地黄病毒病的检测与初步鉴定

利用DAS-ELISA和RT-PCR等检测方法,对感染地黄病毒病的地黄进行检测和初步鉴定,并结合该病毒地黄分离物CP基因的克隆及序列分析进行验证。结果表明,烟草花叶病毒（TMV）为侵染地黄的主要病毒;扩增产物序列测定结果表明：TMV地黄分离物CP基因的核苷酸序列与GenBank上已登录的TMV其他株系CP基因核苷酸序列的同源性在85％～98％之间,氨基酸序列同源性在84％～98％之间,同源性较高。根据不同株系CP基因氨基酸序列进化树分析,推测该分离物可能为TMV的已有株系。     

甘肃河西地区番茄病毒病病原种类鉴定

2006-2008年对甘肃河西地区番茄病毒病的种类进行了调查和鉴定.河西地区番茄病毒病田间表现为花叶和条斑等症状,种子可带毒.采用DAS-ELISA方法,从田间样本及该地区出入境番茄种子上检测到烟草花叶病毒(TMV)、番茄花叶病毒(ToMV)和黄瓜花叶病毒(CMV),并对TMV 和ToMV阳性样品进行了 IC-RT-PCR鉴定.该地区番茄病毒病优势病毒为烟草花叶病毒;13%的样本中检测出2种病毒的复合侵染.     

烘烤烟丝中残留病毒的检测

应用电镜、DAs-EusA技术检测烘烤烟丝样品K326—1和K326之中的病毒。电镜观察到2个样品中均有类似烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）的粒子,在K326-2烟丝中还有类似番茄斑萎病毒属（Tospovirus）的病毒粒子存在于细胞壁及细胞质中。2个样品均与TMV抗血清及西瓜银色斑驳病毒（WSMoV）抗血清呈阳性反应。结果表明经烘烤的烟丝中仍存在病毒。     

3种大白菜病毒多重RT-PCR检测技术的建立

【目的】建立3种大白菜病毒病多重RT-PCR检测技术,为病毒病快速检测、白菜病毒病防治与抗病育种提供参考。【方法】针对我国大白菜芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)3种病毒的外壳蛋白(CP)基因保守区序列,设计特异性检测引物,从多重RT-PCR(mRT-PCR)扩增引物、Mg~(2+)浓度、Taq DNA聚合酶及dNTPs浓度、退火温度、延伸时间和循环次数等方面对RT-PCR检测技术进行优化。【结果】在dNTPs浓度为0.24 mmol/L,Mg2+浓度为2.8mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度为0.12U/μL,退火温度为52℃,延伸时间为30s,循环30次,即可成功地在一个体系中对TuMV、TMV和CMV 3种病毒复合侵染的大白菜病样进行多重RT-PCR扩增,扩增得到228,305和460bp3条特异性条带,其大小与试验设计相符合。灵敏度接近单重RT-PCR(sRT-PCR),体现了多重RT-PCR的优越性。【结论】建立了能同时检测大白菜样品中TuMV、TMV和CMV的多重RT-PCR检测体系,该多重RT-PCR方法能对田间大白菜样品进行3种病毒的准确、快速、高效检测。     

贺州市烟草病毒病种类鉴定与防治对策

从贺州市主要产烟区采集疑似病毒病症状的烟叶样品71份,并对症状进行了拍照和描述记载,采用ELISA法对样品进行了检测。检测出TMV、CMV、To MV、Ts WV 4种病毒病,检出率分别为51.87%、46.92%、19.35%、74.79%,复合侵染率为71.83%,以TMV和To MV复合侵染为主,病毒阳性检出率和采集烟叶样品发病特征基本吻合。同时对贺州市烟草病毒病发生原因进行分析,提出了有针对性的防治措施。     

贵州蔬菜病毒病主要病毒种类检测

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)法对采自贵州省3个蔬菜种植区的952份疑似蔬菜病毒病样品进行黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,Tu MV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)和黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)等6种病毒毒原检测。结果检出阳性样品273份,占总样品数的28.68%,其中CMV阳性检出率最高,占总样品数的16.49%,其余5种病毒的阳性检出率依次为2.63%、2.10%、1.05%、1.58%和0.53%,CMV为贵州省蔬菜上的主要病毒种类。就单一病毒侵染蔬菜的情况分析,供试12种蔬菜均检出CMV,Tu MV在茄子、白菜、萝卜和甘蓝中检出较多,而TSWV主要在番茄和辣椒样本中检出。存在CMV+TMV、CMV+Tu MV、CMV+TSWV、CMV+BBWV、Tu MV+BBWV和CMV+Tu MV+BBWV等6种复合侵染类型,其中CMV+TMV阳性检出率相对最高,达2.52%。城市近郊正季蔬菜区茄科和豆科蔬菜病毒侵染类型较多,十字花科病毒侵染类型最少,葫芦科在冬春喜温蔬菜区病毒侵染类型最多,表明贵州中、高海拔温凉山区比低海拔温热河谷区适于多种病毒发生。     

贵州烟草漂浮苗的花叶病毒带毒率

为了培育无病毒烟苗,做好预防工作及应急补救措施,降低烟草花叶病毒(TMV)大田危害风险,采用酶联免疫法对2011年贵州毕节、赫章、松桃、盘县、普安、思南、大方、金沙、遵义、务川、凤冈、德江12个县市的烟草漂浮苗916个样品TMV带毒率进行了检测.结果表明,大方、金沙、遵义、务川、凤冈和德江6县烟苗的TMV检出率为0,毕...     

烟草漂浮苗花叶病毒病重要初侵染源的探讨

烟草花叶病毒病是烟草漂浮苗的一个重要病害.为了解该病的初侵染源,对苗盘和剪叶机进行了调查采样和检测接种.结果表明.病毒污染的苗盘和剪叶机上烟苗残留物样品当季可检测到TMV抗原阳性.温室内存放1年后,苗盘残留物仍然可检测到TMV抗原阳性,且接种枯斑寄主出现枯斑,用带毒苗盘育苗可使烟苗感染TMV.苗盘和剪叶机上残留物TMV抗原阳性与烟草团棵期部分田块花叶病发病率高于20%有关.这些结果表明,病毒污染的苗盘和剪叶机上烟苗残留物是漂浮苗烟草花叶病毒病的重要初侵染源.生产上要重视旧苗盘和剪叶机的清洗与消毒.     

应用RT-PCR检测番茄上的CMV和ToMV

建立了广东番茄花叶病主要病原CMV和ToMV的RT-PCR检测技术。应用该技术对采集于广东番茄主要产区的病样本进行检测,结果表明：10个采样地点中均检测到CMV,仅2个点检测到ToMV;在所采集的49个病样本中,CMV和ToMV所占的比例分别为79．6％和12．2％,说明广东番茄花叶病毒原主要是CMV,其次是ToMV。     

宁夏地区不同品种番茄主要病毒病的分子鉴定及抗性评价

为明确宁夏地区番茄上的病毒种类并分析复合侵染状况以及评价不同品种番茄的抗病性,于宁夏贺兰园艺产业园采集139份番茄疑似病毒样品(共22个品种),利用主要的8种番茄病毒特异性引物对病样进行RT-PCR分子检测与鉴定。结果显示：在疑似病样中,病毒检出率为98.56%,其中,ToMMV首次在银川市检出,检出率显著高于其他病毒,达92.05%,为当地优势毒源;其次为TSWV和STV检出率分别为76.04%和73.35%;TYLCV、ToCV、ToMV、CMV和TMV检出率较低。通过对番茄病毒的复合侵染现象分析发现,复合侵染的样本占阳性样本数的94.89%,其中3种病毒的复合侵染率占复合侵染总比的53.08%,且3种和4种复合侵染类型繁多。此外,对22个品种感病情况分析,‘冠蔬106’感染的病毒种类最多,为6种,而‘黑小哥’未检测出以上8种番茄病毒。进而对番茄病毒病抗性品种进行初步评估,‘黑小哥’‘千禧’‘香妃9号’‘152’‘冠疏103’‘193’和‘赛硒柿2号’这7个品种为抗病毒品种。综上,面对外来病毒的侵入,复合侵染的暴发,应当引起高度重视和警惕。     

Complete Genome Sequencing and Analysis of Rehmannia Mosaic Virus Isolate from Shanxi Province

Using double-stranded RNA(dsRNA) technology and sequence-independent amplification(SIA), the molecular identification on infected Rehmannia glutinosa in the field with mosaic symptoms was performed and the whole-genome of the Rehmannia mosaic virus(ReMV) Shanxi isolate(ReMV-SX) was sequenced. Sequencing analysis showed that the virus that infected Rehmannia glutinosa was Rehmannia mosaic virus(ReMV). The full-length of the obtained ReMV-SX sequence(GenBank accession no. JX575184) was 6 395 nt, containing four open reading frames(ORFs). The sequence homology analysis of the complete nucleotide sequence showed that ReMV-SX was 93.8%-97.0% homologous to ReMV in Tobamovirus subgroup I, while only 49.8%-58.9% homologous to the isolates in subgroups II and III of the same genus. Phylogenetic analysis showed that ReMV-SX and ReMV-Henan formed a separate branch and had the closest genetic relationship. The results laid the foundation for ongoing researches in the taxonomic status and evolution of ReMV and for further investigating the pathogenic mechanism of ReMV infecting Rehmannia glutinosa.     

湖北省蔬菜病毒病主要毒原种类检测

采用斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)和RT-PCR法对采自湖北省7个地区的966份疑似感染病毒的蔬菜样本进行黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)共7种病毒的检测。结果显示检出阳性样本695份,占总样本数的71.9%。其中,十字花科蔬菜上主要毒原为TuMV,检出率高达86.4%,其次为CMV,检出率为26.7%;茄科、葫芦科和豆科蔬菜上主要毒原均为CMV,检出率分别为34.3%、59.2%和56.2%。CMV几乎能侵染所有蔬菜,为湖北省蔬菜病毒病的主要毒原。在检出的6种病毒中,存在TuMV+CMV、TuMV+BBWV、TuMV+CMV+BBWV、CMV+BBWV、CMV+ToMV和CMV+BBWV+TSWV+TMV等6种复合侵染类型,其中TuMV+CMV为十字花科蔬菜上的主要复合侵染类型,复合侵染率为23.8%,其他蔬菜上主要侵染类型为CMV+BBWV,复合侵染率为28.0%。     

食用菌提取物对烟草花叶病毒的抑制作用

 从钝化(提取物与病毒混合后接种)、预防(施用提取物24 h后接种病毒)、治疗(接种病毒24 h后施用提取物)3个不同时期,在心叶烟上测试了8种食用菌乙醇提取物水溶液对烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)的抑制作用。试验结果表明：8种食用菌提取物在体外都具有钝化病毒(TMV)及抑制病毒(TMV)侵染的作用；除鸡油菌(Cantharellus minor Peck)外，其它7种食用菌提取物对TMV有不同程度的治疗作用。     

福建长汀小米椒病毒病的病原鉴定

1987—1988年从小米椒的主要产地长汀县采回具有花叶、叶片斑驳、皱缩、畸形.叶脉肿大、黄化、小叶和侧枝丛生等病株的标样189份,经5科10种鉴别寄主的传染性试验、血清学反应(酶联免疫吸附测试)和电子显微镜观察,鉴定出4种小米椒病毒病原:马铃薯 X 病毒(PVX),马铃薯 Y 病毒(PVY),烟草花叶病毒(TMV)和黄瓜花叶病毒(CMV).其中复合感染的样本占42.9%,病毒病原为 PVX,PVY 2种或 PVX,PVY,TMV 3种病毒的复合感染,其中以 PVX,PVY TMV 3种病毒感染占优势,为29.75%,是为害小米椒的主要毒源种类;单独浸染的样本88份,占46.6%,其中 PVX 占18.1%,PVY13.9%,TMV9.06%,CMV5.5%;未知病原样本20份占10.6%.     

植物单宁对烟草花叶病毒的抑制活性

测试了从11种植物提取的单宁对烟草花叶病毒(TMV)的抑制活性.结果表明:(1)任一植物的单宁质量浓度为5.000或2.500mg·mL-1时,与TMV混合10min后接种,其抑制率均达80%以上.(2)单宁质量浓度为5.000mg·mL-1时,与TMV混合后立即接种,其抑制率也均达80%以上,表明单宁与病毒粒体作用时间很短.(3)TMV与单宁混合,透析3d后,可恢复大部分侵染力;混合3d但未作透析处理,与混合10min的处理相比,抑制率下降,表明部分植物的单宁体外稳定性可能较差,与TMV粒体作用能力下降.(4)这11种植物的单宁对TMV体内抑制复制效果不明显.(5)大飞扬、杠板归、虎杖3种植物的单宁,在接种前先喷施心叶烟再接种TMV,可抑制病毒的初侵染;在接种前先喷施普通烟草K326再接种TMV,烟株发病期推迟3-8d.     

南京市郊萝卜病毒病的调查和病原鉴定

南京郊区萝卜病毒病以夏秋萝卜受害最重,但品种间的感病性有差异,主栽品种泡里红、五月红等十分感病,而中秋红和六十日早白萝卜发病很轻。芜菁花叶病毒(TuMV)是危害萝卜的主要病原;黄瓜花叶病毒(CMV)也占一定的比例;从少数样本中也分离到烟草花叶病毒(TMV)。约有1/3的样本是由两种或两种以上的病毒复合侵染,复合侵染病株中的病毒主要是芜菁花叶病毒、黄瓜花叶病毒、蚕豆萎蔫病毒(BBWV)和烟草花叶病毒。     

丽江烤烟漂浮育苗烟草花叶病毒检测及发生规律

 为查明丽江烟草漂浮苗病毒病原及有效预防烟草花叶病毒病提供依据,2006～2011年对丽江4县1区主要育苗点烟草漂浮苗进行随机抽样法取样采集16201份烟苗样品进行病毒血清学及形态学检测鉴定。结果表明：所采集的样品中仅检测出烟草花叶病毒,6年丽江总体烟草花叶病病毒病原阳性率占3.01%,表明烟草花叶病毒是危害丽江烟草漂浮苗的重要病毒病原。整体上丽江烟苗病毒病原阳性率由2006-2008的3.87%下降为2009-2011的2.14%,这主要是漂浮育苗技术推广的结果。仍出现较高的病毒病原阳性率的个别地方,需要加强育苗操作的管理。     

三叶鬼针草中黄酮甙对烟草花叶病毒的抑制作用

测试了从三叶鬼针草中提取的黄酮甙对烟草花叶病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的抑制作用.结果表明:黄酮甙对TMV具有明显的体外钝化作用,其质量浓度为100μg·mL-1时,对TMV的抑制率为91.3%,但对烟草体内病毒复制无显著的抑制效果;聚丙烯酰胺凝胶电泳显示黄酮甙与病毒外壳蛋白混合的泳带比对照明显滞后,表明黄酮甙可与TMV外壳蛋白结合,透析或萃取可使这种结合解离,使病毒恢复侵染力,说明黄酮甙对病毒无直接杀灭作用;用黄酮甙处理过的普通烟叶片,12h后接种病毒,可阻抑病毒初侵染,延迟病害症状的出现.