的链霉菌菌株SCY505。在形态特征、生理生化特性和细胞壁化学组分分析的基础上,结合16S rDNA及16S-23S rDNA intergenic spacer region(ISR)序列分析,对菌株SCY505进行了分类鉴定,同时测定了该菌株的拮抗谱。结果表明,SCY505的基内菌丝无横隔,不断裂;气生菌丝多分枝,孢子丝直生或呈螺旋状,孢子椭圆形或圆柱形,表面光滑;细胞壁化学组分Ⅰ型;16S rDNA序列长度1521bp(GU045548),与淡紫灰链霉菌的16S rDNA序列同源性达99.7%,ISR序列长度372bp(GU358067),与淡紫灰链霉菌亚种(U93347)的ISR序列同源性为82.9%,初步认为SCY505是淡紫灰链霉菌的一个亚种,暂命名为淡紫灰链霉菌许昌亚种(Streptomyces lavendulaesub sp.xuchangensis)。该菌株对供试的10种植物病原真菌均有较好的抑制效果。     

土壤中金龟子绿僵菌菌落宏观特征与DNA多态性的RAPD分析

为了解不同地区土壤中金龟子绿僵菌菌株间的亲缘关系,以及不同菌株亲缘关系的远近与菌株的菌落形态和地理来源是否存在相关关系,对分离自河北省8个地区土壤中的12株金龟子绿僵菌进行形态观察及DNA多态性的RAPD分析.结果表明,不同地理来源菌株间的菌落形态和DNA图谱均存在明显差异;依据菌落孢子的分布形态、基质色泽、孢子颜色以及珠状渗出液的有无等特征能实现与RAPD聚类结果相同的菌株类型划分结果,证实了利用菌株培养特征对菌株亲缘关系远近进行类型划分的可行性;同时,RAPD聚类结果也表明菌株问差异与地理来源有一定的相关性.     

一株虫生真菌的分离鉴定及杀虫活性初探

[目的]为虫生真菌在害虫防治中的应用提供参考。[方法]以从罹病昆虫体表分离的虫生真菌Ekks1为供试菌种,对其进行形态鉴定;以ITS4和ITS5为引物,对Ekks1的ITS序列进行PCR扩增、电泳检测和序列分析,并检测Ekks1对小菜蛾和豆蚜虫的杀虫效果。[结果]经形态鉴定,Ekks1为半知菌亚门,丝孢纲,丝孢目,丝孢科,白僵菌属,球孢白僵菌（Beauveria.bassiana）;经PCR扩增,成功获得了Ekks1菌株的ITS1-5.8s-ITS5 rDNA序列,经分析,ITS1-5.8s-ITS5序列为555 bp,菌株Ekks1与GenBank中B.bassiana（EF672309）的同源性为99%;菌株Ekks1在孢子浓度为1.5×10^7个/ml时,感染8 d后小菜蛾的校正死亡率为76%,感染72 h后豆蚜虫的校正死亡率为61%。[结论]Ekks1为白僵菌属真菌,其孢子浓度为1.5×10^7个/ml时,对小菜蛾和豆蚜虫均具有一定的致死效果。     

甘薯苗床镰刀菌病害分子检测及分析

从江苏、河南、河北等地育苗床上采集发病薯苗,利用组织分离法分离病原菌,通过形态学和分子生物学方法鉴定致病镰刀菌种类。共分离获得21株病原菌株,它们均产生两种孢子,大型孢子镰刀型,具3~5个分隔,小型孢子椭圆形或卵形,单胞或双胞。这些病原菌株的r DNA-ITS片段大小为544~568 bp,核苷酸一致率为46.56%~100%。系统进化树将供试病原菌分为3个组:组1为茄病镰刀菌组,包括本研究的9个分离物;组2为尖孢镰刀菌组,包括本研究的11个分离物;组3只包括2个分离物,即LN828191和本研究的分离物HNTY4。     

广东梅州灰肉红菇子实体形态结构特征

用生物显微镜和扫描电子显微镜观察了广东梅州"红菌"子实体,担孢子以及菌丝体的形态结构特征.该"红菌"以深红色为主,囊状体发达.孢子印白色,菌肉灰色,菌髓为异型菌髓,担孢子近球形.孢子大小为8.55～10.29×10.65～11.01μm,孢子表面有脊状突起.其高度约1.14 μm,宽0.57 μm,相邻脊间最宽距离为2...     

4个野生灵芝菌株的ITS序列分析

以4个野生灵芝菌株为研究材料,以6个外源菌株为参考菌株,采用MEGA4软件对ITS序列进行NJ法聚类分析,构建系统发育树.结果显示4个灵芝菌株ITS序列与另外6个参考菌株对齐序列长度在357 ～ 369 bp之间,G/C含量变化为43.4％～57.7％;德昌灵芝1#、德昌灵芝4#和通江灵芝亲缘关系最近,遗传距离为0,德昌灵芝3#与它们的遗传距离为0.0029;与4个野生灵芝菌株亲缘关系由近到远分别是韩芝、红芝、灵芝(中国科学院微生物研究所)、黑灵芝、血芝、云芝;结合4个野生菌株的ITS序列分析结果和形态特征,4个菌株被鉴定为灵芝(Ganoderma lucidum)种类的不同株系.     

香菇担孢子交配型比例偏分离的遗传分析

 【目的】验证香菇中担孢子交配型因子分离是否存在普遍意义的偏分离现象及其在栽培菌株与野生菌株中的表现。【方法】以17个野生和栽培香菇菌株为样本，采用交配型分析、OWE-SOJ技术鉴定孢子的交配型，对各类交配型的比例进行统计分析。【结果】占供试总数64.71%的菌株担孢子交配型不呈预期的分离比，其中12个供试栽培菌株中有9个，5个供试野生菌株中有2个；偏分离菌株中均有亲本型孢子数量多于重组型孢子的趋势，偏分离双核菌丝体的F1代担孢子的核型主要取决于双核亲本的组成。【结论】香菇中担孢子交配型因子分离偏离理论预期是一种统计学意义的普遍现象；偏离程度栽培菌株大于野生菌株。     

食用真菌担孢子核相研究初报

采用改进式海登汉氏苏木精核染色方法对9种30个菌系的担孢子核相进行了研究。结果表明,金针菇和裂褶菌以双核担孢子为主,其双核担孢子所占的百分率分别为98.89％和97.43％,另有1.11％和2.57％的担孢子含1个或3—4个细胞核。榆黄蘑等7种食用菌的19个菌系以单核担孢子为主,除糙皮侧耳的NP菌系有16.23％的担孢子为多核体(2—5核)外,其它18个菌系中多核担孢子所占的百分率均在4.18％以下。     

分离自土壤的裸囊菌科真菌中国及大陆新记录种

裸囊菌科类群是一类重要的人和动物皮肤病原真菌,尤其是小孢子菌属,目前对其报道主要以临床病例为主,对环境中如土壤和水源中的菌研究较少,为及早预防真菌感染的发生,对我国山西省和甘肃省土壤中的裸囊菌科真菌资源进行调查。采集不同环境中的土壤样品,利用鸡毛和头发对土壤样品中的这类资源进行诱集,分离目标菌株;基于形态特征和ITS rDNA序列进行系统发育分析相结合的方法进行菌株的鉴定。从土壤中分离发现3个裸囊菌科菌株:经鉴定为布拉尔小孢子菌Microsporum boullardii,奇妙帕拉癣菌Paraphyton mirabile和弯奈尼兹皮菌Nannazzia incurvata。前两个种为中国新记录种,后一个为大陆新记录种;这些存在于土壤中的裸囊菌科真菌为潜在人和动物的致病菌,值得引起重视。