细菌GYZC02株的鉴定及抗血栓的活性研究

[目的]鉴定细菌GYZC02株,并研究其抗血栓活性.[方法]利用形态学特征、生化试验和16S rRNA序列同源性比较鉴定菌株,通过小鼠断尾试验和小鼠尾动脉血栓模型验证GYZC02发酵液的抗血栓活性.[结果]根据形态学、生化试验和16S rDNA序列测定结果,该菌株鉴定为枯草芽孢杆菌.通过灌胃给药发现,GYZC02发酵液乙酸乙酯萃取物能明显延长小鼠断尾出血时间,抑制小鼠尾动脉血栓的形成,表明该细菌具有抗血栓活性.[结论]枯草芽孢杆菌GYZC02发酵液的小分子物质具有抗血栓活性.     

瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8对樱花根癌病的防效与抑菌物质初探

[目的]樱花根癌病近年对樱花产业的威胁日益严重,生产上亟需有效的防治措施。本研究旨在探讨瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8的抑菌物质特性,同时测定其对樱花根癌病的田间防治效果。[方法]在平板拮抗测定菌株拮抗能力,通过酸沉淀提取该菌株的抑菌粗提物;利用PCR技术检测该菌是否含有推测的抑菌物质合成相关基因,测定该抑菌粗提物在不同条件下的稳定性;采用根部蘸浆法测定瓦雷兹芽孢杆菌(Bacillus velezensis)JK-XZ8对田间樱花苗木的生防效果。[结果]瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8对根癌土壤杆菌存在拮抗能力且可产生抑菌物质;经PCR检测该菌株含有脂肽类基因bmyB,ituD,fenD和聚酮类化合物基因PK1、PK2、PK3等抑菌物质合成相关基因。此外粗提得到的抑菌物质,在高温、酸、碱、蛋白酶K、3 h内的紫外线的处理条件下,仍保持较高活性。田间试验表明菌株JK-XZ8对樱花根癌病的防治效果可达50%,优于市场上使用的K84生物菌肥(24%)。[结论]瓦雷兹芽孢杆菌可以产生稳定的抑菌物质拮抗病原菌,是一株可用于樱花根癌病防治的有效生防菌株。     

引进生防制剂防治我国果树根癌病 Ⅰ.病害的基本调查和病原菌的分离鉴定

调查了我国部分地区农场、果园、苗圃、林场根癌病,得知根癌病(Agrobacteriumtumefacfens)普遍为害我国多种果树、林木,并且发病十分严重。几乎重茬苗圃土壤都带有根癌病菌。病菌的分离鉴定表明,葡萄的根癌土壤杆菌主要是生物3型,没有发现生物2型。鉴定中还发现苹果上也有生物3型的根癌土壤杆菌。     

不同地域来源桃根癌病病原菌及其致病性鉴定

【目的】鉴定来自不同产区分离的桃根癌病病原菌土壤杆菌（Agrobacterium tumefaciens）的致病 力。【方法】利用根癌土壤杆菌与T-DNA转移和瘿瘤形成相关的virD2和ipt基因进行分子检测,利用3-酮苷试 验等生物学手段对不同地区桃根瘤组织中分离的桃根癌土壤杆菌进行致病性鉴定;并利用指示植物检测不同生 物类型菌株的致病能力,最后在不同品种桃植株接种后验证其致病性。【结果】virD2和ipt基因两对特异引物在 21株病原菌中均出现203 bp和427 bp的目的片段,表明分离的病原菌均属于根癌土壤杆菌。3-酮苷试验结果表 明,有3株菌株由蓝变黄为生物Ⅰ型,其余18株颜色不变,为生物Ⅱ型。指示植物表明,虽然病原菌都能对植 株形成瘤,但生物Ⅱ型菌株致病力明显强于生物Ⅰ型,将生物Ⅱ型病原菌接种于不同品种桃树均能长出明显的 瘤,也验证了生物Ⅱ型病原菌具有更强致病力。【结论】不同产区分离的桃根癌病病原菌为根癌土壤杆菌,其 中多数为生物Ⅱ型,具有强致病力,几乎能侵染所有的桃品种。     

捺细菌性根癌病菌生物型鉴定及生物防治

从福建的古田、沙县和长汀等地采集到的捺细菌性根癌病标样上分离到１２株能致癌的菌株，经细菌学鉴定后认为属根癌土壤杆菌生物型Ⅱ，其中有１０株菌株对土壤杆菌素８４（ａｇｒｏｃｉｎ８４）敏感．用Ｋ８４菌液浸捺砧木的根部３０ｍｉｎ后种植在用分离到的致癌病菌接种过的土壤中，株发病率为２．９６％；用清水处理的砧木种植在用致癌病菌接种过的土壤中和不接种的土壤中，株发病率分别为１９．８９％和３．８２％，表明Ｋ８４菌对捺细菌性根癌病有一定的防治效果     

根癌病生防菌E26产生一种宽抑菌谱的细菌素

根癌病是葡萄生产中的一种重要病害。葡萄土壤杆菌E26(Agrobacterium vitis E26)是葡萄根癌病的生防菌株,在平皿培养时能产生抑制根癌病菌生长的细菌素(土壤杆菌素E26)。本研究针对E26菌株产生土壤杆菌素的生物学性状进行研究,初步分离纯化了土壤杆菌素E26并且分析了其部分理化性质和生物学特性。E26菌株在pH 7.0的改良AB液体培养基中能够正常生长并产生对葡萄根癌病菌K308(A.vitis K308)有明显抑制作用的土壤杆菌素E26。用活性炭吸附和70%乙醇洗脱可以从发酵液中分离土壤杆菌素E26;再经过DEAE-Cellulose阴离子交换柱层析和CM-Cellulose阳离子交换柱层析可以部分纯化土壤杆菌素E26。土壤杆菌素E26在80℃处理30min和在室温pH 3.0～9.0处理1 h,抑菌活性均不受影响。部分纯化的土壤杆菌素E26不仅对来自葡萄和其它寄主的17株供试的根癌病菌有显著抑制作用,而且对茄科青枯病菌、番茄疮痂病菌、水稻白叶枯病菌、棉花细菌性角斑病菌和白菜软腐病菌也有抑制作用。     

姜瘟病原菌田间自然群体毒力及不同接种方法的比较研究

[目的]为姜瘟病病原菌自然群体毒力组成的监测提供参考。[方法]从同一个姜瘟病田的不同区域分离获得26个菌株,观察其细胞学性状,测定其生物型,从灌根法、注射法、剪叶法中筛选姜瘟病病原菌适宜的接种方法。[结果]分离获得的26个菌株的形态、培养性状、染色反应及生理生化特性和对照菌株L2、G2表现完全一致,确定其是青枯假单胞杆菌Pseudomonas solanacearum Smith),即姜瘟病病原菌,其中7株为Ⅱ型,占总菌株数的27%,19株为Ⅲ型,占总菌株数的73%。在田间进行姜瘟病病原菌接种时,建议使用茎基部注射法。[结论]从1块有代表性的病田的不同病株上分离25个以上的菌株的致病力的测定结果是该地区姜瘟病病病菌自然群体毒力组成系统监测的重要参考。     

E26防治植物根癌病的效果及其稳定性初步研究

选取不致病的葡萄土壤杆菌（Agrobacterium vitis)E26菌株，以HLB－2和K84菌株做对照，对不同来源的36株根癌菌进行室内及温室条件下的抑菌及防治效果试验，结果表明：室内抑菌检测中，E26的抑菌谱要广于HLB－2和K84，对36株根癌菌中的30株有拮抗作用，抑菌率为83．3％，在温室防治检测中，生防菌与根癌菌1：1混合接种指示植物向日葵 时，E26对85．7％的试菌株有防治效果；与对照生防菌比，尤以防治葡萄根癌病最为有效。菌东研究表明，E26后代菌株与初始菌在产素及生产速度方面均无显著差异，表明E26菌株细菌素的产生是一个比较稳定性的性状。     

南极土壤芽孢杆菌的分离鉴定及其防治玉米细菌性褐腐病的研究

[目的]本研究旨在从南极土壤中筛选防治玉米细菌性褐腐病的芽孢杆菌菌株,为该病害的防治提供菌株资源。[方法]从南极长城站地震台附近的企鹅聚居地土壤中分离芽孢杆菌。结合16S rDNA及gyr B基因序列对分离到的芽孢杆菌进行鉴定。借助平板抑菌试验筛选对玉米细菌性褐腐病病原菌具有拮抗效果的生防芽孢杆菌。通过田间防治试验,筛选具有较好生防效果的芽孢杆菌。利用MALDI-TOF-MS对芽孢杆菌产生的抗菌物质脂肽化合物进行鉴定。[结果]通过16S rDNA及gyr B基因序列对分离自南极的23株芽孢杆菌进行鉴定,其中解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)9株,地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)14株。借助平板抑菌试验,筛选获得抑菌效果明显的2株B.amyloliquefaciens菌株EZ15-07、EZ15-09和2株B.licheniformis菌株EZ01-05、EZ15-08。田间试验结果表明,菌株EZ15-07和EZ01-05对玉米细菌性褐腐病的防治效果分别为59.3%和55.3%。对这2个菌株发酵液的MALDI-TOF-MS检测表明,菌株EZ15-07能产生Surfactin和Bacillomycin D 2种脂肽化合物,菌株EZ01-05能产生Bacillomycin D和Fengycin 2种脂肽化合物。[结论]由南极土壤分离获得的菌株EZ15-07和EZ01-05对玉米细菌性褐腐病防治效果显著,2个菌株均具有较好的田间应用潜力。     

人参土传病害生防菌株的筛选及抑菌活性研究

[目的]筛选获得对人参土传病害具较好防治作用的生防菌株。[方法]采用稀释平板法和平板对峙培养法从患病人参根际土中分离筛选生防菌,并对菌株进行形态学、生理生化特征和16S rDNA鉴定。[结果]以立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、尖镰孢菌（Fusari-um oxysporum）和腐皮镰孢菌（Fusarium solani）为指示菌株,从黑龙江铁力农场患病人参根际土中筛选获得2株具较强拮抗作用的生防菌株B59和X1,鉴定为枯草芽孢杆菌。2株生防菌对8种不同真菌的抑菌率平均达90%以上,初步研究表明B59和X1菌株可分泌抗菌活性物质。[结论]2株生防枯草芽孢杆菌B59和X1菌株对人参土传病原菌具较强的拮抗作用,具有一定的开发应用潜力。     

大樱桃根癌病原细菌分类地位鉴定

从烟台地区采集13份大樱桃根癌病样本,分离纯化出26个菌株,致病性测定表明23个菌株在指示寄主番茄上具有致病性;进一步经生理生化反应、碳源利用、选择性培养基等试验鉴定出16个根癌病菌菌株为Agrobacterium tumefaciens生物型2,占69.57%,为优势种群,其余7个菌株为生物型1.对大樱桃根癌病菌分类地位的确定为今后病原菌的系统研究和病害防治提供了理论基础.     

啤酒花根癌病研究 Ⅱ生物型鉴定及室内药效测定

对从山东省泰安等6县市啤癌花根癌病株上分离到的21个菌株,进行生物型鉴定结果证明啤酒花根癌病菌为根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumfaciens(Smith and Townsond)Conn),属于生物型I。室内药效测定结果表明以0.1%升汞,1000ppm四环素、土霉素抑菌效果较好,其次是链霉素和福美双。     

玫瑰根癌病病原及其敏感的生防菌

从玫瑰根癌样品中分离纯化获得31株分离物,其中15株有致病性。生理生化及纸电泳法测定结果表明,15株玫瑰根癌菌有7株属于 Agrobacterium tumefaciens(原生物Ⅰ型),8株属于 A.rhizogenes(原生物Ⅱ型),Ti 质粒全部为胭脂碱型。经平板和温室检测,根癌抑制菌 K1026,E26和 HLB-2对60%以上的玫瑰根癌菌株有抑制作用,以 E26的效果最好。     

新疆野生樱桃李抗根癌农杆菌与致瘤菌表达以及组织形态学观察

以新疆野生樱桃李实生群体为试材,通过接菌对其抗性进行鉴定,并对冠瘿瘤形成过程进行了观察,同时对抗病机理进行了初步探讨,结果显示:在对126棵新疆野生樱桃李抗根癌农杆菌的鉴定中,有25棵表现为高度抗病,约占鉴定总数的20%,说明新疆野生樱桃李是优良的抗根癌农杆菌种质资源。冠瘿瘤内部导管来源于寄主的木质部组织并先于筛管形成;冠瘿瘤形成早期对水分和养分的需求可能会大于同化产物。冠瘿瘤中存在有树状和球状2种结构维管束,树状维管束在冠瘿瘤不断扩大生长中发挥作用,而发育完成的冠瘿瘤主要以球状结构维管束行使运输功能。抗病植株中在侵染根癌农杆菌后玉米素核苷含量与对照差异不大,但感病植株在接菌18d时玉米素核苷含量显著增高;同时,ipt、iaaM和iaaH表达也明显高于抗病植株。说明ipt基因大量表达导致玉米素核苷含量在感病植株中快速上升,从而导致发病。     

Identification of agrobacteria on grape plants with symptoms of crown gall lesions in ampelocenosises of Krasnodar Territory using the PCR method

It was shown that crown gall is a chronic disease of the grapevine caused by agrobacteria. The disease causes significant damage to the viticulture industry in Krasnodar Territory. The causative agent of crown gall in the vineyards of this region was identified and studied using the polymerase chain reaction method. Young tumor formations found on grape plants in different areas of Krasnodar Territory were analyzed. The presence of agrobacteria of species Agrobacterium vitis differing in the type of Ti-plasmid (oktopine, nopaline, or vitopine) were detected by using test-systems for Agrobacterium-mediated genes (pehA, virF, and virD2).     

农杆菌素MI15的分离、纯化及分子量测定

放射土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)MI15菌株.属于生物Ⅰ型.在平皿培养时,能够产生农杆菌素MI15,能抑制葡萄根癌土壤杆菌的生长.采用透析和DEAE纤维素柱离子交换层析纯化制备了MI15菌株分泌的农杆菌素MI15.经HPLC分析,此制备物纯度较高,可达到结构分析要求.紫外吸收光谱分析显示,该物质在260nm和280nm处均无洗脱峰,故认为该物质不是核酸、蛋白类似物.经红外吸收和元素分析,初步认定它是一种小分子有机物,质谱测定结果显示,农杆菌素MI15的分子量为368.     

安徽望江棉区棉枯萎病生理型测定

从望江棉区分得5个菌株（系）,经寄主致病性测定,结果表明：菌株WJF03、WJF04属生理型Ⅰ,致病力强,与对照菌株陕F13－1相似;菌株WJF01、WJF02和WJF05属生理型Ⅱ,致病力中度,与另一对照菌株苏宁相似。     

几种酿酒葡萄品种在济南地区的引种表现

[目的]筛选适宜济南及周边地区栽培的酿酒葡萄新品种。[方法]2011年引入7个酿酒葡萄品种在济南地区进行试栽,通过对引入品种的物候期、植物学性状、生长结果习性、果实经济性状及抗病性的调查,筛选适宜济南及周边地区栽培的酿酒葡萄新品种。[结果]各酿酒葡萄品种间差异较大,霞多丽、贵人香、美乐品质较好,可以酿造出品质优良的葡萄酒。北醇糖度高,抗病性、抗寒性强,易于栽培管理,适合在山东地区进行推广。[结论]筛选出适宜济南及周边地区的酿酒葡萄新品种,为研究酿酒葡萄品种的栽培技术提供理论依据。