Rheological properties of kafirin and zein prolamins

The possibility of forming dough from kafirin was investigated and laboratory prepared kafirin was formed into a viscoelastic dough system. Measurements with Contraction Flow showed that dough systems prepared from kafirin and from commercial zein had the required extensional rheological properties for baking of leavened bread. The extensional viscosity and strain hardening of the kafirin and zein dough systems were similar to those of gluten and wheat flour doughs. The kafirin dough system, however, unlike the zein dough system rapidly became very stiff. The stiffening behaviour of the kafirin dough system was presumed to be caused by cross-linking of kafirin monomers. SDS-PAGE showed that the kafirin essentially only contained α- and γ-kafirin, whereas the zein essentially only contained α-zein. Since γ-kafirin contains more cysteine residues than the α-prolamin it is more likely to form disulphide cross-links, which probably caused the differences in stiffening behaviour between kafirin and zein dough systems. Overall the kafirin dough system displayed rheological properties sufficient for baking of porous bread. Kafirin like zein appears to have promising properties for making non-gluten leavened doughs.     

鉴定水稻品种的微卫星标记筛选

 选用58个水稻微卫星标记，对目前应用较广的28份杂交水稻亲本材料进行多态性分析，并比较了其中14个标记应用3.0%琼脂糖凝胶电泳和6.0%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测结果。研究表明，所应用的标记可将所有供试水稻材料区分开，不同标记的多态性检测能力差异较大；两种检测方法所得结果高度一致，但非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨率较高、带型清晰，能更准确反映水稻材料间的差异。对于一般水稻材料而言，选用12个标记可将不同材料区别开的几率大于99.9%，但要区分遗传相似性较高的材料，则可能需挑选高多态性标记和（或）增加检测的标记数。     

甘蓝型油菜叶片蛋白质双向电泳体系优化

比较了甘蓝型油菜叶片总蛋白质提取的2种不同方法,探讨了叶片蛋白质分离的双向凝胶电泳技术优化方案.结果表明:采用TCA/丙酮法较Tris-Cl法更适合蛋白质提取,选择pH为4～7的固相胶条和分离胶浓度为12％的聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)能够使蛋白质得到充分分离,采用考马斯亮蓝G250染色剂进行2次染色,可提高2-DE分辨率和实验解析度,优化后的双向电泳体系能够分离出2000个以上的蛋白点,并且重复稳定性好.     

Transglutaminase polymerisation of buckwheat (Fagopyrum esculentum Moench) proteins

Recently, screening of transglutaminase (TGase) treatment on several gluten-free cereals revealed significant improvements on the baking performances of buckwheat flour by promoting protein networks. In this study, the impact of TGase on the protein fractions of buckwheat flour was investigated in order to better understand the activity and specificity of the enzyme. Albumin, globulin, prolamin and glutelin fractions were extracted from the flour and incubated with TGase. Capillary electrophoresis, two dimensional (2D) gel electrophoresis and size exclusion chromatography (SEC) were performed on each fraction. Capillary electrophoresis and 2D gel electrophoresis revealed that buckwheat main storage proteins, i.e. 2S albumin, 13S and 8S globulin, were cross-linked after TGase treatment. SEC showed the presence of high molecular weight (HMW) protein polymers in the TGase-treated albumin and globulin fraction. Analysis of the amino acid composition of the fractions revealed high amounts of glutamine and lysine residues in all fractions. In conclusion, the increase in the average molecular weight of buckwheat proteins and the formation of HMW protein polymers after TGase treatment are responsible for the improved functionality of buckwheat flour in terms of breadmaking potential. The enzyme was revealed to be not fraction specific as all fractions were TGase-reactive.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测大豆过敏原蛋白Gly m Bd30K缺失方法

通过对现有SDS-PAGE电泳技术的样本前处理和制胶技术的改良,开发出了一种能够同时清晰鉴别7S球蛋白组分亚基(α',α,β-Subunit)和Gly m Bd 30 K谱带的SDS-PAGE电泳快速检测新技术.利用该方法对PI603570A×0329F6杂交组合F2群体的116个样本进行了7S球蛋白组分亚基(α',α...     

新聚丙烯酰胺凝胶电泳快速检测大豆脂氧酶缺失方法

通过对传统SDS-PAGE电泳技术中样品前处理及制胶技术的改进,开发出了一种能够清晰鉴别Lox-1与Lox-2同工酶的SDS-PAGE电泳快速检测新技术.利用新改进的方法,在289个CS8000(9)×FJ307(♂)F2杂交后代中,选拔出Lox-1,-2,-3同工酶完全缺失的个体27株,以及Lox-1,-3和Lox-...     

大豆种子贮藏蛋白11S和7S组分的研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，分析了我国122份大豆品种种子贮藏蛋白组分11S和7S的含量及11S／7S比值。11S在两种球蛋白中所占百分含量为40．67％-72．07％，平均值为60.84％，7S为27.93％～59.33％，平均值为39．16％，两者含量呈显著负相关(r=-0.95^**)；11S／7S比值范围为0．69～2.58，平均值为1.61，且与种子的总蛋白量、脂肪含量无显著相关。     

Susceptibility to Coolness at the Young Microspore Stage under High Nitrogen Supply in Rice (Oryza Sativa L.). Proteome Analysis of Mature Anthers

Abstract

In vitro pollen germination experiment using agar plates showed that the growth under high nitrogen conditions enhanced the damage to pollen germination ability caused by the cooling at the young microspore stage. To clarify the physiological factors related to this damage to pollen germination, we performed the comparative proteome analysis of mature anthers and identified proteins that were changed by high nitrogen conditions or high nitrogen plus cooling conditions. Proteins were extracted from mature anther samples and separated by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. By comparing anther protein maps of the samples collected from the plants grown under standard nitrogen conditions, high nitrogen conditions and high nitrogen plus cooling conditions, we found 11 protein spots, which varied with the treatment. These protein spots were identified based on the rice proteome database and/or peptide mass fingerprinting (PMF) analysis after digestion with trypsin. Digested samples were analyzed by matrix-assisted laser desorption/ionization-time flight mass spectrometry to produce PMF data. Database searches using these PMF data revealed the identities of 9 proteins. Seven of these proteins were polypeptides involved in cell elongation, stress responses and sugar metabolism. The relation between the fluctuations of these proteins and the decrease in pollen germination are discussed.     

小麦和黑麦品种醇溶蛋白的比较分析

为了分析普通小麦醇溶蛋白和黑麦醇溶蛋白的异同,运用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳法和反相高效液相色谱法对4个普通小麦品种和4个黑麦品种的醇溶蛋白进行了比较分析。在酸性电泳分析方法中,4个普通小麦品种共分离出16条迁移率不同的谱带,而4个黑麦品种共分离出10条谱带,每个品种在α、β、γ、ω四个区的分布频率也不相同。从谱带出现的频率和染色的深浅可明显看出普通小麦的醇溶蛋白含量远远大于黑麦品种。在反相高效液相色谱分析方法中,普通小麦分离出12～18个组分,黑麦品种分离出6～12个组分;普通小麦不同类型的醇溶蛋白出峰时间比较紧凑,而黑麦的出峰时间差异较大。反相高效液相色谱分析方法能很好地分离醇溶蛋白,且其更快速、简便、所需样品量少。     

Characterization of Agro-diversity by Seed Storage Protein Electrophoresis： Focus on Rice Germplasm from Uttarakhand Himalaya, India

The characteristics of 48 rice varieties from Uttarakhand Himalaya,India were detected by morphological and biochemical markers.The grains of the selected rice varieties varied in their morphological(grain length,grain width and grain weight)and biochemical characters(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE).Based on the presence of 70,65,60,57,37-39,22-23,13 and 10 kDa protein bands in the 48 rice varieties,seven types of profiles were identified.An unweighted pair group average ...     

种子蛋白乳酸尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术及其对向日葵自交系和杂交种的鉴定

在对已报道的酸性和碱性两大电泳系统多种方法的比较研究中,我们利用国产仪器和试剂,研究出了一项利用种子蛋白乳酸尿素聚丙酰胺凝胶电泳鉴定向日葵自交系和杂交种纯度的技术。该技术主要包括（１）改进了单粒种子脱脂程序,（２）筛选出有效的向日葵种子蛋白提取剂,（３）确定了凝胶制备的国产丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺的新配比,（４）优化了新的酸性凝胶聚合催化系统“Ａｐ－Ｖｃ－ＦｅＳＯ４ 的配比,（５）筛选出新的电极缓冲液,明确了最佳条件。该技术用于向日葵品种鉴定效果良好     

Solanum × berthaultii,a sensitive host for indexing potato spindle tuber viroid from dormant tubers

Summary When infected with mild and severe strains of potato spindle tuber viroid (PSTV), some clones ofSolanum × berthaultii developed severe symptoms, consisting of necrotic spotting of petioles and main stems and of leaf collapse. The necrotic, rolled leaves eventually dried and remained attached to the stem, any new leaves were small and the plant was severely stunted. Symptoms developed after inoculation with sap from potato foliage, sprouts, or tubers. Tubers could be indexed immediately after harvest or after storage. Single tubers could be tested by rubbing onto leaves ofS. × berthaultii either the cut surfaces of the suspect tuber directly or an extract of nucleic acid. Crude tuber extract proved unsatisfactory for inoculation. PSTV infection could be detected from as little as 31 to 7 mg of infected tuber tissue mixed with 1969 to 1993 mg of healthy tuber tissue (at a dilution factor of 64 to 256).

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Zusammenfassung Nach Infektion mit einem schwach oder stark aggressiven Stamm des Kartoffel-Spindle-Tuber-Viroids (PSTV), zeigten einige Klone vonSolanum x berthaultii die Entwicklung starker Symptome. Dabei ergaben sich nekrotische Flecken an Petiolen und Haupttrieben, begleitet von Kollabieren der Bl?tter. Die nekrotischen, eingerollten Bl?tter trocknen schliesslich aus, brechen jedoch nicht ab oder fallen herunter (Abb. 1). All neu entstehenden Bl?tter sind im Wachstum reduziert, die ganze Pflanze ist stark gestaucht. Symptome erscheinen nach Inokulation mit Saft aus Bl?ttern, Trieben oder Knollen (Tab. 1). Knollen konnten sowohl durch Abreiben der Schnittfl?chen der zu untersuchenden Knollen direkt auf Bl?tter oder durch Abreiben mit einem Extrakt von Nukleins?ure getestet werden (Tab. 1, 2). Rohe Knollen-Extrakt war nicht geeignet für Inokulation, aber rohe Sprossextrakt war ebenso brauchbar wie Knollen-Nukleins?ure (Tab. 1). PSTV-Infektion konnte noch bei Mischung von 31 bis 7 mg infizierten Gewebes mit 1963 bis 1993 mg gesunden Knollengewebes ermittelt werden (Tab. 2). Das Verh?ltnis von infiziertem zu gesundem Gewebe ist ?quivalent mit einer infizierten Knollen zu 63 bis 255 gesunden Knollen oder einem Verdünnungsfaktor von 64 zu 256. Bei Verwendung vonS. x berthaultii konnte PSTV von Knollen ermittelt werden, die von Kartoffelpflanzen abstammten, welche mit stark verdünntem PSTV-Inokulat behandelt worden waren (Tab. 3); es ist also m?glich, PSTV an im laufenden Jahr infizierten Kartoffelpflanzen zu entdecken. In einer Untersuchung von im Feld aufgewachsenen PSTV-verd?chtiger Knollen, konnte PSTV sowohl bei Knolleninfektion mit mild als auch stark aggressiven St?mmen ermittelt werden (Tab. 4). S. x berthaultii kann leicht bei Herstellung von Stengelabschnitten verbreitet werden. Ein Klon (Klon 26), der im Rahmen dieser Arbeit entwickelt wurde und einheitlich in Wachstum und seiner Reaktion gegen PSTV ist, sollte für den PSTV-Test verwendet werden. Diese Arbeit vermittelt ausserdem eine Methode zur Entwicklung weiterer PSTV-sensitiver Klone mitS. x berthaultii-Anteil, wenn Pflanzenquarant?ne-Regulierungen den Import fremderSolanum-Arten verbieten.

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Résumé Certains cl?nes deS. x berthaultii ont donné des sympt?mes graves après contamination par souches peu ou très agressives du viro?de en fuseau de la pomme de terre. Les sympt?mes se manifestent par des taches nécrotiques sur les pétioles et les tiges principales, avec un affaissement du feuillage. Les feuilles nécrosées et enroulées peuvent éventuellement se dessècher, mais elle restent attachées à la plante (fig. 1). La croissance de quelques jeunes feuilles est ralentie et la plante entière reste très chétive. Les sympt?mes appara?ssent après inoculation de jus obtenu à partir des feuilles, des germes ou des tubercules de pomme de terre (tableau 1). Les tubercules douteux pourraient être testés soit par frottis des surfaces coupées directement sur les feuilles soit par frottis avec un extrait d'acides nucléiques (tableaux 1, 2). L'extrait brut de tubercules ne donne pas entière satisfaction, alors que l'extrait de germes permet d'obtenir d'aussi bons résultats que l'extrait d'acides nucléiques provenant de tubercule (tableau 1). L'infection du viro?de en fuseau dans les tubercules peut être décelée pour des quantités faibles allant de 31 à 7 mg de tissu infecté et mélangé à une quantité allant de 1969 à 1993 mg de tissu de tubercules sains (tableau 2). Le rapport tissue infecté sur tissue sain équivaut à 1 tubercule infecté dans un lot de 63 à 255 tubercules sains, soit un facteur de dilution de 64 à 256. Le viro?de en fuseau a été détecté en utilisantS. x berthaultii à partir de tubercules provenant de plants infectés par un inoculum du viro?de très dilué (tableau 3). Mais il est préférable de le déceler dans la même année sur plantes contaminées. Au cours d'un contr?le d'essai de plein champ réalisé sur tubercules douteux, le viro?de en fuseau a été décelé sur des tubercules contaminés par des souches peu ou très virulentes (tableau 4). S. x berthaultii se multiplie facilement par boutures et un cl?ne (cl?ne 26) expérimenté dans cette étude a montré une croissance régulière et une réaction uniforme au viro?de en fuseau; il peut être ainsi utilisé pour tester le viro?de en fuseau de la pomme de terre. Cette étude peut servir également à rechercher d'autres cl?nes sensibles au viro?de et issus deS. x berthaultii, supprimant ainsi l'importation d'espèces étrangères deSolanum soumises à une mise en quarantaine.

     

马铃薯SSR标记聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

以马铃薯品种早大白、黄麻子、克新13、荷兰15、大西洋为试验材料,提取基因组DNA,进行SSR标记,并将标记产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,比较不同电泳参数(聚丙烯酰胺凝胶的浓度、电泳电压、染色方法)对电泳结果的影响。确定了适合马铃薯SSR标记的电泳检测体系,即聚丙烯酰胺凝胶的浓度为12%,电泳电压为170V,染色方法为溴化乙锭染色。