克隆荷斯坦牛乳成分初步分析

克隆奶牛的乳成分过去鲜有报道,2007年6～7月,我们对新疆金牛生物有限公司6头克隆荷斯坦泌乳牛的乳成分进行了初步分析,现将结果简报如下:     

中国荷斯坦奶牛CCR5基因克隆、生物信息学及表达分析

试验旨在克隆中国荷斯坦奶牛CC趋化因子受体5(C-C chemokine receptor type 5,CCR5)基因,对其进行生物信息学分析,并探究CCR5基因在奶牛炎性和健康组织中的表达水平。采用PCR技术扩增并克隆荷斯坦奶牛CCR5基因CDS区全长序列,连接pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,通过蓝白斑方法筛选阳性克隆并测序,对序列进行相似性比对及系统进化树构建;应用多种在线生物信息学软件对其编码蛋白进行分析,并利用实时荧光定量PCR方法检测CCR5基因在健康和炎症奶牛乳腺组织中的表达情况。结果显示,中国荷斯坦奶牛CCR5基因CDS区全长1 059 bp,编码352个氨基酸。相似性和遗传进化分析结果显示,奶牛CCR5基因与绵羊的遗传距离最近,高达96.0%,与鸡遗传关系最远,为61.0%,且在不同物种之间CCR5基因高度保守。中国荷斯坦奶牛CCR5蛋白分子质量为40.235 ku,理论等电点(pI)为9.30,为疏水性蛋白但不是分泌蛋白,主要存在于细胞质内;在CCR5蛋白二级结构中α-螺旋和无规则卷曲分别占51.14%和32.95%,三级结构模型预测结果与二级结构一致。实时荧光定量PCR结果显示,CCR5基因在健康奶牛乳腺组织中的表达量极显著低于炎性奶牛乳腺组织(P<0.01),提示其可能参与奶牛乳腺炎的发生过程。本试验结果为进一步研究奶牛CCR5蛋白的功能提供了理论依据,对探究奶牛CCR5基因在奶牛乳腺炎中的调控功能等具有重要意义。     

中国荷斯坦奶牛MOET育种体系的建立与实施

与世界大多数国家一样,迄今我国采用的奶牛育种方案,被称为“人工授精育种体系”即“AI育种体系”,其主要特点是：大规模使用种公牛的冷冻精液;在牛群中实施以获得优秀种公牛后代为目的的“定向选配”有计划地通过性能测定和后裔测定等育种措施,选育优秀种公牛;在育种群和生产群中全面使用“验证公牛”。这种育种体系的实施,可以在种子公牛即“公牛父亲”和种子母牛即“公牛母亲”的选择上实现一个较高的选择强度,在牛群的产奶性状和次级性状上获得较大的选择精确性。但AI育种体系最明显的缺点是：由于大规模的后裔测定,耗费大量…     

中国荷斯坦奶牛改良本地黄牛的效果分析

通过引进中国荷斯坦奶牛冻精,对柴达木黄牛进行杂交改良,结果平均受配率达到92．4％,共产犊牛3385头,成活3347头,成活率98．9％,每头奶牛日产鲜奶23．1kg,年产鲜奶4000-7000kg。     

中国荷斯坦奶牛ABCG2基因外显子9多态性研究

本研究旨在寻找ABCG2基因上与产乳性状相关的多态位点,为提高产乳性状提供理论依据。本研究采用PCR-SSCP技术分析了ABCG2基因exon9的多态性。使用SAS9.0对多态性与产乳性状之间的相关性进行方差分析。研究结果表明,在exon9中存在A→G突变,导致氨基酸由酪氨酸突变为半胱氨酸。A、B 2个等位基因的频率分别为0.86和0.14;存在3种基因型:AA、AB和BB型,基因型频率分别为:0.73、0.26、0.01;多态信息含量为0.22。方差分析结果显示,3种基因型间5种产乳性能的差异不显著。Y367C与产乳性状的相关性不明显,由于突变前后氨基酸性质发生了改变,可能会对蛋白质的结构产生一定的影响。     

中国荷斯坦奶牛副结核病的诊治

牛副结核病是一种慢性传染病，尤其是集约化的奶牛场更易感染。本病各国均有发生，已被认为是世界性牛病之一。目前，我国部分地区流行相当严重，有的地区或牛群的病牛检出率为11％-24％，个别的甚至高达75％，给养牛业造成巨大损失。现将黑龙江省牡丹江垦区八五一一农场某队中国荷斯坦奶牛发生的副结核病发病情况、临床表现、尸体剖检、诊断和防治等情况介绍如下。     

中国南方地区荷斯坦奶牛BoLA-DRB3.2的RFLP分析

用PCR-RFLP方法检测中国南方地区奶牛BoLA-DRB3.2的RFLP多态性。选用RsaI、HaeIII和Bst YI酶切PCR扩增产物,14%PAGE分离酶切片段。HaeIII位点检测到6种等位基因,RsaI位点检测到11种等位基因,而在BstYI位点仅检测到4种等位基因。结果表明BoLA-DRB3.2的多态性极其丰富。PCR-RFLP是BoLA-DRB3分型的一种快速而有效的方法。     

荷斯坦奶牛BoLA—DRB3基因多态性与乳房炎相关性分析

本研究采用HaeⅢ和EstY Ⅰ内切酶,以PCR-RFLP方法分别检测了新疆地区引进的澳大利亚荷斯坦奶牛BoLA-DRB3基因的多态性及其与乳房炎的相关性.结果共检测到9种基因型5种等位基因.其中基因型HaeⅢAB和Bsty ⅠAA为优势基因型.等位基因HaeⅡA和Bsty Ⅰ A为优势基因;在高于健康牛的分布频率中,基因型HaeⅢAB和Bsty ⅠAB,基因HaeⅢB和BstY Ⅰ A基因频率在感染牛中分布频率最高:在高于感染牛的分布频率中.基因型HaeⅢAA和BstY Ⅰ AA,基因HaeⅢA和BstY Ⅰ A在健康牛中分布频率最高.经X2适合性检验,HaeⅢ酶切位点的碱基突变偏离平衡状态(P<0.01),而BstY Ⅰ酶切位点碱基突变达到平衡状态(P>0.05);HaeⅢ酶切基因型和基因频率在感染牛和健康牛中分布差异均极显著(P<0.01);BstYⅠ酶切基因型和基因频率在感染牛和健康牛中的分布差异均不显著(P>0.05).     

中国荷斯坦奶牛催乳素基因多态性与泌乳性能关联性分析

【目的】为了了解中国荷斯坦奶牛催乳基因多态性与泌乳性能的关联性,【方法】采用PCR-RFLP技术对新疆地区357头中国荷斯坦奶牛催乳素(PRL)基因多态性进行了分析。【结果】表明,检测到三种基因型(AA、AB、BB)的基因型频率分别为0.6466、0.2461、0.1073。【结论】催乳素基因在此中国荷斯坦奶牛群体中处于Hardy-Weinberg不平衡状态。催乳素基因的杂合度为0.1008,有效等位基因数为0.8943,多态信息含量为0.1001,属于低度多态。同时对所发现的多态位点与奶牛产奶性状的关系进行了分析,探讨了催乳素基因作为影响中国荷斯坦牛产奶性状候选基因的可能性。     

Application of imputation methods to genomic selection in Chinese Holstein cattle

Missing genotypes are a common feature of high density SNP datasets obtained using SNP chip technology and this is likely to decrease the accuracy of genomic selection. This problem can be circumvented by imputing the missing genotypes with estimated genotypes. When implementing imputation, the criteria used for SNP data quality control and whether to perform imputation before or after data quality control need to consider. In this paper, we compared six strategies of imputation and quality control using different imputation methods, different quality control criteria and by changing the order of imputation and quality control, against a real dataset of milk production traits in Chinese Holstein cattle. The results demonstrated that, no matter what imputation method and quality control criteria were used, strategies with imputation before quality control performed better than strategies with imputation after quality control in terms of accuracy of genomic selection. The different imputation methods and quality control criteria did not significantly influence the accuracy of genomic selection. We concluded that performing imputation before quality control could increase the accuracy of genomic selection, especially when the rate of missing genotypes is high and the reference population is small.     

夏季皖东牛与荷斯坦牛皮肤汗腺及其散热调节特征

为了探究夏季高温时皖东牛与荷斯坦牛皮肤组织形态和皮肤散热调节特征的差异,在30℃以上的夏日,选择皖东牛和荷斯坦牛母牛各4头,屠宰后采集颈部、肩部、背部、腹部、臀部和腿部6个部位的皮肤样本,通过HE染色切片分析皮肤的汗腺(SWG)与皮脂腺(SEG)的分布与形态,测定皮肤组织乙酰胆碱(ACh)浓度及乙酰胆碱转移酶(AChT)和酯酶(AChE)活力,采用RT-qPCR和Western blot检测皮肤组织乙酰胆碱M3受体(ACh M3R)、一氧化氮合酶(eNOs)及水通道蛋白5(AQP5)mRNA和蛋白的表达。结果:部位间比较,皖东牛与荷斯坦牛表皮厚度均为背部最厚,颈部最薄(P<0.05)。品种间比较,皖东牛平均皮肤厚度较高,平均表皮厚度较薄(P<0.05);汗腺密度与皮脂腺密度品种间无显著差异(P>0.05);皖东牛汗腺和皮脂腺的平均长度、直径、深度、体积均显著增加(P<0.05)。肩部、背部和臀部皮肤对比:夏季皖东牛和荷斯坦牛皮肤组织ACh浓度品种间无显著差异(P>0.05),部位间以臀部最高,肩部次之,背部最低(P<0.05)。ACh M3R和AQP...     

猪传染性胃肠炎病毒河北分离株核衣壳N蛋白基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR技术扩增了TGEV河北分离株的N基因,长度约为1 149 bp. 将该基因片段进行亚克隆重组到pMD18-T质粒载体上,连接转化,鉴定后得到阳性重组质粒pTN.对重组质粒插入的目的基因片段进行序列分析和比较,结果表明TGEV河北分离株N基因与国外的Purdue-115、FS772/70、TO14、96-1933株有≥95%的同源性;推导的氨基酸序列同源性≥95%.TGEV N基因的克隆及序列分析,为其蛋白质的表达分析提供了重要依据,也为进一步讨论该病毒的分子生物学特性奠定了理论基础.     

Comparison of Estimated Genetic Connectedness among Three Herds of Chinese Holstein Cattle

Estimating genetic connectedness among herds is important for the accuracy of dairy cattle genetic evaluation. When selecting between animals raised in different herds, the accuracy of their genetic evaluations can be influenced by the degree of connectedness among these herds. In this study, two methods were used to measure genetic connectedness, CR （genetic connectedness rating ） and GLt （total number of direct genetic links between group）, among herds from Beijing, Shanghai, and Tianjin. Genetic connectedness between the herds from Beijing and Tianjin was 23.95%, between Beijing and Shanghai was 17. 10%, and between Shanghai and Tianjin it was 14.28%. Genetic connectedness between herds from Beijing and Tianjin was the highest and that between Shanghai and Tianjin was the lowest. The correlation coefficient for the two methods was 0. 808. Some suggestions for improved genetic evaluation of dairy cattle were also discussed.     

南方地区中国荷斯坦牛乳中体细胞数变化规律的研究

采用最小二乘法分析了南方地区某奶业集团2006年7个牛场2 063头中国荷斯坦牛22 377次乳中体细胞数(SCC)测定日记录,以揭示SCC的变化规律.结果表明乳中SCC为459.49×103士924.66×103个/mL,不同牛场、月份、泌乳月和胎次对乳中体细胞数的影响均达到极显著水平(P＜0.01),而产犊季节对乳中SCC的影响未达到显著水平(P＞0.05).SCC随着胎次和泌乳月的增加有升高的趋势.     

Reference ranges of hematology and lymphocyte subsets in healthy Korean native cattle (Hanwoo) and Holstein dairy cattle

There are no accurate reference ranges for hematology parameters and lymphocyte subsets in Korean native beef cattle (Hanwoo). This study was performed to establish reliable reference ranges of hematology and lymphocyte subsets using a large number of Hanwoo cattle (n = 350) and to compare differences between Hanwoo and Holstein dairy cattle (n = 334). Additionally, age‐related changes in lymphocyte subsets were studied. Bovine leukocyte subpopulation analysis was performed using mono or dual color flow cytometry. The leukocyte subpopulations investigated in healthy cattle included: CD2⁺ cells, sIgM⁺ cells, MHC class II⁺ cells, CD3⁺CD4⁺ cells, CD3⁺CD8⁺ cells, and WC1⁺ cells. Although Hanwoo and Holstein cattle are the same species, results showed several differences in hematology and lymphocyte subsets between Hanwoo and Holstein cattle. This study is the first report to establish reference ranges of hematology and lymphocyte subsets in adult Hanwoo cattle.     

中国荷斯坦牛GlyCAM1基因遗传多态性的研究

以273头中国荷斯坦牛为研究对象,利用CRS—PCR、PCR—SSCP及DNA测序技术检测了GlyCAM1基因外显子3、内含子3的遗传多态性。结果表明：GlyCAM1基因分别在外显子3和内含子3的第2081（A／C）、2417（C／T）位存在突变,2个位点的等位基因频率A／B分别为0．7525,0．2475和0．9046,0．0954;经菇。适合性检验,中国荷斯坦牛内含子3的突变达到Hardy—Weinberg平衡状态（P〉0．05）,但其外显子3的突变未达到Hardy—Weinberg平衡状态（P〈0．05）。     

中国荷斯坦奶牛RPL23A、ACACB基因3个SNPs检测及其与产奶性状的关联分析

旨在开展奶牛群体高乳成分功能基因的验证与筛选,利用微流控芯片自主选育技术分析北京地区母牛群体高乳蛋白、高乳脂基因频率,同时分析基因多态性及其与产奶性状的相关性。本研究对北京地区8个大型奶牛场1 596头中国荷斯坦奶牛RPL23A、ACACB基因的多态性进行了检测,所有个体均为3胎以内的泌乳牛,收集每头牛所有测定日的产奶量、乳脂率、乳蛋白率等数据,同时对3个多态位点不同基因型与产奶性状进行了关联分析。RPL23A基因的SNP位点g.20146771G>A,在第一泌乳期,与产奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白量均达到极显著关联（P<0.01）,第二泌乳期,g.20146771G>A与5个产奶性状均呈极显著关联（P<0.01）。ACACB基因的SNP位点g.63962768C>T,在第一泌乳期,与产奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白量均呈极显著关联（P<0.01）,在第二泌乳期,与产奶量、乳脂量、乳脂率和乳蛋白率呈极显著关联（P<0.01）。结果表明,RPL23A、ACACB基因可以作为影响中国荷斯坦奶牛产奶性状的候选基因用于标记辅助选择,以上基因位点可能通过直接或间接的途径影响奶牛的乳脂或乳蛋白性状,对产奶性状起到重要调控作用。本研究为荷斯坦奶牛后续的标记辅助选择奠定了良好基础。     

塔乌库姆冰草肌动蛋白基因片段的克隆及序列分析

根据其他植物Actin基因的保守序列设计一对简引并性物,以塔乌库姆冰草叶片总RNA为模板,采用RT-PCR的方法扩增出Actin基因片段并连接到载体上,阳性克隆经PCR检测后进行测序。结果表明：该片段长约600bp,编码199个氨基酸,所得序列与GenBank中注册的其他植物Actin基因序列同源性均在81%以上,与其他肌动蛋白的氨基酸序列同源性达88%。     

7种动物冠状病毒特异基因的克隆与序列分析

为了比较冠状病毒基因相关性,获得特异基因克隆制备冠状病毒基因芯片,根据发布的基因序列,每种病毒设计4~17对引物,利用火鸡冠状病毒(TCV)原毒和蔗糖密度梯度离心纯化浓缩的犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、牛冠状病毒(BCV)细胞毒,提取总RNA并反转录和PCR扩增。回收PCR产物连接pGEM-T-easy载体并转化大肠杆菌TGI,经PCR鉴定后测序。将所有基因片段的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,分别与GenBank有关病毒相关基因片段的核苷酸序列进行分析比较,确定它们的同源性。通过对不同冠状病毒不同基因片段的克隆和测序,发现同一群冠状病毒核苷酸序列间具有较高的同源性。