松材线虫携带细菌产生抑制真菌的物质

研究发现松材线虫携带的两株荧光假单胞菌GcM5-1A、ZM4A和恶臭假单胞菌ZpB1-2A具有抑制真菌菌丝生长的作用.首先对供试的8个细菌菌株进行抑菌活性生物测定,从中筛选出3个具有抑菌活性的细菌菌株;接着对细菌培养液及滤液、死细菌及活细菌进行生物测定;最后对细菌代谢物的性质进行生物测定.实验证明抑制真菌菌丝生长的活性成分为松材线虫携带细菌的挥发性代谢产物.     

具杀松材线虫活性细菌的筛选和鉴定

为筛选出对松材线虫具有抑制作用的生物防治细菌,对马尾松内生细菌进行分离纯化,从中筛选出6株对松材线虫具有杀线虫活性的细菌,其中细菌Z11-2和细菌G36具有较强的杀线活性,用它们的培养滤液分别处理松材线虫24 h,松材线虫的死亡率分别达92%和89%,48 h后线虫消解率分别是87.4%和77.5%。通过细菌形态特征观察和16S rDNA测序及其系统发育分析,菌株Z11-2和G36与短小芽孢杆菌Bacillus pumilus处于同一分支,同源性分别为100%和99%,初步鉴定细菌Z11-2和G36为短小芽孢杆菌。     

松材线虫生防真菌伊氏线虫菌研究进展

松材线虫病对森林生态健康有显著影响,可以导致松林大面积死亡,有效预防松材线虫病是维护森林生态系统的重要措施。伊氏线虫菌是一种松材线虫的内寄生真菌,具有作为松材线虫病生物防治的天敌的潜力。近几年,对于这种鲜为人知的真菌的研究增多。本文从该菌的发现、形态学、培养、侵染机制、分子层面研究和生物防治应用等方面较系统全面地介绍该菌。伊氏线虫菌共有6个菌株,能产生月形孢子和杆状孢子2种类型的孢子,月形孢子能黏附到松材线虫体表并寄生于体内将其杀死。伊氏线虫菌能在松树和松树分泌的树脂中存活,通过产生宿主松树的香味而引诱松材线虫。培养条件对伊氏线虫菌生长、产孢、孢子侵染活力的影响较大,可以在培养基中添加甘氨酸等增强其对环境的抗性。伊氏线虫菌基因组已被完整测序,还克隆出1个对松材线虫具有强毒力的丝氨酸蛋白酶基因,同时在菌株细胞内发现内生细菌的存在,可以通过分子方法检测该菌。在温室和野外采用树干注射、树冠喷洒和伤口接种等不同方法施用含有该真菌的生防菌,均显示其能降低松材线虫对松树的侵染。目前对于该菌的研究主要集中在实验室,对于林间防治应用也有研究,但还是较少。关于该菌未来的研究可以从几方面开展:1)分子层面弄清其侵染机制;2)商品化生物制剂; 3)野外防治方案; 4)松褐天牛与伊氏线虫菌之间的关系。     

绿僵菌Mf2菌株对松材线虫的毒力测定

为探索绿僵菌Metarhigium anisopliae Mf2菌株对松材线虫的毒杀效果,从4种常见培养基PDA,PPDA,SDAY,SMAY中选择一种最适于绿僵菌Mf2菌株营养生长及产孢的培养基,测定该菌株对松材线虫的毒杀活性。结果表明,Mf2菌株在PPDA培养基中生长速度最快,14 d后菌落直径大于其他3种培养基,为76.00 mm;培养14 d后PPDA培养基中菌株产孢量最高,为5.667×1010个孢子,显著高于其他培养基上的产孢量,约为处于第2位的PDA培养基上产孢量的2.5倍;绿僵菌Mf2菌株具有较高杀线虫活性,处理36 h后校正死亡率为98.52%。绿僵菌Mf2菌株对松材线虫毒力测定表明具有很高的毒性,有良好的应用前景。     

松材线虫病程中树体内线虫和细菌种群数量的动态变化

越来越多的证据证明松材线虫病是由松材线虫和线虫携带的细菌共同引起的。本文对接种松材线虫后黑松的不同发病阶段 ,树体内非接种枝上的线虫、细菌的种类及数量变化动态进行了研究 ,结果表明 ,非接种枝上 ,在病树出现少量黄色针叶时 ,能有细菌检出 ;较多黄色和褐色针叶时 ,线虫才开始出现 ,细菌开始增多 ;至发病后期 ,病树基本枯死时 ,线虫和细菌数量迅速增加。对发病过程中出现的细菌种类鉴定表明 ,发病中期 ,细菌种类比较单一 ,随着病情的发展 ,细菌不但数量迅速增加 ,而且种类也增多 ,但优势菌群为荧光假单胞菌、假单胞菌 不动杆菌、泛菌属和少动鞘氨醇单胞杆菌     

松材线虫病病原与致病机理研究进展

松树是我国重要的造林树种,而松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。近年试验表明,松材线虫病病原是松材线虫与伴生细菌。组织病理学研究看出,树脂道泌脂细胞最先受到线虫侵袭,薄壁细胞的死亡是寄主最初的组织病理学反应。松苗皮层薄壁细胞发生程序性死亡,表现出核染色质浓缩,核变形,降解,解体等细胞凋亡。纤维素酶作为松材线虫的致病物质参与早期寄主发病过程.线虫伴生细菌产生活性毒素。管胞空穴化造成输水堵塞致使受害松树死亡。松材线虫携带的细菌在致病过程中起到至关重要作用。可以认为,松材线虫病是由松材线虫和伴生细菌共同侵染引起的复合侵染病害。     

阿维菌素乳油注干防治松材线虫病的效果

采用浸渍法测定阿维菌素乳油1 000,2 000,3 000,5 000,7 000倍液对松材线虫的毒杀效果,结果表明,阿维菌素乳油对松材线虫有较强的杀灭活性,药剂各配比液处理24 h后线虫死亡率达92%,其中,配比度低于5 000倍液的毒杀死亡率超过97%,与7 000倍液的毒杀死亡率之间差异极显著;阿维菌素乳油在林间注干防治松材线虫试验结果表明,防治效果十分显著,马尾松和湿地松注药1次,在1 a时间内未发现病害枯死木,有效地抑制了松材线虫病的发生。     

8种化学药剂单独及两两联合染毒对松材线虫杀灭作用试验

8种药剂单个药剂的染毒结果表明，阿维菌材线虫即有较强的杀灭活性，其半数致死浓度（LC50）分别为0．0601mp／L和8.35mg／L，其LC50的95％可信区间（95％CI）分别为0．0416～0．0868mg／L和6．16～11．34mg／L。甲胺磷对松材线虫的毒性次之，其IC50为3282．46mg／L（95％CI为2779．71～3872．58mg／L），其它几种测试药剂（三邻甲苯基磷酸酯、甲醚菊酯、溴氰菊酯和吡虫啉）的杀线活性很弱。联合染毒测定的结果表明，阿维菌素与硫酸铜、溴氰菊酯与硫酸铜以及溴氰菊酯与涕灭威分别联合使用对松材线虫表现出毒性增强作用（P〈0．01），蜕明这几荆坝临嬉秭职抖燃虫的毒杀作用具有协同效应。     

几种外生菌根菌对松苗抗非根部病害的影响

研究几种外生菌根真菌对松苗抗松枯梢病和抗松材线虫病的影响.结果表明:菌根菌增强了马尾松苗苗木对松枯梢病的抵抗力,其中华美牛肝菌(504)菌根苗的抗性最强,其次为黄豹斑鹅膏(EG)和彩色豆马勃Pt2菌根苗,彩色豆马勃Pt,和紫金蜡蘑(ZJ)菌根苗的抗性相对较弱;但外生菌根菌对湿地松苗苗木抗松枯梢病的能力未见提高.对黑松和马尾松菌根苗接种松材线虫后发现,菌根增强了黑松和马尾松对松材线虫病的抵抗力,延缓或减轻了苗木的死亡,以504、Pt2和EG的效果较好.黑松菌根苗接种松材线虫后各处理体内早期的PAL活性存在一定差异.对松材线虫抗性较强的菌根苗其体内PAL酶活也较高,反之亦然.供试外生菌根菌的促生作用以及菌根苗体内抗病代谢酶活性的变化与其抗病性有一定的相关性.     

水合霉素对松材线虫病的影响

松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。为进一步弄清细菌在病害中的作用，本文筛选了几种对细菌菌株GD1有抑菌活性的抗菌剂，在马尾松(Pinu massomiama水培1a～2a生离体松枝上测定了其对病害发生的影响。结果表明，红霉素和环丙沙星对菌株GD1均有较强的抑菌活性，水合霉素的抑菌活性较弱，叶枯宁、菌毒清、农用链霉素、青霉素钠和氯霉素均没有抑菌活性；离体松枝上的试验显示，水合霉素能减轻混合接种松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)和菌株GD1松枝的病情，而红霉素和环丙沙星无此现象，从而再次证明了细菌在松材线虫病中的重要作用。据此提出了从细菌和松材线虫两方面入手的该病防治策略。     

几种物质对松材线虫的作用

松材线虫病是松树的一种毁灭性病害。本文选用了几种物质，采用浸泡生测法和棉球生测法测定了其对松材线虫的作用。结果表明，阿维菌素对松材线虫的杀线活性较强，米乐尔次之，狼牙刺种子粗提物和氯化铵的杀线活性均较弱，氯化钙则无杀线活性。阿维菌素和米乐尔对松材线虫繁殖均有较强的抑制作用，狼牙刺种子粗提物的抑制作用较弱，氯化铵无抑制作用，而氯化钙对松材线虫的繁殖具有促进作用。     

松材线虫伴生细菌的分离鉴定及其致病性

从松材线虫虫体上分离到两个细菌菌株:GD1和R,经鉴定,菌株GD1为坚强芽孢杆菌.利用水培马尾松离体松枝作接种材料,接种消毒后的松材线虫(Bx)、GD1、R、Bx GD1和Bx R.结果表明,松材线虫和坚强芽孢杆菌混合接种,松枝发病,松枝流脂减少至停止,蒸腾作用降低,单独接种松材线虫或坚强芽孢杆菌,松枝不发病.菌株R对松材线虫病的发生没有影响.提出松材线虫及其伴生细菌均是松材线虫病不可缺少的致病因素.     

A simple,polymerase chain reaction‐restriction fragment length polymorphism‐aided diagnosis method for pine wilt disease

For diagnosis of pine wilt disease, a simple PCR‐RFLP method was developed to identify and to differentiate two similar nematode species, based on a living or preserved single specimen. Pinewood nematodes, Bursaphelenchus xylophilus, and Bursaphelenchus mucronatus were examined. A single nematode in 1 µl of distilled water was put on a glass slide. When the water had almost dried the nematode was crushed with a filter paper chip, 1.5 mm × 1.5 mm, with the aid of forceps. The filter paper chip containing nematode remains was immediately placed into PCR buffer as the DNA template. The primer set used was to amplify ribosomal DNA containing the inter‐transcribed spacer (ITS) 1, 5.8S and ITS2 regions. The PCR product was consistently obtained from a single nematode, and digesting the product with restriction endonuclease, Hinf I, enabled discrimination between B. xylophilus and B. mucronatus. This method was simple, convenient and definitive, and could successfully determine the pathogen in the diagnosis of pine wilt disease. This method was applicable also to nematode specimens preserved under various conditions except in the case of those preserved in aldehyde‐containing fixatives.     

松材线虫侵染对松树苯丙氨酸解氨酶及酚类物质的影响

以湿地松（Pinus elliottii Engelm）、日本黑松（Pinus thunbergii Parl）为材料,研究松材线虫[Bursaphelenchus xylophilus（Steiner＆Buhrer,1934）Nickle]感染对苯丙氨酸解氨酶和酚类物质的影响.两种松树的苯丙氨酸解氨酶的活性在发病过程中都有明显增加,并且伴随着酶活性的变化,各种苯丙烷次生代谢产物,如总酚、类黄酮的含量也发生明显的变化.但湿地松在苯丙氨酸解氨酶活力和酚类物质的积累上的变化比黑松要大些.结果表明,松材线虫病的发生、发展与寄主植物苯丙氨酸解氨酶活性和酚类物质含量变化有关.     

松材线虫发病条件的研究概况

研究和综述了寄生松科植物的伞滑刃属(Bursaphelenchus)的线虫23种,松材线虫的寄主松科植物108种、携带昆虫40种及发病的环境条件。     

注干施药防治松材线虫的药剂筛选与林间防治效果研究

采用浸渍法测定了8种药剂对松材线虫的毒力。结果表明,阿维菌素、甲维盐和硫酸铜在较低浓度下对松材线虫即有较强的杀灭活性,其半致死浓度(LC50)分别为0.1346mg/mL、0.2965mg/mL和0.3179mg/mL。敌敌畏、二甲基硫蒽和氧化乐果的毒性次之,吡虫啉和苦参碱的毒性较弱。联合染毒测定的结果表明,联合使用对松材线虫表现出增效作用。林间试验结果表明,0.1%甲维盐和4.0%吡虫啉,1%阿维菌素和1%苦参碱2个药剂组合,可用于林间注干施药防治松材线虫,持效期可达2年。     

应用比较形态学与PCR技术快速鉴定松材线虫及确立疫区

松材线虫病（Bursaphelenchus xylophilus）是为害松树的一种毁灭性病害。应用比较形态学,并辅助以PCR分子生物学检测技术,对广东省2004-2005年间松材线虫病监测普查过程中采集的疑似样本进行对比研究,结果表明该技术可以快速、准确鉴定松材线虫并确立疫区。     

松材线虫病生物防治研究进展

松材线虫Bursaphelenchus xylophilus是外来入侵生物,主要依靠媒介昆虫的携带在自然界中扩散传播。目前松材线虫病的生物防治研究主要集中在对松材线虫本身及其传播媒介——松墨天牛的控制两方面。本文对国内外松材线虫病的生物防治方法研究做了总结。     

Pine bark beetle problem in Japan,referring to the discovery of the pine wood nematode,Bursaphelenchus lignicolus (Mamiya & Kiyohara)

Heavy loss of pine trees has been occurring for several decades throughout central to southwestern districts of Japan. In spite of beetles abundantly found under bark of dead trees, entomologists were inclined to the assumption that some other agents had already infected healthy trees before beetle attack based on various findings. It has been proved recently that the causative agent was the pine wood nematode (Bursaphelenchus lignicolus) newly discovered by pathologists and its transmitter was the Japanese pine sawyer (Monochamus alternatus). Aerial application of insecticides against the sawyer is now employed as a tentative measure of control.