白木香愈伤组织的诱导及培养

以白木香[Aquiliaria sinensis(Lour.)Gilg]无菌苗为试验材料,研究不同激素对其愈伤组织诱导以及生长的影响。结果表明,适合白木香无菌苗诱导愈伤组织的外植体为茎段,适合诱导愈伤组织的6-BA浓度为1.0 mg/L。白木香愈伤组织在MS+0.1 mg/L 6-BA培养基中丛生芽的诱导效果最好;在MS+1.0 mg/L 6-BA的培养基中继代培养后愈伤组织的增殖量最多;在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中继代培养后愈伤组织的细胞活力最大。     

濒危南药白木香愈伤组织总RNA提取方法研究

分别采用SDS-酸酚法、CTAB法、异硫氰酸胍法提取白木香愈伤组织总RNA,通过比较发现,异硫氰酸胍法提取白木香愈伤组织总RNA的效果比其他两种方法更好。利用异硫氰酸胍法提取的白木香愈伤组织总RNA具有较好的完整性,OD260/OD280介于1.8～2.0之间。成功建立了白木香愈伤组织总RNA快速提取方法,可为其他药用植物总RNA提取提供借鉴。     

植物生长调节剂对白木香扦插生根的影响

采用植物生长调节剂6-BA、IAA、NAA、IBA及温水、蔗糖、VB6组合,处理白木香[Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.]的半木质化插穗,研究不同组合处理对白木香扦插生根的影响及生根过程中插穗里的PPO活性变化。结果表明,温水浸泡2 h+IAA 1 500 mg/L、1%蔗糖液浸泡2 h+IAA 1 500 mg/L、6-BA 10mg/L+NAA 1 500 mg/L、VB610 mg/L+NAA 1 500 mg/L这4个组合在各类处理中能够显著提高白木香的扦插生根率;温水浸泡2 h+NAA 1 500 mg/L、1%蔗糖液浸泡2 h+NAA 1 500 mg/L、6-BA 10 mg/L+IAA 1 500mg/L、VB610 mg/L+NAA 1 500 mg/L 4个组合在各类处理中能显著提高生根过程中插穗的PPO活性。     

高速逆流色谱法分离白木香叶片中的洋芹素-7,4-二甲醚及其体外清除亚硝酸盐作用研究

[目的]分离白木香的叶片、树干、果实和花等部位中的洋芹素-7,4’-二甲醚(7,4’-二甲氧基-5-羟基黄酮),并检测该化合物对亚硝酸盐的清除作用。[方法]以经济林木白木香的叶片为原料,用高速逆流色谱技术分离目标化合物,并在pH3.0和7.0条件下检测该化合物对亚硝酸盐的清除作用。[结果]适合分离洋芹素-7,4’-二甲醚的溶剂体系是正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(1∶1.5∶1.5∶1,V/V/V/V),用该溶剂体系成功分离得到纯度为98.31%的洋芹素-7,4’-二甲醚。pH3.0条件下洋芹素-7,4’-二甲醚对亚硝酸盐的清除率为12.40%;pH 7.0条件下对亚硝酸盐的清除率为8.72%。[结论]用高速逆流色谱技术成功从白木香叶片中分离到洋芹素-7,4’-二甲醚;洋芹素-7,4’-二甲醚是白木香叶提取物清除亚硝酸盐作用的活性成分之一。     

月季叶片愈伤组织的诱导

以月季叶片为外植体,研究不同激素配比对月季叶片愈伤组织诱导的影响及愈伤组织诱导的影响因素。结果表明,月季叶片愈伤组织诱导的最佳培养基为MS 2,4-D5.0 mg/L TDZ0.5 mg/L;此外,叶片幼嫩、大小适中、暗培养条件均有利于愈伤组织的形成。     

苹果叶片愈伤组织的诱导培养

为获得优质的愈伤组织,以国光和富士苹果的幼嫩叶片为外植体,研究了不同的消毒方法、植物生长调节剂种类及其浓度、光照条件、叶片放置方式等因素对叶片愈伤组织诱导的影响。结果表明:(1)直接进行光培养,愈伤诱导率只有50%～55%,先暗培养14 d再光培养与先暗培养21 d再光培养叶片的愈伤组织诱导率都达100%,但前者产生的愈伤组织结构紧密呈淡黄色,后者出现白化疏松的愈伤细胞。暗培养14d为诱导叶片愈伤组织形成的有利条件。(2)未添加激素的MS基本培养基比添加激素的MS培养基有利于降低叶片的褐变率。(3)采用叶片远轴面接触培养基比近轴面接触培养基的愈伤诱导率高约25%～30%,且诱导愈伤组织形成的时间较早。(4)国光叶片在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基中,富士叶片在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基中愈伤组织的诱导效果最佳。     

野生型拟南芥叶片愈伤组织诱导的研究

[目的]研究野生型拟南芥叶片愈伤组织的诱导。[方法]以野生型拟南芥叶片为外植体,通过将其切段后接种在添加有不同浓度6-BA和NAA的MS培养基上,研究了拟南芥愈伤组织的诱导和再生植株。[结果]6-BA对于愈伤组织诱导不可缺少,但其浓度太高易产生玻璃化;NAA单独使用利于生根,配合6-BA使用利于分化芽;获得最适愈伤组织诱导培养基为MS＋0.50mg/L6-BA＋0.10mg/LNAA,愈伤组织诱导率可达100%。[结论]为进一步开展拟南芥的遗传转化或细胞培养奠定了基础。     

野生型拟南芥叶片愈伤组织诱导的研究

[目的]研究野生型拟南芥叶片愈伤组织的诱导。[方法]以野生型拟南芥叶片为外植体,通过将其切段后接种在添加有不同浓度6-BA和NAA的MS培养基上,研究了拟南芥愈伤组织的诱导和再生植株。[结果]6-BA对于愈伤组织诱导不可缺少,但其浓度太高易产生玻璃化;NAA单独使用利于生根,配合6-BA使用利于分化芽;获得最适愈伤组织诱导培养基为MS＋0.50 mg/L 6-BA＋0.10mg/L NAA,愈伤组织诱导率可达100%。[结论]为进一步开展拟南芥的遗传转化或细胞培养奠定了基础。     

一种快速提取番茄叶片DNA的方法

以番茄的幼叶为实验材料提取总DNA,经0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测结果发现：DNA质量较好,所得的DNA可用于RAPD等技术。此法具有提取速度快、质量高和经济实用等优点。     

白木香基因组DNA提取与ISSR反应体系的优化

白木香为瑞香科沉香属植物,是中国特有的珍贵药用植物,也是国产沉香药材唯一资源植物,现已濒临灭绝,被载入<中国植物红皮书>采用改良CTAB法提取白木香DNA较传统方法简单高效.通过琼脂糖凝胶电泳和OD260/OD280比值测定,所得基因组DNA纯度高,可作为ISSR等以PCR为基础的DNA多态性标记.通过优化影响白木香ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于白木香的ISSR反应体系和扩增条件.结果表明在20μl反应体中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶5种主要成分的最适浓度分别为25 ng、0.8 μmol/L、2.5 mm01/L、0.2 mmol/L、1.0 U,扩增出足量产物至少需要35个循环.     

白木香叶挥发油化学成分的GC-MS分析

[目的]研究白木香叶挥发油的提取及其化学成分的含量。[方法]采用水蒸气蒸馏法提取分离白木香叶中的挥发油,通过GC-MS联用仪对白木香叶挥发油的化学成分进行分析,采用峰面积归一化法计算其相对含量。[结果]结果共鉴定出48个化学成分,主要成分为9-二十六烯（4.17%）、N′-羟基-4-（三氟甲基）吡啶-3-甲酰胺（3.95%）、二十八烷（3.76%）、二十四烷（3.50%）、二十二烷（3.32%）、1-碘十六烷（2.82%）、4,6-二甲基十二烷（2.76%）和1-溴二十二烷（2.58%）。[结论]该研究为白木香叶的开发利用提供了理论依据。     

白木香基因组DNA的提取及ISSR反应条件的优化

[目的]以白木香为试验材料,研究基因组DNA提取方法,并优化ISSR-PCR反应体系。[方法]利用快速提取仪和微量液氮法提取DNA,并对ISSR-PCR反应体系进行单因素筛选。[结果]微量液氮法提取的DNA质量好于快速提取仪,但2种方法得到的DNA对后续ISSR研究没有明显的差异。同时,建立了最适的白木香ISSR-PCR体系,即25lμPCR反应体积中,1×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,4ng/μl模板DNA,200μmol/L dNTPs,1.1 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物。最佳扩增程序为:94℃预变性5 min,然后进行45个循环,94℃变性45 s,复性温度根据各引物的TM值略低1~2℃,45 s,72℃延伸75 s,循环结束后72℃延伸7 min。[结论]优化系统的建立为进一步利用ISSR分子标记技术进行白木香遗传多样性研究提供了基础。     

多年生白木香茎干不同部位总RNA提取方法的改良

运用"通体结香"技术诱导处理10年生白木香,以处理15 d结香后的茎干白木层(H)、过渡层及结香层(A+T)为材料,对艾德莱EASY-spin plus RN38试剂盒RNA提取过程进行改良,并对比分析改良前后2种方法提取RNA质量的差异。结果表明:改良法提取的总RNA质量、纯度和完整性等均较RN38试剂盒好,其中28S和18S条带清晰无杂质污染,无降解,A260/A280接近2.0,RIN值大于6。说明改良后的方法适用于多年生白木香不同结香部位总RNA的提取,能满足转录组数据分析。     

虎杖叶愈伤组织的诱导和白藜芦醇含量的测定

[目的]诱导虎杖叶的愈伤组织并测定其中白藜芦醇的含量。[方法]以虎杖叶为组织培养材料,在28℃和黑暗培养条件下,在含有浓度0.2 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和浓度1 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）的MS诱导培养基中进行诱导,15 d后把诱导出的愈伤组织转接到相同培养基中培养15 d,转接3次后,把愈伤组织切下放置在相同培养基上继续培养3次后,采用HPLC法测定虎杖叶愈伤组织中白藜芦醇的含量。[结果]诱导出的愈伤组织生长状况良好,并且测得虎杖叶愈伤组织中白藜芦醇的含量为0.24 mg/g。[结论]由叶诱导出的愈伤组织中含有白藜芦醇成分,用HPLC法测定其含量,方法简便、迅捷,结果可靠。     

土沉香实生苗苗期生长节律研究

[目的]更好地了解土沉香苗期生长节律,培育优质种苗,适应市场需求。[方法]对土沉香半年生容器实生苗苗期生长规律进行研究,并分析气象因子对苗木生长的影响,采用有序样本聚类分析法对土沉香容器苗苗期日生长率进行分析。[结果]将土沉香半年生实生容器苗的高生长划分为生长前期、速生期、缓生期、生长后期4个阶段,地径生长划分为生长前期、速生期、生长后期3个阶段。应根据不同阶段的生长特性,采取不同的阶段性育苗措施,具体为生长前期注意遮阴、除草、喷药防病、喷淋等日常管护,促进地下根系生长;速生期施用高氮低磷低钾肥,薄肥勤施,保持土壤湿润,全面除草;缓生期减少氮肥施用比例,增加磷钾肥施用比例,适当减少淋水,注意病虫害防治;生长后期停止施肥,减少淋水,以促进苗木木质化,提高抗旱性和抗寒性,继续保持遮阴防霜害。[结论]该研究为科学合理地培育土沉香苗木提供了指导。     

国产沉香TLC的指纹图谱分析

通过2个展开系统和3种检视方法,建立10批国产沉香的薄层色谱(TLC)指纹图谱。结果表明,该方法精密度、稳定性和重复性良好,符合指纹图谱技术要求。10批样品中检测到17个共有斑点,初步鉴定了其中6个,包括3个色酮类成分,2个倍半萜类成分和1个谷甾醇。     

沉香属植物基因组DNA提取及SSR反应体系的优化

以白木香为材料,研究沉香属植物基因组DNA提取方法 ,并优化SSR-PCR反应体系。通过改良CTAB法提取白木香叶片基因组DNA,经电泳和吸光度检测。优化影响白木香SSR-PCR主要参数,确立适合沉香属植物的SSR-PCR反应体系和扩增条件:在20μL反应体系中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶等5种主要成分的最适浓度分别为2.5 ng/μL、1μmol/L、2 mmol/L、0.2 mmol/L、1.2 U;并用9份沉香属植物DNA样品对SSR-PCR反应体系验证,能扩增清晰条带。SSR优化系统的建立为进一步利用SSR分子标记技术进行白木香种群及不同地区沉香属种群遗传多样性研究提供基础。     

土沉香(瑞香科)的地理分布研究

通过查阅文献资料、标本馆的标本信息以及实地调查对土沉香的地理分布状况进行了分析。结果表明,在我国土沉香主要分布于广东、广西、海南、云南、香港及澳门等地。此外,在台湾、福建和四川金沙江干热河谷等地区也有部分的人工栽培。目前导致土沉香濒危的主要原因在于长期以来人们对野生大树的掠夺性采伐,导致土沉香母树的不断减少,从而使其种群更新难以顺利地进行。因此,要对土沉香的资源状况进行研究,为土沉香的可持续开发利用提供科学依据。     

土沉香与印度沉香的生物学特性比较分析

土沉香与印度沉香苗木的外观形态相似度较高、不易区分,给种植户带来不必要的困扰,但2个品种之间还是有一些各自明显的生物学特性,了解这些特性就容易将二者区别开来。针对土沉香与印度沉香的树干、树叶、花、果实及种子共5个方面进行直观描述,通过对比分析生物学上的细微差别,提高广大沉香种植户的分析辨别能力。