间接免疫荧光方法检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达

采用间接免疫荧光方法对小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达进行检测.结果表明,小鼠睾丸组织Hsp70呈极强的表达(+++),并且在各级生精细胞及支持细胞都呈极强表达;小鼠附睾头、附睾体、附睾尾的Hsp70呈现极强表达(+++),主要在附睾上皮细胞,而管腔内精子偶见阳性染色.说明间接免疫荧光方法能够特异性、原位地检测小鼠睾丸和附睾组织Hsp70的表达,而且操作简单,适用于研究Hsp70在精子发生和成熟过程的作用.     

环境雌激素双酚A对小鼠睾丸功能的影响

为探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对雄性小鼠睾丸功能的影响及可能机制,用低剂量(50μmol/kg)、中剂量(250μmol/kg)、高剂量(500μmol/kg)的BPA连续5 d对雄性小鼠腹腔注射给药0.1 ml,以注射E2为阳性对照,阴性对照组腹腔注射等体积大豆油溶剂,首次给药15 d后对小鼠睾丸及附睾的脏器系数、精子数、活动精子百分率、精子畸形率进行统计分析,并对睾丸进行组织病理学研究。结果表明:BPA处理后,小鼠睾丸重量、附睾重量变化不显著;睾丸和附睾脏器系数变化不显著;精子数下降,其中BPA中剂量组下降显著(P<0.05),BPA高剂量组下降极显著(P<0.01);活动精子率下降,其中BPA高剂量组显著下降(P<0.05);精子畸形率BPA各剂量组均升高非常明显(P<0.05);BPA各处理组睾丸精细小管排列出现了松散现象,睾丸间质出现不同程度的水肿,睾丸间质细胞分布稀疏,精细小管管腔内生殖细胞排列层次发生不同程度的紊乱,生殖细胞周围的Sertoli细胞数目稀少,Sertoli细胞脱落到管腔,管腔内的精子细胞数目稀少,损伤程度随BPA浓度增加而愈加严重。认为BPA对雄性小鼠的睾丸功能有损伤作用,并可能对子一代的发育有不良影响。     

小花棘豆中毒对家兔睾丸和附睾中SOD表达的影响

【目的】研究小花棘豆毒性成分对家兔睾丸、附睾组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及基因表达的影响。【方法】将48只雄性家兔随机分为对照组和试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,试验组分别按照Ⅰ组15%(苦马豆素含量30 mg/kg)、Ⅱ组30%(苦马豆素含量60 mg/kg)、Ⅲ组45%(苦马豆素含量90 mg/kg)的比例添加小花棘豆,对照组仅饲喂苜蓿干草,试验期70 d。分别于攻毒后第14、35、70 d每次每组随机采集4只家兔的睾丸和附睾组织,通过羟胺法检测SOD活性的变化,real-time PCR检测SOD mRNA的表达,免疫组化和Western Blot检测SOD蛋白的表达。【结果】从第35 d开始,与对照组相比,各试验组家兔附睾、睾丸中T-SOD、Cu/Zn-SOD和Mn-SOD活性均极显著下降(P﹤0.01),mRNA表达量和蛋白表达量均呈现出明显的下降趋势,而且其差异性随中毒时间的延长而变化。【结论】小花棘豆中毒可导致家兔睾丸、附睾中SOD活性与表达异常,且与小花棘豆中毒呈现一定的时间-剂量效应。     

奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆、序列分析和结构预测

采用RT-PCR和RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法分离出奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶(P450aromA)的全序列,得到1784 bp的全长cDNA,包括38 bp 5'非翻译区,1566 bp阅读框以及含Poly(A)信号(AATAAA)的167 bp 3'非翻译区[不包括Poly(A)].阅读框共编码521个氨基酸,计算的蛋白质分子量为59 ku.同源性分析显示,奥利亚罗非鱼P450aromA的氨基酸序列与其它鱼性腺P450arom具有70%以上的同源性,与其它鱼脑P450arom为60%左右同源,但芳香化酶高保守区包括I-螺旋区,芳香化酶特异保守区II和血红素结合区III和其它鱼芳香化酶的同源性分别高达83%～96%, 78%～86% 和 85～100%.系统发育分析表明奥利亚罗非鱼P450aromA与鱼类性腺P450arom属于同一分支的.生物信息学分析显示:奥利亚罗非鱼P450A基因编码的蛋白无信号肽,无跨膜区域,为非分泌蛋白,同时含有多个酪蛋白激酶II磷酸化位点, N-糖激化位点,N-肉豆蔻酰化位点,蛋白激酶C磷酸化位点.     

奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶基因的克隆、序列分析和结构预测

采用RT-PCR和RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)法分离出奥利亚罗非鱼卵巢芳香化酶(P450aromA)的全序列,得到1784 bp的全长cDNA,包括38 bp 5'非翻译区,1566 bp阅读框以及含Poly(A)信号(AATAAA)的167 bp 3'非翻译区[不包括Poly(A)].阅读框共编码521个氨基酸,计算的蛋白质分子量为59 ku.同源性分析显示,奥利亚罗非鱼P450aromA的氨基酸序列与其它鱼性腺P450arom具有70%以上的同源性,与其它鱼脑P450arom为60%左右同源,但芳香化酶高保守区包括I-螺旋区,芳香化酶特异保守区II和血红素结合区III和其它鱼芳香化酶的同源性分别高达83%～96%, 78%～86% 和 85～100%.系统发育分析表明奥利亚罗非鱼P450aromA与鱼类性腺P450arom属于同一分支的.生物信息学分析显示:奥利亚罗非鱼P450A基因编码的蛋白无信号肽,无跨膜区域,为非分泌蛋白,同时含有多个酪蛋白激酶II磷酸化位点, N-糖激化位点,N-肉豆蔻酰化位点,蛋白激酶C磷酸化位点.     

正反交对猪睾丸及附睾发育影响的研究

巴克夏、雅南、巴克夏×雅南、雅南×巴克夏、杜洛克×雅南等品种组合仔公猪197头,从初生至90日龄,分七个阶段,采取睾丸及附睾制切片,分别测曲精细管直径及附睾各部位宽度;观察长核精子出现日龄,经统计分析比较结果;曲精细管直径及附睾管宽度为较高遗传力性状,不表现明显的杂种优势;睾丸及附睾的生长发育有一定的母体效应存在。雅南仔公猪睾丸发现长核精细胞在55日龄,巴雅、杜雅约80日龄,而巴克夏、雅巴则直至90日龄尚未见出现。     

小鼠睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡蛋白质组分的鉴定及功能分析

【目的】对睾丸、附睾和前列腺组织细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)蛋白质组分进行鉴定,以明确其在精子发生、成熟及功能维持方面所发挥的作用。【方法】用总外泌体分离试剂盒 (total exosome isolation,TEI)分别富集小鼠睾丸、附睾和前列腺组织的EVs,用免疫印迹法对EVs进行鉴定。用透射电镜观察EVs的形态,动态光散射粒径分析仪(dynamic light scattering,DLS)分析其直径分布。用液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)分析EVs的蛋白质组分,运用DAVID 6.8在线分析工具从细胞组分、分子功能、生物学过程三方面对筛选出的蛋白质进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析。【结果】用TEI法分离纯化的EVs均可检测到分化抗原63(cluster differentiation antigen 63,CD63)和肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSG101)标记蛋白,表明EVs分离成功。透射电镜下观察EVs呈凹杯状,睾丸组织来源的EVs以直径30~140 nm的居多,附睾组织EVs直径在105 nm处有峰值,前列腺组织EVs直径在50和90 nm处有峰值。用LC-MS/MS分析3种EVs的蛋白组分,睾丸组织EVs筛选到1 148种蛋白,附睾组织EVs筛选到902种蛋白,前列腺组织EVs筛选到651种蛋白。睾丸组织EVs特有蛋白有667种,主要参与RNA加工及剪切、精子发生、DNA损伤应答等生物学过程;附睾组织EVs特有蛋白有311种,主要参与转运、代谢和免疫作用等生物学过程;前列腺组织EVs特有蛋白有142种,主要参与代谢活动等。三者共有蛋白277种,主要发挥蛋白质结合、RNA结合等分子功能,参与蛋白质翻译和运输等生物学过程。【结论】睾丸、附睾和前列腺组织EVs分别在精子发生、精子的睾丸后成熟及功能维持中发挥一定的作用。     

钼对小鼠睾丸NO含量及ATPase活性的影响

为探讨钼对小鼠睾丸NO含量及ATPase活性的影响,选用60只雄性昆明种小鼠,随机分成对照组、钼100组、钼200组、钼400组共4组,即饮水中分别添加0、100、200、400 mg/L钼(钼源为钼酸钠),连续染毒90 d,检测小鼠睾丸组织形态结构,睾丸组织NO含量及ATP酶活性。结果表明,钼染毒小鼠睾丸生精细胞变性,精子减少,睾丸组织NO含量升高,睾丸组织Na+-K+-ATP酶及Ca2+-ATP酶的活性下降,这可能是钼导致雄性小鼠生殖障碍的毒性机制。     

异黄酮对雄性大鼠芳香化酶活性及骨骼肌生长的影响

研究3种异黄酮(Da、IPF和7HF)对雄性大鼠芳香化酶活性及骨骼肌生长的影响。试验选用20只28日龄雄性SD大鼠,随机分成4组,每组5只,其中1组为对照组,另外3组在每千克日粮中分别添加5mg的Da、IPF和7HF。实验结果表明,Da、IPF和7HF均能升高腿肌中RNA／DNA的比值,分别较对照组升高了19．09％、9．09％和15．45%;同时显增加血清中睾酮的含量,降低血清中雌二醇的含量,抑制睾丸组织中芳香化酶的活性。提示异黄酮(Da、IPF、7HF)通过抑制芳香化酶活性而降低睾酮向雌二醇的转化,使体内睾酮含量升高,有助于促进动物的生长发育。     

异黄酮对雄性大鼠芳香化酶活性及骨骼肌生长的影响

研究3种异黄酮(Da、IPF和7HF)对雄性大鼠芳香化酶活性及骨骼肌生长的影响.试验选用20只28日龄雄性SD大鼠,随机分成4组,每组5只,其中1组为对照组,另外3组在每千克日粮中分别添加5 mg的Da、IPF和7HF.实验结果表明,Da、IPF和7HF均能升高腿肌中RNA/DNA的比值,分别较对照组升高了19.09%、9.09%和15.45%;同时显著增加血清中睾酮的含量,降低血清中雌二醇的含量,抑制睾丸组织中芳香化酶的活性.提示异黄酮(Da、IPF、7HF)通过抑制芳香化酶活性而降低睾酮向雌二醇的转化,使体内睾酮含量升高,有助于促进动物的生长发育.     

GnRHR在不同日龄建昌黑山羊睾丸、附睾中的分布与表达

[目的]定位并比较不同日龄建昌黑山羊睾丸及附睾中GnRHR的分布及表达情况。[方法]分别收集55、104、300、1 140日龄建昌黑山羊的睾丸、附睾头和附睾尾组织,然后进行脱水、包埋、切片后,采用免疫组化定位GnRHR在各个组织中的分布。[结果]GnRHR在建昌黑山羊睾丸、附睾头和附睾尾组织细胞中均有分布,在上皮下层、基质层中分布较多,其表达量在300日龄的附睾尾和1 140日龄的睾丸中达到较高水平。[结论]GnRHR在睾丸、附睾中均有表达,而且不同日龄阶段表达存在组织细胞特异性。     

乌贼墨多糖对环磷酰胺介导小鼠睾丸氧化应激损伤的干预效应

[目的]探讨乌贼墨多糖对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化应激损伤的保护作用.[方法]随机将70只成年雄性昆明小鼠分成7组：正常组、模型组、治疗组1、治疗组2、治疗组3、治疗组4和治疗组5,通过对小鼠腹腔注射环磷酰胺进行造模,灌胃乌贼墨多糖作为化疗保护剂,检测小鼠的体重、睾丸和附睾重量、睾丸指数和附睾指数、精子畸形率、睾丸中抗氧化指标,同时观察睾丸组织结构.[结果]乌贼墨多糖能提高小鼠体重和睾丸重量,降低精子畸形率,提高睾丸组织中抗氧化酶SOD和CAT活性,降低MDA含量,修复睾丸病理学损伤.乌贼墨多糖明显缓解环磷酰胺对睾丸的氧化损伤,其最佳灌胃剂量为80 mg/kg.[结论]乌贼墨多糖有可能作为临床上的化疗辅助药物.     

2种取代苯对花翅摇蚊毒性和细胞色素P450酶活性的影响

[目的]明确取代苯类污染物对水生昆虫毒性及细胞色素P450酶活性的影响。[方法]运用药液培养法和酶活性测定法分析了对氯苯酚和对苯二胺对花翅摇蚊4龄幼虫毒性及细胞色素P450酶活体和离体活性的影响效应。[结果]对氯苯酚和对苯二胺对花翅摇蚊4龄幼虫的24 h半数致死浓度(LC50)分别为38.65和78.43 mg/L。对氯苯酚对花翅摇蚊4龄幼虫体内P450酶活性作用主要表现为随作用时间增加抑制作用减小;而对苯二胺则主要表现为随作用浓度增加诱导作用增强。对氯苯酚和对苯二胺对花翅摇蚊4龄幼虫离体P450酶活性的半数抑制浓度(IC50)分别为466.15和594.43 mg/L。[结论]花翅摇蚊细胞色素P450可作为监测对氯苯酚和对苯二胺水体污染的参考生物化学标志物。     

热应激对小鼠睾丸Hsp70-2基因mRNA转录水平的影响

用半定量RT-PCR方法检测不同温度、相同时间(4 h)热应激处理小鼠睾丸组织中Hsp70-2基因的mRNA转录水平,以研究热应激对Hsp70-2基因mRNA转录的影响。结果显示,各热应激组小鼠睾丸Hsp70-2 mRNA转录水平下降,并且温度越高,其下降幅度越大。与对照组相比,33℃组小鼠Hsp70-2 mRNA相对转录水平显著(P<0.05)下降,而37℃组和42℃组下降极显著(P<0.01)。42℃组Hsp70-2 mRNA相对转录水平仅为对照组的44.7%。上述结果说明,热应激使Hsp70-2基因mRNA转录水平下降,热应激对雄性生殖机能的影响与Hsp70-2减少有关,而Hsp70-2 mRNA转录水平可以作为热应激对雄性生殖机能损伤程度的判断指标之一。     

蚯蚓（Eisenia fetida）细胞色素P450及抗氧化酶系对环境浓度苯并（a）芘的响应

以赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)为供试生物,草甸棕壤为供试士壤,以蚯蚓微粒体细胞色素P450含最、抗氧化酶系以及谷胱甘肽转移酶活性为指标,进行了土壤中苯并(a)芘[B(a)P]暴露与酶活性的量-效关系研究.结果表明,在接近沈抚灌区实地污染状况B(a)P(0.1～2.0mg·kg-1)暴露下,第1、3、7以及第14 d取样时,P450和SOD有较好的响应:SOD在第1、3 d显著升高,而在第7、14 d时降低;P450总体表现为低浓度B(a)P诱导下降低,高浓度下升高的趋势.CAT、POD以及GST的敏感性相对较差.比照其他4个指标,蚯蚓P450的敏感性更为优异,具有较好的应用前景.指标敏感性总体表现为:P450>SOD>CAT/POD>GST.     

高钼低铜对小鼠睾丸组织脂质过氧化作用的影响

为研究高钼、低铜及两因素协同作用对小鼠睾丸组织脂质过氧化作用的影响,将80只健康雄性昆明系小鼠随机分为4组,分别为对照组(Cu 3 mg/L,Mo 0 mg/L)、高钼组(Cu 3 mg/L,Mo600 mg/L)、低铜组(Cu 0 mg/L,Mo 0 mg/L)、低钼高铜组(Cu 0 mg/L,M0 600 mg/L...     

生物细胞色素P450的研究进展

简要介绍了生物细胞色素P450分布的多样性、P450的功能、P450在不同领域的研究现状与进展。鉴于P450的研究无论在理论上探索生物的生理代谢、选择进化和生物与环境的关系方面,或在环境保护、农业生态、生物防治、作物基因工程和医药卫生等应用方面,都有广泛的实践意义,因此,应该受到更大的关注和重视。     

细胞色素P450酶系介导的除草剂抗性研究进展

细胞色素P450酶系在生物界中广泛分布,并且是大多数除草剂代谢第一阶段的重要酶系,对除草剂抗性的形成发挥着重要作用。结合国内外细胞色素P450酶系在除草剂代谢中的研究进展,对细胞色素P450酶系参与的杂草抗性形成及其在抗除草剂转基因作物培育中的应用等方面的研究进行了综述,旨为该领域的相关研究提供参考。     

苯丙烷代谢途径中细胞色素P450的研究

苯丙烷次生代谢途径通过合成木质素、类黄酮等多种次生物质而影响植物的许多重要性状。细胞色素P450超家族参与苯丙烷途径的至少16种关键酶反应。从蛋白特征、功能、编码基因、表达调控等角度,综述了公共苯丙烷和主要分支途径中的细胞色素P450,如肉桂酸-4-羟化酶、类黄酮-3’-羟化酶、类黄酮-3’5’-羟化酶、阿魏酸5-羟化酶等。