透明质酸产生菌的诱变选育及发酵工艺的研究

研究了透明质酸产生菌兽疫链球菌的诱变筛选及摇瓶发酵条件.通过紫外线和NTG复合诱变处理得到溶血性弱的菌株,突变菌株比出发菌株透明质酸产量提高1倍以上.同时,对摇瓶发酵条件进行了优化,确定了最佳发酵培养基、最适反应温度、最适pH、碳源及氮源的选择.     

发酵法生产透明质酸的工艺研究

本文主要研究兽疫链球菌（NACF－036）产透明质酸的条件及其特性。正交实验表明，产透明质酸的最合适培养基是：淀粉3％，蔗糖2％，酵母膏1％，蛋白胨2％，轻质碳酸钙0.1%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁0.1％。在37℃，170rpm，发酵40小时，发酵液中透明质酸的含量达3－4g/L。     

南昌霉素A产生菌原生质体诱变选育

南昌霉素 Ａ 产生菌———南昌链霉菌（ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｎａｎｃｈａｎｇｅｎｓｉｓ） Ｎ Ａ Ｗ － ３ 菌株经原生质体再生及原生质体紫外线照射处理后,通过摇瓶发酵筛选出高产株 Ｎ Ａ Ｗ－ ３（１） ,其产南昌霉素 Ａ 能力由出发菌株 Ｎ Ａ Ｗ － ３ 的１ ３８３ 单位／ ｍ Ｌ,提高到１ ８９５ 单位／ｍ Ｌ,产素能力提高了３７ ％ 。     

农用抗生素产生菌No.24菌株诱变选育研究

以No．24菌株为出发菌株，采用紫外线、化学试剂、微波及超声波诱变法对其进行诱变。其中经微波诱变50s后，筛选得到一株高产菌株，命名为Ms-24菌株。在培养基中连续培养10代，其遗传性状非常稳定。Ms-24菌株发酵试验证明，其发酵产量比出发菌株提高23．25％；抗菌活性试验证明，其发酵液的抗菌活性比出发菌株提高了31．75％。     

发酵法生产透明质酸的工艺研究

本文主要研究兽疫链球菌(NACF-036)产透明质酸的条件及其特性.正交实验表明,产透明质酸的最合适培养基是淀粉3%,蔗糖2%,酵母膏1%,蛋白胨2%,轻质碳酸钙0.1%,磷酸氢二钾0.2%,硫酸镁0.1%.在37℃,170rpm,发酵40小时,发酵液中透明质酸的含量达3～4g/L.     

壳低聚糖高产菌的诱变选育

[目的]探讨壳低聚糖高产菌诱变选育的方法。[方法]以壳低聚糖产生菌蓝色犁头霉ZH08为出发菌株,经紫外诱变和亚硝酸诱变处理,以对硝基乙酰苯胺为指示剂,利用双层平板颜色反应法,挑取菌落黄色比较深的脱乙酰酶高活性突变株,再经摇瓶发酵复筛,以获得壳低聚糖产量较高的菌株。[结果]通过对出发菌株ZH08进行理化诱变,获得突变株共7株（XH01～07）,经过反复传代和筛选,这几株突变株的壳低聚糖含量均高于出发菌株,其中XH05菌株的壳低聚糖含量最高,其产量稳定在1.07 g/L,比出发菌株提高72.6%。[结论]利用对硝基乙酰苯胺作为筛选具较高甲壳素脱乙酰酶酶活的跟踪试剂,用于筛选壳低聚糖高产菌株,是一种快速、有效的筛选方法。     

发酵法生产透明质酸菌种的筛选

[目的]寻找利用发酵法生产透明质酸的菌株。[方法]从奶牛鼻黏膜分离到1株透明质酸产生菌,对其进行筛选和菌落生化反应鉴定。分别用紫外线诱变和亚硝基胍诱变处理该菌株,研究诱变前后透明质酸含量的变化。[结果]经初步鉴定该菌株为兽疫链球菌的C群链球菌。筛选菌株的产物呈典型的HA红外吸收图谱。经诱变处理后,菌种菌落形态更大且更明显,呈黏液状。该菌株透明质酸的产量由初始菌株的3.69g/L提高到6.94g/L。[结论]该研究为利用发酵法生产透明质酸提供了科学依据。     

透明质酸的发酵及提取工艺

采用诱变筛选获得的马疫链球菌EF02,发醇后透明质酸(hyaluronic acid,HA)的产量达3.05g/L,通过单因素及正交试验摇瓶培养优化发酵培养基,再经15L发酵罐发酵,发酵后HA的产量为3.47g/L,与EF02优化处理前相比,提高了13.77%;通过对发酵条件优化,发酵后HA的产量为3.66g/L,与EF02优化处理前相比,提高了20.0%。对产物HA进行分离纯化,HA提取率达98.36%,HA纯度达91.28%,蛋白质残留率为0.97%。     

重离子辐照阿维菌素产生菌的诱变选育

应用不同剂量12C+6重离子束对出发菌株ZJAV-A1进行辐照选育,并应用高效液相色谱法测定发酵液中有效组分B1a的含量.结果表明:当重离子束12C+6离子的辐照剂量为50Gy时,B1a含量的延变率最高,为34.2%;诱变后的菌落共培养出4种菌型,即草帽型、馒头型、光秃型和皱缩型,其中,草帽型高产菌株ZJAV-Y203的发酵液中B1a组分比出发菌株提高了51.43%.说明利用12C+6重离子束辐照处理阿维菌素产生菌,可以得到高产B1a组分的诱变菌株,其诱变效果显著.     

NTG对南昌霉素产生菌的诱变选育

采用不同浓度的NTG诱变剂,对南昌霉素产生菌南昌链霉菌80-5.3-116菌株的孢子进行处理。结果表明,500μg/ml的诱变浓度对孢子致死率达79.92%,具有较好的诱变效果;初筛摇瓶产量比出发菌株提高20%以上的菌株有54株,占菌株的54%;连续3批进一步摇瓶复筛,并对复筛结果进行分析,发现116-5.8-64菌株所产南昌霉素活性单位高达9571.4mg/ml,比出发菌株提高了116.7%,差异达到极显著水平。     

纤维素酶产生菌的筛选

从自制腐烂稻草及附近土壤筛选分离到一株高纤维素酶活性的纤维素分解菌ZJ-8,经初步鉴定为根霉菌.经紫外诱变后,该菌羧甲基纤维素酶活性最高达11.07～14.5 IU/mL,对滤纸有较强的降解能力,并且具有稳定的遗传性.该菌最适生长条件温度为30 ℃,pH值为5.     

苯丙氨酸基因工程受体菌的选育

以大肠杆菌（E．coli）野生型菌株ym1013为出发菌株，通过NTG诱变筛选，得到一株酪氨酸营养缺陷型菌株Tyr2；以Tyr2为出发菌株，紫外诱变，得到一株对氟苯丙氨酸耐受性达8mg／mL的菌株ZC6，其苯丙氨酸的产量是出发菌株ym1013的6倍。     

壳聚糖酶高产菌的筛选、鉴定与发酵产酶初探

壳聚糖酶(EC3.2.1.132)能催化壳聚糖分子中β1,4糖苷键的水解,以获得具有特殊生理活性的壳聚寡糖(聚氨基葡萄糖,聚合度2-10)。该酶在细菌、真菌等多种微生物中存在。采用透明圈法,以壳聚糖为唯一碳源,从11份虾蟹壳堆积的土壤中分离出51株能降解壳聚糖的菌株。经平板初筛、摇瓶发酵复筛以及产酶动力学研究,确定H₂为产壳聚酶活力高、发酵时间短的优良菌株。根据其形态及培养特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定该菌株为浅玫瑰色链霉菌,并命名为(Streptomyces roseolus DH)。进一步的基本发酵条件研究显示：该菌株发酵最适温度为30 ℃,发酵液初始pH为7.2,最适碳源为1%胶体壳聚糖,最适氮源为0.5%蛋白胨。此条件下经60 h发酵,发酵液中壳聚糖酶活力可达(6.10±0.12) U/mL。此菌株产酶量高,发酵周期短,具有良好的应用潜力。     

腐败稻草中产纤维素菌种的筛选及产酶条件研究

从腐败稻草草垛下土中筛选出1株纤维素酶CMCase(羟甲基纤维素酶)和FPA(滤纸酶)活力较高的菌株C-4-1-1,试验结果表明,其生长最适pH值为4.0～6.0,最适温度为28～35 ℃,好氧,在CMC筛选平板上生长良好.温度、起始pH值、碳源,氮源等都对菌株C-4-1-1产酶有较大的影响,产酶最佳条件为温度35 ℃,起始pH值4.5,碳源为稻草,氮源组合为蛋白胨+酵母膏.     

甘蔗根际土壤产木聚糖酶菌株的筛选及鉴定

以木聚糖为唯一碳源,从甘蔗根际土壤中筛选木聚糖酶产量较高的菌株。根据筛选培养基上水解圈的大小和摇瓶培养后木聚糖酶的酶活力筛选到产酶量高的菌株Xw2,其水解圈与菌落的直径比为2.3及初筛酶活力达113.8205 IU.mL-1。并利用形态学及基于核糖体DNA ITS序列构建进化树分析鉴定Xw2菌株为一株木霉。     

稻草降解及产油菌的筛选

本文筛选出了六株纤维素降解菌,其中菌株f8在稻草固态发酵培养基中产CMC酶活和FPA酶活最大分别为260.32 U和18.90 U,经初步鉴定为康宁木霉。菌株f3既能降解纤维素,又能产油脂,且在PDA液体培养基上油脂产率达到25%。经初步鉴定为绿色木霉。     

一株碱性脂肪酶产生菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

【目的】从土壤中分离筛选具有较高酶活力的脂肪酶产生菌,并进行菌种鉴定和酶学性质研究.【方法】以橄榄油为唯一碳源,采用中性红油脂平板初筛,再用改进铜皂-分光光度法测定酶活力进行复筛;利用形态学观察、生理生化试验和16SrDNA序列分析进行菌种鉴定,并对脂肪酶的酶学性质进行研究.【结果】筛选出4株产脂肪酶菌株,其中菌株LZ-24脂肪酶活力最高,为3.28U/mL;菌种鉴定为液化沙雷氏菌;该菌所产脂肪酶在15~45℃时稳定性较高,最适作用温度为45℃;在pH值7.0~9.0时稳定性较高,最适pH值为8.0;Ca2+、Mg2+和吐温20对脂肪酶有激活作用;Fe2+、Zn2+对脂肪酶有抑制作用,EDTA、SDS则使脂肪酶失活;该酶对丙三醇耐受力较高.【结论】菌株LZ-24所产脂肪酶的酶活力高,是一种碱性脂肪酶,并且作用温度较高,有望应用于食品加工业和洗涤剂行业.     

产共轭亚油酸乳酸菌的筛选及产物分析

为获得共轭亚油酸 (CLA)乳酸菌的菌种 ,从酸菜汁中筛选出 1株CLA生成能力较强的的乳酸菌 ,发酵液中CLA生成量为 2 6 7 5 μg·mL-1。此株为革兰氏阳性杆菌 ,过氧化氢酶阴性 ,4 5℃下生长 ,15℃基本不生长。基于生化试验和培养基成分的利用情况 ,鉴定为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum。经气相色谱检测 ,该菌种合成的CLA产物为c9,t11/t9,c11 CLA和t10 ,c12 CLA的混合物。     

产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌益生菌株的筛选及其生长特性研究

根据纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)水解酪蛋白和羧甲基纤维素的生物学特性,以菌株NB-1和NR-l为出发菌株,采用稀释涂平板法获得10株初筛纳豆芽孢杆菌,通过测定初筛菌株48 h发酵液中蛋白酶活性和纤维素酶活性,确定NY-3产蛋白酶和纤维素酶活性均相对较高.同时对该菌株生长特性进行了研究....     

一株产蛋白酶菌株的筛选鉴定及酶学性质分析

通过测量比较在牛奶平板上产生水解圈的大小,从韶关土壤中分离筛选获得一株产蛋白酶的ms2菌株。对该菌株的形态结构、生理生化特性以及16S rDNA序列的比对分析,鉴定该菌株为粘质沙雷菌(Serratia marcescens)。对该菌株进行液体发酵,其发酵液中的蛋白酶最适反应p H值为10.0,表明发酵液中含有碱性蛋白酶;最适反应温度45℃,45℃保温处理100 min后,酶活性仍保留70%以上,表明蛋白酶具有较强的热稳定性。1 mmol/L的Mn2+对酶有激活作用,但1 mmol/L的Cu2+和Fe2+对酶具有明显的抑制作用;EDTA对蛋白酶也具有明显的抑制作用,说明发酵液中含有金属蛋白酶。与Alcalase碱性蛋白酶相比,发酵液中的蛋白酶对大豆分离蛋白水解能力更强。在单因素试验中,干酪素和蔗糖分别为氮源和碳源时,发酵液蛋白酶的活性最高。