安氏隐孢子虫ITS-1基因PCR检测方法的建立

[目的]建立针对安氏隐孢子虫的PCR快速检测方法,为安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查提供技术支撑.[方法]根据GenBank中安氏隐孢子虫的ITS-1基因序列设计1对特异性引物,建立基于ITS-1基因的PCR方法,并通过特异性试验、敏感性试验、临床检测以及与经典巢式PCR检测方法进行比较等,验证其可行性.[结果]基于ITS-1基因的PCR检测方法能扩增出安氏隐孢子虫的特异条带,而对猪源隐孢子虫、贝氏隐孢子虫、微小隐孢子虫、牛泰勒氏虫、牛巴贝斯虫、伊氏锥虫、食道口线虫的扩增结果均为阴性;将测序结果进行BLAST比对,发现其与GenBank中安氏隐孢子虫的同源性均在99%以上.敏感性最低可检测每克牛粪中5个卵囊;用于检测广西不同地区的1613份牛粪样品时,与经典巢式PCR检测方法相比,发现两者的阳性检出率均为11.72%,且吻合率达100%.[结论]安氏隐孢子虫ITS-i基因PCR检测方法具有快速、敏感、特异的特点,适用于安氏隐孢子虫的检测和分子流行病学调查分析.     

安氏隐孢子虫ABC2基因的克隆表达与营养物质转运

为探究安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)ATP结合盒转运蛋白基因(CaABC2)对营养物质的转运功能,以安氏隐孢子虫基因组作为模板,设计合成CaABC2基因特异性引物,进行PCR扩增,获得CaABC2基因。将克隆的重组质粒CaABC2基因与真核表达质粒pEGFP-C1双酶切后再连接,构建重组真核质粒载体pEGFP-C1-CaABC2;再采用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-C1-CaABC2转入小鼠肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC),检测不同组IEC细胞对总胆固醇、还原型谷胱甘肽、葡萄糖和碱性磷酸酶的转运效果。结果表明:扩增出778bp的CaABC2基因,测序分析与预期片段大小一致;重组真核质粒载体pEGFP-C1-CaABC2转染小鼠IEC细胞后,观察到转染后的对照组和转染组IEC有绿色荧光;检测到在细胞内液中,转染组、对照组和空白组的总胆固醇浓度分别为15.99±0.12、11.80±0.35和12.43±0.16 mmol/L;还原型谷胱甘肽浓度分别为15.24±0.44、10.48±0.35和11.04±0.75mmol/L;在细胞外液中,转染组、对照组和空白组的总胆固醇浓度分别10.67±0.17、14.82±0.06和15.84±0.17 mmol/L;还原型谷胱甘肽浓度分别为10.20±0.79、14.60±0.45和15.60±2.50mmol/L。转染组总胆固醇、还原型谷胱甘肽浓度均显著大于空白组和对照组(P0.05),而在细胞外液中,转染组总胆固醇、还原型谷胱甘肽的浓度均显著小于空白组和对照组(P0.05)。在细胞内液和外液中,空白组与对照组总胆固醇、还原型谷胱甘肽的浓度之间均未见显著性差异(P0.05);转染组、对照组和空白组之间的葡萄糖和碱性磷酸酶浓度均没有统计学差异(P0.05)。CaABC2基因具有协助转运总胆固醇、还原型谷胱甘肽、葡萄糖和碱性磷酸酶的作用,其中转运总胆固醇效果最为明显。     

Development and Application of Nested PCR Assay for Detection of Dairy Cattle-Derived Cyclospora sp.

To develop a nested PCR assay for the detection of cattle-derived Cyclospora sp.,two pairs of primers were designed on the basis of the cattle-derived Cyclospora sp.sequences.These primers selectively amplified a 168-bp DNA fragment of the 18S rRNA gene of cattle-derived Cyclospora sp.With these primers,a nested PCR assay for the detection of cattlederived Cyclospora sp.was developed.The nested PCR assay was specific and there is no cross-reaction with other parasites,such as Eimeria spp.,Cryptosporidium spp.,Giardia sp.,Toxoplasma sp.,Trichuris sp.and cattle ciliate.The assay was able to detect as low as 2.85 x 10-2 fg of the control positive DNA.The results of the detection of clinical samples indicated that the assay coincided with microscopic examination.The results show that the nested PCR assay will be an effective tool for the detection of Cyclospora sp.in cattle feces.     

奶牛鲜胚移植技术的研究

用PMSG+PG,PMSG+PG+激光照射,FSH+PG和PSH+PG+促排卵3号四组药物组合,超排处理15头黑白花奶牛。各组获得可用胚胎头均数分别为1.50±2.52枚(n=2)。3.30±2.52枚(n=3),2.86±3.85枚(n=7)和6.00±5.29枚(n=3),四组总头均数为3.40±3.70枚(n=15)。鲜胚移植三批受体妊娠率平均为62.2％(28/45),前两批移植妊娠率高达78.3％(18/23),其中1头供体一次冲胚11枚,移植11头受体,有9头妊娠。15头供体牛冲胚后40d内人工授精全部妊娠。     

奶牛隐性乳房炎多重PCR检测方法研究

[目的]建立一种快速、准确和特异性强的奶牛隐性乳房炎检测方法。[方法]采用多重PCR从基因水平上对70份临床疑似奶牛隐性乳房炎感染样本进行检测。[结果]多重PCR方法检测隐性乳房炎阳性样品数为58份,阳性检出率为82.5%;传统生化方法检测阳性样品数为53份,阳性检出率为75.5%,两者的阳性符合率为92%。[结论]成功地建立了一种快速、特异性强的奶牛隐性乳房炎多重PCR检测方法。     

奶牛与黄牛乳腺肥大细胞生物学性质的比较

采用组织化学染色法和免疫组织化学法对同一生理状态的黄牛与奶牛乳腺标本进行处理,比较两品种牛乳腺中肥大细胞的细胞化学性质、所产生的生物活性物质(如NO、5-HT和ER)及乳腺内含P物质(SP)的神经纤维分布特点。结果表明:两种牛乳腺中肥大细胞均为粘膜型肥大细胞,但在同一生理状态下其所产生的生物学物质不尽相同,奶牛与黄牛乳腺肥大细胞的生物学性质存在差异。     

浅谈奶牛围产期的饲养管理

围产期是奶牛饲养的关键时期,关系到泌乳量和繁育性能。因此,加强奶牛围产期的饲养管理显得十分重要。     

奶牛交巢穴不同埋线时间对子宫复旧的影响

为摸索母牛产后交巢穴不同埋线时间与子宫复旧的相关性,选择20头黑白花奶牛作为研究对象,5头为空白对照组,15头在其产后不同时间进行交巢穴埋线,按照判定标准详细记录每头奶牛的恶露排出及子宫复旧情况。结果显示,产后1～6h埋线效果最好,而1h以内和6h之后埋线效果差异不显著,但均比1-6h之间埋线的效果差。     

苜蓿干草在高产奶牛日粮中适宜添加量的研究

 36头 2～ 4胎的荷斯坦奶牛随机分为 3组 ,各组产奶量、体重、胎次、泌乳天数 (DIM)差异不显著。 3组奶牛日粮中苜蓿干草的添加量分别为 3kg(对照 )、6kg和 9kg,相应的日粮干物质 (DM)中粗蛋白含量分别为 16 .4 %、17.9%和 19.4 % ,组间中性洗涤纤维 (NDF)和产奶净能 (NEL)含量相同 ,分别为 37.8%和 6 .7MJ·kg-1DM。结果表明 ,在以苜蓿干草为主的奶牛日粮中提高粗蛋白含量能极显著提高产奶量 (P <0 .0 1) ,干物质采食量 (DMI)显著增加 (P <0 .0 5 ) ,乳脂率、乳蛋白率、乳糖以及干物质含量没有变化 ,乳脂量显著增加 (P <0 .0 5 ) ,乳蛋白量极显著增加(P <0 .0 1) ,体细胞数 (SCC)显著下降 (P <0 .0 5 )。在日粮NDF相同的条件下用苜蓿干草替代玉米青贮 ,不会降低乳脂率。在奶牛日粮中大量使用苜蓿干草并不增加日粮成本 ,可以大幅度提高经济效益 ,9kg组与对照相比纯增效益最高。苜蓿干草在高产奶牛日粮中的适宜添加量为 9kg。     

高产奶牛日粮中苜蓿干草适宜添加量的研究

选用30头2～4胎的荷斯坦奶牛随机分为3组,各组产奶量、体重、胎次、泌乳天数(DIM)差异不显著。3组奶牛日粮中苜蓿干草的添加量分别为2kg(对照)、4kg和6kg,相应的日粮干物质(DM)中粗蛋白含量分别为15.6%,17.2%和18.8%,各组间中性洗涤纤维(NDF)和产奶净能(NE)含量相同,分别为37.4%和6.9MJ·kg-1DM。结果表明:在以苜蓿干草为主的奶牛日粮中,提高粗蛋白含量能显著提高产奶量(P<0.05);干物质采食量(DMI)变化不显著(P>0.05),但有增加的趋势;乳脂率、乳蛋白、乳糖以及干物质含量没有显著变化(P>0.05),在奶牛日粮中大量使用苜蓿干草并没有增加日粮成本,但可以大幅度提高经济效益,6kg组与对照相比纯增效益最高。因此苜蓿干草在奶牛日粮中的适宜添加量为6kg。     

3种超排方案生产奶牛体内性控胚胎效果比较

采用3种不同方案对16头经产奶牛实施超数排卵,然后用X性控冻精进行人工授精。结果显示,3种方案超排头均排卵数分别为10.75、6.00、7.00枚,头均回收胚胎数分别为8.38、4.25、7.00枚,3组均无显著差异(P>0.05);方案Ⅰ超排供体头均获可用胚7.88枚,可用枚率为95.5%,显著高于方案Ⅱ(2.20枚,55.7%)和方案Ⅲ(0.33枚,15.7%)(P<0.05)。方案Ⅱ和方案Ⅲ在头均可用胚数方面无显著差异(P>0.05),但在可用胚率方面,方案Ⅱ显著高于方案Ⅲ(P<0.05)。     

Detection of Staphylococcus aureus in Dairy Products by Polymerase Chain Reaction Assay

A polymerase chain reaction （PCR） assay was employed for direct detection of Staphylococcus aureus without enrichment in dairy products. A solvent extraction procedure was successfully modified for the extraction of Staphylococcus aureus DNA from artificially contaminated whole milk, skim milk, and cheese. A primer targeting the thermostable nuclease gene （nuc） was used in the PCR. A DNA fragment of 279 bp was amplified. The PCR product was confirmed by DNA sequencing. In this study, the PCR, GB-4789.10-94, Perifilm RSA.Count Plate, and Baird-Parker ＋ RPF Agar were compared. The sensitivity of the PCR was 10 CFU mL^-1 of whole milk, skim milk, and 55 CFU g^-1 of cheese. The developed methodology allowed for detection of Staphylococcus aureus in dairy products in less than 6 h. The time taken for the development of this PCR assay was 12-24 h, less than the time taken by the general PCR assay using the enrichment method, and the coincidence rate of this developed PCR was 94.3%, the sensitivity was 100%. It was a rapid, sensitive, and effective method for PCR to detect Staphylococcus aureus in milk and milk products.     

治疗奶牛乳房炎中药凝胶剂载药量及体外释药性研究

检测防治奶牛乳房炎中药凝胶剂的载药量及体外释药性.采用紫外分光光度法测定制剂载药量;采用转篮法进行处方的体外释药试验,用紫外分光光度法测定累积渗透量.紫外分光光度法测定中药复方凝胶剂载药量为21.52%,RSD为0.9%,中药复方凝胶剂累积释放曲线方程为y=2.923 9 Ln(x)+3.258,r2=0.993.采用...     

宝泉岭分局奶牛养殖小区现状与发展动态分析

在对宝泉岭分局奶牛养殖小区的经营模式和规模现状进行调研的同时,对奶牛小区资金投入的合理性进行分析。在综合评价的基础上,对宝泉岭分局奶牛小区发展提出建议。     

沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

 【目的】研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测。【方法】针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价。【结果】试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带。试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4—5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8—10 h即得到阳性结果。反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果。对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果（阳性检出率为1/30）准确。【结论】采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检。     

奶牛流产病因探究及新孢子虫病PCR检测方法的建立

[目的]探究新疆某奶牛场奶牛流产病因.[方法]采集的19份血清样品和4份牛流产胎儿脑组织进行布氏杆菌病凝集实验、弓形虫PCR检测和新孢子虫病ELISA方法检测,参考GenBank登录的犬新孢子虫种Nc-5序列[1],设计引物,建立新孢子虫病的PCR检测方法.[结果]调查结果显示该牛场布氏杆菌病与弓形虫病感染均呈阴性,新孢子虫病感染率为14.3;(2/19).新孢子虫PCR诊断方法的最佳退火温度为57℃,灵敏度为35 pg/μL.用建立后的PCR方法检测流产胎儿,感染率为50.0;(2/4).[结论]新孢子虫病是导致该厂奶牛流产的重要原因之一,为今后新疆地区有效预防和治疗新孢子虫病提供了一定的科学依据.     

奶牛乳体细胞数变化及影响因素调查

调查分析了大庆地区四个规模化牧场近3年奶牛DHI数据。结果表明,乳体细胞评分均值为5.05(其乳体细胞数均值为49万·mL-1)。75.75%的奶牛个体,其生鲜乳体细胞数小于50万·mL-1。胎次、泌乳阶段、自然月份等因素影响奶牛生鲜乳体细胞数。调查结果为牛场奶牛综合管理及制定科学可行的乳房炎防治措施提供依据。     

青粗混贮饲料的研究──麦秸氨化青贮料饲喂奶牛的效果

研制的麦秸氨化青贮料综合了氨化与青贮的优点，呈青贮料型。粗蛋白质含量（ＣＰ）提高１．５倍（９．６９∶３．８ｌ），代替麦秸和部分青贮饲喂奶牛比对照产标准乳提高２２．６２％（Ｐ＜０．０５）；精料利用率提高２１．３６％，全日粮千物质利用率提高１１．０４％；吨奶饲料成本降低４５．３６元；利用青贮窖节省了昂贵的氨化设备；减少了青贮渗出液和氨化过程中氨的损失。为开发秸秆的饲用潜力开辟了新路。     

奶牛隐性乳房炎诊断新指标研究进展

乳房炎是造成奶牛业损失最严重的传染性疾病。目前应用于奶牛隐性乳房炎诊断的常用方法有加州乳房炎试验(CMT),乳汁体细胞计数(SCC)等,但在常规使用中都存在一定的局限性。奶牛乳汁中一些酶活性和急性期蛋白量的变化是监测隐性乳房炎很有价值的指标,可用于泌乳早期感染乳区的检测和选择感染奶牛进行干乳期治疗。结合珠蛋白(HP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)是奶牛最为敏感的急性期蛋白,它们在急性炎症时大量增加。概述了乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰基--βD-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、乳过氧化物酶(LP)、碱性磷酸酶(ALP)、结合珠蛋白(HP)和血清淀粉样蛋白A(SAA)等指标在奶牛乳房炎诊断中的应用研究进展。     

吴忠市奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

对采自吴忠市某奶牛园区的9份临床型乳房炎乳样进行了病原菌的分离、鉴定,从中分离出13株细菌,即5株金黄色葡萄球菌、6株大肠杆菌、2株无乳链球菌。药敏试验结果表明：引起园区奶牛乳房炎的3种主要病原菌对环丙沙星、复方新诺明、氧氟沙星和头孢哌酮高度敏感,对链霉素、卡那霉素、新霉素、氟哌酸中度敏感,对青霉素、红霉素、呋喃唑酮、四环素有广泛的耐药性。动物回归试验结果显示3种病原菌具有致病性。