生防枯草芽孢杆菌CAB-1抑菌蛋白产生条件及其稳定性研究

枯草芽孢杆菌CAB-1是一株对番茄灰霉病有显著防效的生防菌株,抑菌蛋白是其产生的主要抑菌物质之一。研究表明,菌株CAB-1产生抑菌蛋白的最佳培养条件为：接种量2%,培养温度30℃,转速180 r/min,装液量100 mL/250 mL,培养时间48 h。考马斯亮蓝法测得最佳培养条件下菌株CAB-1产生的粗蛋白浓度为0.16 mg/mL。该粗蛋白对胰蛋白酶及蛋白酶K不敏感,胃蛋白酶处理使其活性降低14%;抑菌蛋白在100℃以下处理30 min活性变化差异不显著,而121℃处理30 min其抑菌活性为对照的72%。抑菌蛋白对酸碱的耐受范围广,在pH值3~12的范围内抑菌活性均能保持在75%以上,pH值2时抑菌活性降低为对照的59%。经甲醇、氯仿、乙醚、乙酸乙酯及丙酮处理后该粗蛋白的抑菌活性变化不大。     

生防菌株LDB1对不同植物病原真菌抑菌谱的比较

以实验室分离得到的枯草芽孢杆菌菌株LDB1为实验材料,通过对该菌株分别进行固体、液体培养条件下的抑菌谱比较研究,以明确该菌株对主要植物病原真菌的抑制效果。结果表明:(1)两种处理方式均对供试的8种植物病原真菌表现出较好的抑制效果;(2)除水稻纹枯病菌和苹果轮纹病菌外,LDB1菌株发酵液对其他6种病原菌的抑制作用皆比其固体状态强,Duncan多重比较分析显示,在α=0.05的水平上,两种处理方式差异显著。     

生防菌株LDB1对不同植物病原真菌抑菌谱的比较

以实验室分离得到的枯草芽孢杆菌菌株LDB1为实验材料,通过对该菌株分别进行固体、液体培养条件下的抑菌谱比较研究,以明确该菌株对主要植物病原真菌的抑制效果。结果表明:(1)两种处理方式均对供试的8种植物病原真菌表现出较好的抑制效果;(2)除水稻纹枯病菌和苹果轮纹病菌外,LDB1菌株发酵液对其他6种病原菌的抑制作用皆比其固体状态强,Duncan多重比较分析显示,在α=0.05的水平上,两种处理方式差异显著。     

生防细菌复配对苹果主要病原真菌抑菌活性筛选及其稳定性

采用生长速率法测定4种生防细菌及其复配对5种苹果主要病原菌的抑制效果,并将筛选出的最佳复配生防细菌发酵液进行稳定性测定。结果表明,单一生防细菌发酵液中多粘类芽孢杆菌FS-1206对苹果树腐烂病菌的抑菌效果最好,为78.19%;当多粘类芽孢杆菌FS-1206与解淀粉芽孢杆菌TS-1203复配比例为2∶1时,其对苹果树腐烂病菌的抑菌率高达86.64%,抑菌效果显著优于单一生防细菌发酵液。稳定性测定结果表明,复配生防细菌(FS-1206∶TS-1203=2∶1)发酵液在紫外照射、高温和强酸强碱环境条件下,其抑菌活性均具有良好的稳定性。     

生防细菌H1、H2活性物质的萃取与抑菌活性

通过有机溶剂萃取的方法,获得黄瓜白粉菌生防菌H1、H2的活性物质,采用温室药效试验测定各萃取物对黄瓜白粉菌的抑菌活性,结果表明,生防菌H1石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇萃取物及水相对黄瓜白粉菌的防效分别为62.79％、25.57％、17.11％、13.8％和12.1％,生防菌H2石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇萃取物及水相防效分别为61.71％、36.24％、24.14％、22.30％和13.6％,其中,均以石油醚萃取物对黄瓜白粉菌的防效最为显著.     

生防菌株TL2的菌剂研制及大田防病试验

本文以一株能在茶树体内内生定殖、对茶叶斑病防病效果好的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）菌株TL2为研究对象,优化该菌株的发酵条件和生产工艺,筛选它的适宜助剂,测定它在大田对茶叶斑病的防病效果。结果表明：该菌株的最佳产朊条件为氮源（蛋白胨）、培养温度（35℃）、碳源（蔗糖）、培养时间（72h）、初始pH（6.6）和250ml装液量（50ml）。它的最佳固态发酵工艺为氮源（豆饼粉）、碳源（麸皮)、含水量（25ml）、接种量（4%）、培养温度（35℃）和初始pH(7.0)。筛选得到该菌剂的4种良好载体,碳酸钙、高岭土、滑石粉和硅藻土等,1种良好的润湿分散剂,木质素磺酸钙,以及2种优良的紫外保护剂,腐植酸和糊精。该菌剂（孢子粉可湿性粉剂）在田间对茶叶斑病有较好的防治效果,防效达70%以上,与对照药剂多菌灵的防治效果相当。     

生防菌XM-10抑菌活性测试及鉴定

[目的]针对生防菌XM-10进行抑菌活性测试及鉴定,为该菌株开发成环境友好型生物制剂奠定基础。[方法]采用对峙培养法测试了其对小麦赤霉病、黄瓜枯萎病、苹果轮纹病、大豆菌核病等9种病原菌的抑菌活性,并根据其个体形态特征、培养性状以及16s rRNA序列分析进行了鉴定。[结果]结果表明XM-10菌株对供试的9种致病菌均有不同程度的抑制作用,抑菌率在47.8%~87.6%之间,其中对小麦赤霉病菌和黄瓜枯萎病菌的抑制率分别达到了87.6%和83.7%,抑菌带在4.9~6.9 mm之间;经形态观察和16s rRNA序列分析将该菌株初步鉴定为黄灰链霉菌。[结论]生防菌XM-10的抑菌谱较广,为放线菌中的链霉菌属,在病害生物防治中具有良好的应用潜力和前景。     

生防菌株哈茨木霉H-13固体发酵条件的研究

研究了生防菌株哈茨木霉H-13固体发酵的条件,探索了碳源、氮源、磷酸盐、固料比、接种量及发酵温度对产孢量的影响.通过单因素试验和正交试验确定固体发酵最佳条件为:麸皮、玉米粉按3∶1比例配伍,固料比水为 1∶0.4(g·mL-1),蔗糖1.5%,蛋白胨1.5%,硝酸铵1%,磷酸二氢钾0.05%,NaH2PO4 -Na2HPO4(0.5%～0.50%),接种量为9%(mL·g-1);发酵温度为24℃～22℃～26℃,在此条件下发酵10 d,产孢量高达1.0×1010个·g-1以上.固体发酵生产木霉分生孢子,与液体相比具有制作简单、成本低廉、孢子含量高、易于保存和运输等特点.     

内生枯草芽孢杆菌Em7抑菌物质的产生条件及其活性

为研究内生枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Em7抑菌物质产生条件及其特性,以油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)为指示菌,采用单因素和正交试验测定不同培养基成分及培养条件对菌株Em7抑菌物质产生的影响。结果显示,菌株Em7的最佳培养基配方为:麸皮20g/L,牛肉膏10g/L,MnSO41.5g/L;当培养基初始pH=7.0,接种量φ=1%,250mL摇瓶装液量为50mL时,在28℃,150r/min培养获得的培养液抑菌活性最强。此外,菌株Em7的抑菌物质能够抑制10多种重要植物病原菌的菌丝生长、孢子萌发,并致使病菌菌丝出现细胞质外渗、膨大,致使病菌孢子出现顶端膨大、不能正常形成芽管等畸形发育。     

枯草芽孢杆菌生防菌株Bp产生抗菌物质的条件

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在不同培养基、不同培养时间、不同温度、不同pH值、不同碳源和氮源条件下,产生抗菌物质的量有显著差异.在NB和M9两种培养液中,Bp对水稻白叶枯病菌及小麦赤霉病菌的抑菌效价随时间延长而提高,培养120h后,仍继续上升.在30℃,以pH9的NB培养的Bp对水稻白叶枯病菌的抑菌效价较高;而对小麦赤霉病菌的抑菌效价,又以20℃,pH6～9的NB培养时较高.在所测定的9种不同碳源、6种不同氮源中,以终浓度为0.2%的可溶性淀粉、0.2%的甘露醇或0.1%的葡萄糖作碳源,0.1%的硫酸铵、氯化铵、硝酸铵或半胱氨酸为氮源有助于Bp抗菌物质的产生.     

氯氰菊酯农药降解菌株的稳定性研究

通过氯氰菊酯农药生产车间下水道中的农药的混合微生物富集驯化培养获得降解氯氰菊酯降解菌.在富集培养基中分别传代5、10、15代,传代温度是30 ℃,pH值7.0,该混合微生物呈现不同的生长曲线.继代5代的氯氰菊酯农药降解能力为55%,继代10代的氯氰菊酯农药降解能力为52%,继代15代的氯氰菊酯农药降解能力为50%,表明该菌具有较好的降解能力稳定性.     

黄粉虫幼虫抗真菌物质的诱导及其抗真菌活性研究

[目的]研究用真菌诱导黄粉虫幼虫表达抗菌物质及其对真菌的影响。[方法]用黄粉虫幼虫从土壤中诱捕真菌,培养出2种病原真菌作为诱导源分别对黄粉虫幼虫做诱导试验,每种试验分别进行对照、菌刺和菌饲3种处理,并于处理后1、2、3、4和5 d分别提取抗菌物质,用平板琼脂打孔扩散法测定其抑菌圈直径而确定其抗真菌活性。[结果]结果表明,黄粉虫幼虫受真菌诱导后抗真菌活性比对照都有不同程度的增加,同时不同真菌诱导表达样品对于相应的诱导真菌均表现明显的抗真菌活性。说明不同真菌诱导产生的抗真菌物质与诱导源有关,抗真菌物质为黄粉虫幼虫体内固有成分,诱导增加了抗真菌物质的表达量,同时刺激新的抗真菌物质的产生。[结论]用真菌直接诱导黄粉虫幼虫可以产生抗真菌物质。     

放线菌菌株1a发酵液抗菌谱及抗菌物质稳定性研究

采用琼脂扩散法对放线菌菌株1 a发酵液进行了抗菌谱测定。结果表明,菌株1 a发酵液对9种常见植物病原真菌有很好的抑制作用,其中对人参锈腐菌抑菌活性最强,抑菌圈直径可达22 mm。稳定性测定结果表明菌株1 a发酵液低温贮藏效果好,对热及紫外光照稳定性较强,对极端酸碱环境稳定性较差。     

链霉菌S417菌株发酵液的抗真菌活性及稳定性研究

以16种植物病原真菌为供试菌,采用菌丝生长速率法测定拮抗链霉菌S417发酵液的抑菌谱;以采后香蕉炭疽病菌为指示菌,管碟法测定发酵液经不同理化园子处理后的抑菌活性.结果显示:链霉菌S417发酵液对16种植物病原真菌均具有不同程度的抑菌活性,其中对香蕉炭疽病菌、玉米大斑病菌等5种真菌的抑制率在82.53％～69.63％之间,显著高于其他供试菌株.120℃处理20 min,发酵液仍有较强抑菌活性;紫外线照射25 min,对发酵液抑菌活性无显著影响;阳光照射4h,抑菌活性丧失;发酵液对酸碱稳定,在pH值6.0时活性最强.     

稻瘟病生防放线菌菌株A11发酵液中 抗菌物质的稳定性测定

在实验室分离获得的放线菌A11菌株,其发酵液采用对峙培养对植物病原真菌均表现良好的抑菌活性。对发酵液在不同温度和不同pH下的稳定性进行测定,结果表明菌株A11发酵液在中性及酸碱条件下都稳定,在极酸和极碱条件下抑菌活性丧失;A11发酵液能经受75℃温度60min,仍保持原来的抗菌活性,温度升高到100℃时活性丧失。     

棉花黄萎病菌拮抗细菌TYG-2抑菌蛋白的分离纯化

拮抗细菌TYG-2是从根际土壤中分离得到的一株芽孢杆菌,其菌株发酵液产生的抑菌物质对棉花黄萎菌具有较强的抑制作用。为了得到它的抑菌活性组分,将TYG-2菌株去菌体发酵液经硫酸铵沉淀,得到的沉淀物脱盐后经DEAE-Sepharose Fast Flow分离得到4个组分,经抑菌活性测定得到一个抑菌活性组分,再通过Sephacry S-100凝胶过滤分离得到两个组分P1和P2,经检测表明P1组分对V.dahliae的菌丝生长具有抑制作用,为有效抑菌活性组分。经SDS-PAGE电泳纯化为单一蛋白带,分子量约为30kDa。     

一株产抗灰霉病菌株的发酵优化研究

[目的]对枯草芽孢杆菌a1发酵条件进行初步优化。[方法]以顺丁烯二酸酐为基础碳源,采用生长速率法测定发酵液对番茄灰霉菌的抑制率。[结果]该菌株较佳发酵条件为：酵母膏1%,含1%顺丁烯二酸酐的PDB培养基培养,温度30℃,接种量1%,装液量50 ml/500 ml,初始pH值5.5,摇床转速150 r/min,发酵时间120 h。[结论]为开发新型微生物源农药奠定基础。