剑尾鱼RW-H近交系20个微卫星位点的遗传结构

为了对水生实验动物剑尾鱼(Xiphophorus helleri)RW-H系近交15代的遗传结构进行研究,寻找该近交系的标志基因位点,选择20个在野生剑尾鱼群体具多态性的微卫星位点,对剑尾鱼RW-H系(红眼白体)30尾个体进行分析。结果表明,其中有17个位点为单态,有可能作为该近交系的标志基因位点;另外3个位点Msa012、Msa033和Msc036具有多态性,多态信息含量值分别为0.3047、0.3457和0.3648。通过Pop-gene 3.2软件分析得知全部基因位点的纯合率达到了95.83%,个体间平均遗传距离为0.0482(0.000 0~0.1625),遗传相似系数为0.9518(0.8500~1.0000),说明剑尾鱼RW-H系已经具有很高的近交程度。几个多态性位点的发现,可以指导近交选育,加快选育进度。本研究方法不仅检测出剑尾鱼RW-H系具较低的遗传多样性,而且可为中国建立分子水平的实验动物监测标准提供基础数据。     

微卫星标记在RR-B系剑尾鱼遗传监测中的应用

采用49对微卫星引物对RR-B系剑尾鱼和红眼红体的非选育系剑尾鱼进行PCR扩增,有46个微卫星座位能获得稳定的扩增产物,7个微卫星座位能区分RR-B系与非选育群体剑尾鱼。7个微卫星座位在选育系剑尾鱼为单态纯合,而在非选育群体具有多态性,座位Msa014鉴定RRB系剑尾鱼排除概率最高,为98.75%,座位Msd003排除概率最低达到了87.50%,其余5个座位排除概率介于两者之间。为方便今后的遗传监测,对RR-B系剑尾鱼样品的7个微卫星座位进行了测序,确定了其大小和具体的微卫星结构。本实验建立了RR-B系剑尾鱼分子检测方法,为实验动物剑尾鱼的遗传监测奠定了基础。图4表3参23     

剑尾鱼的若干生物学特性研究

与哺乳类实验动物相比,鱼类实验动物在环境监测、药理实验以及肿瘤学等研究中,独具一些无可取代的特点。目前国外已有近交超过５０代的光亮拟胎（Ｐｏｅｃｉｌｉｏｐｓｉｓ　ｌｕｃｉｄａ）和孤独拟胎（Ｐ、ｍｏｎａｃｈａ）等纯合系的鱼类实验动物［１］。剑尾鱼（Ｘｉｐｈｏｐｈｒｕｓ ｈｅｌｌｅｒｉＨｅｃｋｌ１８４８）是一种热带淡水小型鱼类,目前已通过近亲繁殖达第１８代。这是我国首次以鱼类作为实验动物为目的而进行的定向纯化培育。本文总结多年来对其若干生物学特性的观察研究结果,为其今后的实际应用提供基础数据。１材料…     

剑尾鱼 2 种卵黄蛋白原全长 cDNA 的克隆及序列分析

卵黄蛋白原是环境雌激素效应研究的重要生物标志物,广泛应用于水环境内分泌干扰物污染的评价。本研究利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆获得了剑尾鱼(Xiphophorus helleri)的2种卵黄蛋白原基因—VgA和VgB,并对其基因结构和系统进化进行分析。VgA基因cDNA序列全长5159bp,开放阅读框(ORF)5058bp,编码1685个氨基酸。VgB基因cDNA序列全长5349bp,开放阅读框(ORF)5067bp,编码1688个氨基酸。2种cDNA序列均具有与已发现的卵黄蛋白原分子相似的主要特征和功能域,包括Vitellogenin结构域、VWFD结构域和多聚丝氨酸区域,且与已知其他鱼类卵黄蛋白原基因有较高的同源性。     

剑尾鱼的养殖及疾病防治

剑尾鱼(Xiphophorus helleri Heckel)，隶属于花鳉科(Poeciliidae)，剑尾鱼属(Xiphophorus)。原产于大西洋墨西哥南部(德玛兰)至危地马拉。     

剑尾鱼的生活习性及人工繁育

剑尾鱼 (Ｘｉｐｈｏｐｈｏｒｕｓｈｅｌｌｅｒｉ ) ,别名剑鱼、青剑 ,英文名Ｓｗｏｒｄｔａｉｌ。隶属于花鳉科 (Ｐｏｅｃｉｌｉｉｄａｅ ) ,胎鳉属。原产地墨西哥、危地马拉。一、形态特征体呈纺锤型。剑尾鱼长至约 4月龄 ,雄鱼尾鳍的下叶延长 ,末端尖锐成剑状 ,剑尾呈绿色或橙色 ,边缘为黑色 ;而雌鱼无剑尾 (少数老年的雌鱼可能长出剑尾 ) ,但腹部较雄鱼膨大。雌鱼全长约 5～ 8ｃｍ ,雄鱼全长 7～ 11ｃｍ ;二者在体色上无明显区别。剑尾鱼的体色原本是浅蓝色 ,体侧有一条红色条纹自眼睛直达尾部。雄鱼的背鳍有红点 ,雌鱼无红点。剑尾鱼的…     

剑尾鱼属鱼类种间杂交初探

设3个试验组, 以2种月光鱼与3种剑尾鱼进行属内种间杂交试验,并对子一代的眼睛色彩、体型、体色及雄鱼的尾鳍形状等与观赏性相关的表现性状进行了统计分析,初步判定:眼睛色彩的遗传规律为红色由隐性基因控制,黑色由显性基因控制;子一代体型、体色为中间型的比例均高于偏向父母一方的体型的比例;子一代中的雄鱼以继承母本月光鱼圆尾特征为主。     

观赏剑尾鱼的繁殖与饲养

1 剑尾鱼的形态特征 剑尾鱼又名剑鱼、清剑,原产墨西哥南部及危地马拉. 剑尾鱼的原始种是青剑鱼,体色呈浅蓝绿色,体形呈长纺锤形、侧扁,体长可达12cm.雄鱼有剑尾,背鳍有红点,雌鱼无剑尾,背鳍无斑点.     

剑尾鱼的人工饲养技术

剑尾鱼(Xiphophorus hellen)，又名青剑、剑鱼，其英文名(Swordtail)，隶属于花(鱼将)科，胎(鱼将)属，原产于墨西哥、危地马拉。     

Intercohort cannibalism and parturition-associated behaviour of adult swordtail, Xiphophorus helleri Heckel (Pisces: Poeciliidae)

The post‐parturition behavioural patterns of adult Xiphophorus helleri (Heckel) were described and quantified by recording their duration and/or frequency in glass tanks. All births occurred in the dark. Female behaviour might increase the chance of newborn juvenile survival: at the top of the tank, where juveniles are more vulnerable to predation, the females gave birth in the artificial refuge, while no parturition took place in the refuge at the bottom. Birth‐giving females were no less cannibalistic than males and other females. There was a reduction in cannibalism and the frequency of secondary attacks with time, even though the number of juveniles in the tank continued to increase due to ongoing parturition. Most adults were found at the bottom of the water column during the first 500 min of parturition, after which they were distributed equally in the water column. The movement of adults, away from the bottom and consequently away from the juveniles corresponded with an increase in feeding on alternative food and a reduction in cannibalism. Thus, cannibalism in swordtail might be opportunistic predation.     

剑尾鱼线粒体DNA D-环及侧翼tRNA↑（thr）和tRNA↑（pro）序列与结构分析

采用PCR方法从剑尾鱼(Xiphophorus helleri)线粒体基因组中扩增到1段约15．5kb的片段，测定了其中627个碱基的序列。经测序分析表明，该扩增片段包括486bp的D—环的部分序列以及D—环5端的tRNA^trh和tRNA^pro基因的完整序列。其中486bpD环序列包含3段保守的终止相关序列TAS、与TAS互补的序列以及类似其他鱼类线粒体CSB序列。tRNA^trh由线粒体DNA的H链编码，长度为72bp。tRNA^pro由线粒体DNA的L链编码，长度为69bp。并绘制了这2种tRNA的二级结构图。本研究所测定的基因序列已登录国际GenBank数据库，序号为AF489918。     

剑尾鱼卵黄蛋白原基因片段克隆、表达及蛋白检测方法的建立

本研究通过对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达,建立了剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法.根据已发表的底鳉(Fundulus heteroclitus)卵黄蛋白原mRNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出1段1 118 bp的剑尾鱼卵黄蛋白原cDNA片段,序列分析表明该片段与其他鱼类卵黄蛋白原基因序列相似性较高,其中与底鳉和食蚊鱼(Gambusia affinis)的同源性分别达87.4%和96.7%.在对该片段所编码氨基酸序列可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,预期得到258个氨基酸的表达蛋白.表达载体转入大肠杆菌DH5α,经热诱导后,SDS-PAGE分析有29 kD的表达蛋白产生,与预期相符.以重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清.雌激素(β-雌二醇)对剑尾鱼诱导后,用重组蛋白抗血清作一抗,进行Westernblot分析.结果表明,该抗血清能与剑尾鱼卵黄蛋白原特异结合,可应用于剑尾鱼卵黄蛋白原的检测.卵黄蛋白原是环境雌激素研究中较为特异、灵敏的生物标志物,剑尾鱼卵黄蛋白原检测方法的建立,为剑尾鱼环境监测应用提供良好基础.     

剑尾鱼RW-H近交系的遗传结构分析

筛选31条随机引物对剑尾鱼的第8代近交RW-H系A、B、C3窝共11尾剑尾鱼个体基因组DNA进行RAPD扩增，计算近交系个体间及不同窝间的相似系数及遗传距离。结果筛选的31条引物共扩增出383条带，扩增片段的大小在0．2～3kb。其中多态性带30条，多态性带频率在0～58．33％，平均为7．83％。近交系剑尾鱼不同个体拥有相同条带的比率较高。计算得到近交系的平均相似系数(S)为0．9829(0．9716～0．9960)，平均等位基因频率(q)为0．8692，最低平均杂合率(H)为0．1308。同时，用5个微卫星标记对非选育剑尾鱼和近交系RW-H系的基因组进行分析，检测等位基因的个数和大小，结果5个微卫星座位在非选育剑尾鱼中显示为多态，而在近交系RW-H系除1个位点出现等位基因外，其余均为纯合子，计算得到近交系的平均遗传相似系数为0．9345，两种方法均证明近交RW-H系第8代剑尾鱼有较高的遗传纯合度。     

剑尾鱼卵黄蛋白原C(Vg C)全长cDNA的克隆及表达

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)等方法,克隆获得剑尾鱼卵黄蛋白原C(Vg C)基因的全长cDNA序列。剑尾鱼Vg C基因cDNA序列全长4 011 bp,其5′非编码区包含12 bp和3′非编码区包含246 bp;含有一个3 753 bp的开放阅读框(ORF),编码1 250个氨基酸,推测其编码氨基酸分子量大小为141.7 ku,编码氨基酸序列与其他鱼类卵黄白原C编码氨基酸序列相似性在44%～85%。荧光定量PCR结果显示,Vg C在剑尾鱼肝脏中表达量最高,脾、肾、卵巢中有微量表达,脑、肌肉、鳃中几乎没有检测到表达;对不同时间暴露在雌激素中剑尾鱼肝脏进行实时荧光定量PCR表达分析的结果表明,Vg C在剑尾鱼肝脏中第5天表达量最高,随后降低,第9天后维持相对较低的表达量。研究首次克隆了剑尾鱼Vg C基因全长cDNA序列,并对Vg C在剑尾鱼体内表达组织器官分布及雌激素诱导后不同时间表达谱进行了初步研究,为剑尾鱼生殖生理及环境污染物监测应用等不同领域研究打下重要基础。     

7种观赏性剑尾鱼品种间杂交子代的体色及鳍形研究

7种观赏性剑尾鱼的自交、杂交,对其子代的体色(包括眼睛色彩)及鳍形等性状进行统计分析。试验结果表明,黑眼为显性基因控制,红眼为隐性基因控制,体色与眼睛颜色有一定的连锁关系;推测剑尾鱼体色遗传由数量性状基因参与控制;尾鳍燕尾相对于正常尾为显性,而且雄性尾鳍的燕尾和长臀鳍具有连锁性;高背鳍由显性基因控制,正常背鳍由隐性基因控制,拥有正常背鳍的个体,其基因型是隐性纯合,拥有高背鳍的个体,其基因型为杂合,初步推断显性纯合为致死基因型。     

Effect of varying dietary lipid and protein levels on growth and reproductive performance of female swordtails Xiphophorus helleri (Poeciliidae)

We conducted a study to determine the effect of dietary protein and lipid levels on the growth and reproductive performance of a freshwater ornamental species, the swordtail (Xiphophorus helleri). Two protein levels (20% and 30%) with four lipid levels (8%, 12%, 16%, 20%) within each protein levels were tested through formulation of practical diets labelled as 20P8L, 20P12L, 20P16L, 20P20L, 30P8L, 30P12L, 30P16L and 30P20L respectively. Results showed that dietary protein level significantly influenced final weight, weight gain and specific growth rate, while dietary lipid did not influence any of these growth parameters. More specifically, increasing dietary lipid levels from 8% to 12–16% in both 20% and 30% protein levels significantly improved swordtail growth performance. Dietary protein levels positively influenced gonadosomatic and hepatosomatic indexes. Both dietary protein and lipid significantly influenced female muscle protein content. Significantly highest fry production was obtained from diets 30P12L and 30P16L, respectively, while diet 20P8L resulted in the lowest fry production. This present study indicates the dietary protein and lipid requirements for female swordtails for optimized growth and reproductive performances to be at 30% and 12% respectively.