食菌伞滑刃线虫和阿苏里伞滑刃线虫的比较鉴定

宁波口岸在进境木质包装检疫中经常截获食菌伞滑刃线虫和阿苏里伞滑刃线虫,这2种线虫都属于fungivorus组,形态上十分近似。主要区别在于:前者唇区缢缩十分明显,而后者缢缩不明显;前者排泄孔与半月体平均距离较远(约11μm),而后者较近(约5μm);前者雄虫热杀死后尾部强烈向腹面弯曲(超过180°),后者尾部略腹弯(约90°);前者基顶与喙突相距约9.8μm,喙突高约2.7～3.5μm,后者则分别为8.4μm和1.5～2.8μm;前者雌虫尾多数腹弯十分明显,尾较短(长约50μm),后者尾一般略腹弯(长约68μm)。此外,ITS区的PCR-RFLP方法可区分上述2种线虫。     

进境木质包装中豆伞滑刃线虫的鉴定

豆伞滑刃线虫由宁波出入境检验检疫局植检室验室于2004年6月首次从台湾的针叶木质包装中截获并报道以来,至今共截获17批次,分别来自韩国（6批次）、中国台湾（4批次）,日本（4批次）,印度（1批次）,马来西亚（1批次）和南非（1批次）.该线虫属松材线虫组,与拟松材线虫、松材线虫等十分接近.其主要鉴定特征是：雌虫尾圆锥形略向腹面弯曲,其腹面的边线较平直,而背面的边线明显呈圆弧形;尾尖长约2～4μm,渐细,有时呈丝状,位于腹面;雄虫交合刺较大（约36～40μm）,中间部分几乎呈直线.该线虫很容易与拟松材线虫等混淆,当形态学鉴定有困难时,ITS-RFLP方法是十分有效的辅助手段.我国大陆尚未有该线虫发生的报道.     

宁波检验检疫局多次截获非洲伞滑刃组线虫

2006年来,宁波出入境检验检疫局植检实验室曾多次从进境木质包装中首次截获并报道非洲伞滑刃组（africanus group）线虫,它们分别为非洲伞滑刃线虫（Bursaphelenchus africanus Braasch, Gu, Burgermeister, Brandstetter &; Metge, 2006）、伯氏伞滑刃线虫（B. burgermeisteri Braasch, Gu, &; Brandstetter, 2007）和欧斐切伞滑刃线虫（B. obeche Gu, Braasch, Zhen, Burgermeister &; Lin, 2008）。这些线虫均为作者最先截获。非洲伞滑刃组线虫的主要鉴定特征是：侧线4条;尾乳突7个（第3对和第4对靠近并位于交合伞起始处,第3对略位于第4对前并更靠近腹面）;交合刺较直,中部有横纹,冠状体愈合（基顶和喙突不明显）,远端无盘状突;后阴子宫囊约占肛阴距1 /2。目前尚无关于该组线虫媒介昆虫及致病性的报道。     

伞滑刃线虫属分种检索

依据2004年以前发表的所有伞滑刃属新种原始报道的资料,分析了伞滑刃属73个相关种的所有形态学分类特征,编制了64个伞滑刃属有效种的分类检索表.     

首次截获的安东尼伞滑刃线虫的鉴定

宁波出入境检验检疫局植检实验室于2007年2月从来自法国的木质包装中截获一种伞滑刃属线虫。该线虫虫体较短,侧区有2条侧线,雄虫交合刺强壮,强烈弯曲,基顶高圆,喙突指状。雌虫有小阴门盖,尾圆锥形渐细,较平直或略向腹面弯曲,末端尖或钝圆,与树皮象伞滑刃线虫十分接近。经形态学比较、测量以及ITS-RFLP图谱比对,鉴定为安东尼伞滑刃线虫（Bursaphelenchus antoniae）。目前除葡萄牙外未见该线虫的报道。     

进境木质包装中检出线虫新种--新加坡伞滑刃线虫

从新加坡进境阔叶木质包装中分离到伞滑刃属松材线虫组新种——新加坡伞滑刃线虫。该线虫雌虫和雄虫体长分别为850（690～961）肿和792（553．950）μm，身体较粗壮，口针15～16μm，侧区有4条侧线，雌虫后阴子宫囊较长（平均102μm），尾部圆锥形（c=20），略向腹面弯曲，末端钝圆，或有极短的尾尖突（1～2μm），雄虫交合刺长（41～48μm），喙突显著，远端有盘状突。该线虫与松材线虫组的B．conicaudatus、B．luxuriosae、B．fraudulentus、B．kolymensis、B．baujardi、B．xylophilus、B．mucronatus及B．abruptus形态上近似，但可从较大的交合剌及雌虫尾部形态来区分。另外用ITS-RFLP方法也可将该线虫区分出来。     

云南松树伞滑刃线虫种类鉴定

 2000~2001年从云南省34个县/市调查采集到病松树样本161份,鉴定出伞滑刃属线虫3个种即拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)、霍夫曼伞滑刃线虫(B. hofmanni)和赫列尼库斯伞滑刃线虫(B. hellenicus)。后2种为我国新记录种,其寄主分别是华山松(Pinus armandii)和云南松(P. yunnanensis),为该2种线虫的世界新寄主记录。目前云南省没有发现松材线虫,但在16个县/市发现拟松材线虫。     

中山检验检疫局截获小角伞滑刃线虫

2004年11月中山检验检疫技术中心植物检疫实验室在检获进口木质包装的线虫分离实验中,分离到大量的活体伞滑刃属线虫,经华南农业大学廖金铃教授复核鉴定为小角伞滑刃线虫(Bursaphelenchus corneolus).经查询,对小角伞滑刃线虫还处于研究、认识阶段,在我国的分布和危害情况还不甚了解,在我国口岸属首次截获.目前,伞滑刃线虫属越来越受到广泛重视,许多学者对该属线虫正在积极开展研究.     

伞滑刃线虫雄虫端生交合伞的两种简易观察法

在进行松树线虫疫情调查和进境木质辅垫材料线虫检疫时,常需要将线虫制成临时玻片,在显微镜下观察鉴定.     

松材线虫PCR快速检测方法研究

松材线虫是许多国家的检疫性有害生物 ,其形态与拟松材线虫非常相似。为克服传统的形态学鉴定的不足 ,本研究依据松材线虫rDNA基因部分序列 ,通过单个碱基的故意错配 ,设计了一对特异性引物 ,运用PCR方法 ,最终实现了对单条松材线虫的快速检测。该检测方法具有很好的实用性和稳定性     

Duplex PCR 快速检测松材线虫

利用duplex PCR技术对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)与拟松材线虫(B. mucronatus)的rDNA部分核苷酸序列扩增.根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,设计出特异性引物,检测松材线虫的存在;在5.8S,28S保守序列区设计通用引物,检测伞滑刃线虫的存在.     

First record of Bursaphelenchus leoni in South Africa and comparison with some other Bursaphelenchus spp.

Bursaphelenchus leoni was found in wood of a severely wilted pine tree ( Pinus radiata ) in South Africa. Morphological studies and morphometric measurements showed the South African population to be conspecific with B. leoni which is widespread in southern Europe and indigenous in the Mediterranean region. In addition, molecular biological tests (RFLP analysis of amplified ribosomal DNA) confirmed this diagnosis and allowed comparisons with other Bursaphelenchus spp. from pine and other trees, i.e. B. xylophilus, B. mucronatus, B. fraudulentus and B. sexdentati. This is the first record of a Bursaphelenchus species in South Africa as well as in the southern hemisphere. P. radiata is recorded as a new host for B. leoni.     

A survey for Bursaphelenchus spp. in pine forests in Norway

Wood samples from pine trees were taken from 429 sites throughout Norway. The samples were selected as being either from (1) healthy trees, (2) trees suffering from stress, either physical or pathological or (3) dead trees. Nematodes were recovered from 39% of samples, most from dead wood and least from healthy trees. Species of Bursaphelenchus were recovered from 12% of dead trees and 5% of stressed trees, but were never found in healthy wood. B. mucronatus was found at just one site and in this sample it was associated with Monochamus sutor , only one of two sites at which the beetle was detected. Based on the information gained from the survey and from other sources, an assessment is made of the risk of introduction of B. xylophilus from outside Europe on imported wood and its survival, spread and disease potential in European forests.     

木质包装中松材线虫的实时荧光PCR检测

松材线虫是进境木质包装中的重要检疫对象之一。本研究以进境木质包装中截获的12种伞滑刃属线虫,包括4种不同来源的松材线虫、3种不同来源的拟松材线虫、豆伞滑刃线虫、大尖尾伞滑刃线虫、阿苏里伞滑刃线虫、伯氏伞滑刃线虫及拟小刺伞滑刃线虫为材料,进行实时荧光PCR检测。结果显示,仅松材线虫可观察到明显的荧光强度变化,而其他线虫的荧光强度没有变化。通过研磨样品的方法,提取单条松材线虫的DNA,进行实时荧光PCR试验,检测成功率为100%,且不论是雄虫、雌虫或幼虫均能检测出来。该研究对于我国口岸进境木质包装中松材线虫的检测具有一定的实际意义。     

小麦印度腥黑穗病菌PCR检测

应用PCR方法对小麦印度腥黑穗病菌及其近似种或相关种包括黑麦草腥黑粉菌、狼尾草腥黑粉菌、水稻腥黑粉菌等10种腥黑粉菌共14个菌株进行了检测研究。根据线粒体DNA的序列分别设计了扩增小麦印度腥黑穗病菌的特异性引物和扩增黑麦草腥黑粉菌的特异性引物，根据核糖体内转录区（ITS）DNA片段设计了扩增腥黑粉菌属真菌的引物，应用PCR方法能将小麦印度腥黑穗病菌与黑麦草腥黑粉菌及其它近似种或相关种加以区分。本方法稳定、可靠、重复性强，已分别在不同实验室的不同型号PCR仪上得到验证。     

红掌细菌性疫病病原菌的PCR特异性检测

 红掌细菌性疫病(Xanthomonas axonopodis pv. dieffenbachiae,简称Xad)是红掌等天南星科花卉毁灭性病害,该病通过带菌种苗调运不断在我国扩散蔓延,国内尚未有检测方法。通过筛选和重新设计引物,建立了Xad 的PCR 检测方法,结果表明,利用引物Xad-F / Xad-R 进行PCR,能扩增出检测Xad 的特异性DNA 片断,其灵敏度可达1 × 102 CFU / mL,DNA 的最低检出限为0. 44 ng / μL,可用于红掌苗的带菌检测和红掌细菌病害的鉴定。     

可视化核酸试纸条法快速检测松材线虫

建立了快速、可视化检测松材线虫的方法,分别设计一对特异性引物和一条竞争引物,其中上、下游引物的5'端分别修饰有生物素(biotin)和荧光素(FITC);通过试验筛选并确定了竞争引物的最适比例从而避免核酸试纸条检测扩增产物的假阳性结果,实现了松材线虫的可视化检测.该技术具有操作便利、特异性强、灵敏度高,结果直观、稳定、可靠等优点,在口岸检验检疫实验室快速鉴定松材线虫方面具有良好的应用前景.