嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶基因(KerF)的克隆及其在大肠杆菌中的表达

为研究嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)降解羽毛的机理,本研究克隆了嗜麦芽窄食单胞菌角蛋白酶基因(KerF),并获得其全长基因序列1981 bp,含有1个1743 bp的开放阅读框,编码580个氨基酸(GeneBank登陆号HM590650),将角蛋白酶KerF基因连入表达载体pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET28-KerF并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),获得重组工程菌.采用金属Ni+螯和层析柱对所表达的角蛋白酶进行纯化,获得分子量为50 kD的重组角蛋白酶KerF.该酶的最适温度为50℃,最适pH值为9.0.金属离子Mn2+、Co2+、Mg2+、Ni+、Ba2+、Zn2+、Ca2+、Fe3+及蛋白酶抑制剂二苯基甲基磺酰氟(PFSM)能强烈抑制该酶活性,乙胺四乙酸(EDTA)对该酶活具有促进作用.本研究结果表明,嗜麦芽窄单胞菌角蛋白酶基因在大肠杆菌中获得成功表达,重组角蛋白酶KerF为碱性丝氨酸蛋白酶.     

甲基对硫磷降解菌DLL-1的诱变育种

采用紫外线和氯化锂诱变 ,从甲基对硫磷降解菌假单胞菌 (Pseudomonassp.)DLL -1中获取高效突变株DLL -E1 ,DLL -E2 ,DLL -E3 ,DLL -E4。并对其降解甲基对硫磷性能、降解对硝基苯酚性能、底物广谱性及胞外酶及粗酶液活性等生物学功能进行了研究。与出发菌株相比 ,上述性能均有所提高。选择DLL -E4作为进一步研究的对象 ,详细研究了其对甲基对硫磷及对硝基苯酚的耐受和降解情况。高效菌株的选育为农药残留降解的酶学研究打下了基础。     

嗜热子囊菌光孢变种cbh1基因的cDNA克隆及在毕赤酵母的高效表达

以嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var. levisporus)总RNA为模板，通过RT-PCR克隆出外切纤维二糖水解酶基因cbh1片段，采用RACE方法获得全长cDNA克隆，其全长为1 710 bp，编码一种由457个氨基酸组成的单肽，推导的氨基酸序列中1～19位为信号肽序列，GenBank的登录号为AY840982。将该片段克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌型表达载体pPIC9K上，获得表达重组质粒pPIC9K/cbh1，转化毕赤酵母GS115，所得重组子经PCR验证后进行诱导表达，筛选出一重组子GSp-15,经144 h诱导后，外切纤维二糖水解酶表达量为1.17 mg/mL，产酶活力为20.3 U/mL。     

降解2，4—二氯酚假单孢菌GT141—2的特性及3，5—二氯儿茶酚1，2—双加氧酶基因定位

从2，4－二氯酚生产厂排污口污泥中分离出一株2，4－二氯酚降解细菌GT141－2，经鉴定确定为假单胞菌属，在最适条件下菌株GT141－2能在36h内将90mg/L的2，4－二氯酚降解62％。GC／MS分析表明，该菌株能将2，4－二氯酚彻底降解，未积累中间代谢产物。菌株GT141－2有三4条大质粒带，Southern杂交显示其3，5－二氯儿茶酚1，2－双加氧酶基因定位于其中的最小的质粒上。     

大豆绥农14突变体库构建及株高性状分析

应用甲基磺酸乙酯(EMS)对绥农14大豆种子进行诱变,并构建大豆突变体库.结果在M2分别获得120份茎、叶、花、种子等性状变异的材料,其中38份是株高突变体.用100个SSR分子标记分别对120株突变体进行遗传背景鉴定.结果表明:120份突变体中有5株与对照绥农14有超过9个标记的差异,10株与对照有少于3个标记的差异;另外利用前人定位的与株高相关的46个标记对其中38份株高突变体进行鉴定,发现只有高突变体E790在Sat_168位点有差异.本研究获得的突变体可以作为新的种质资源,同时构建的突变体库也有助于大豆功能基因组研究的发展.     

拟南芥激活标签突变体库的构建及突变体表型的分析

激活标签技术（activation tagging）在植物功能基因组学的研究中具有重要的作用。本文以拟南芥bzr1-D为试材，用农杆菌介导的转化方法，构建了一个含有30000个独立抗Basta株系的激活标签突变体库。其中有47个株系有明显的表型改变，包括花期的改变、株型矮小、叶片形状改变、叶柄变长、叶表皮毛消失、育性降低以及恢复了bzr1-D茎叶处的打折等。并通过TAIL-PCR和Nested PCR的方法得到了若干T-DNA侧翼序列，为克隆引起突变表型的基因以及进行后代遗传分析打下基础。     

利用GFP基因的黄瓜T-DNA插入突变体构建与快速鉴定

为促进黄瓜功能基因组学研究,本研究开展了黄瓜T-DNA插入突变体快速构建与鉴定方法的研究.基于对黄瓜遗传转化体系农杆菌侵染活力和共培养条件的优化,本研究以绿色荧光蛋白GFP基因为插入片段,进行黄瓜T-DNA插入突变体的创制,并利用荧光显微镜进行快速鉴定,最后采用TAIL-PCR技术对突变体进行分子鉴定,确定突变位点.结...     

含GFP报告基因的伪狂犬病病毒上海株gE-gI基因部分缺失株的构建

在伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV)上海株gI基因和gE基因克隆鉴定的基础上，进一步构建了转移载体质粒，为PRV－SH的gE－gI基因部分缺失毒株的构建作准备，将gI和gE基因克隆入pUC18中构建pgEI载体，利用gE基因中的酶切位点缺失掉gE基因5′端363bp，并把录色荧光蛋白（GFP）基因表达盒插入到缺失部分。通过酶切鉴定，表明GFP基因已3插入到pgEI中，构建了含GFP的缺失转移载体pgEI-GFP。用DOTAP试剂将pgEI-GFP转染感染了PRV－SH株的兔肾（RK）细胞，待出现80％以上的细胞病变时收获病毒，并以GFP为标志，通过蚀斑法得到纯化重组病毒，命名为PFDE／DI。     

利用cryparin基因的启动子构建板栗疫病菌高效表达载体

低毒病毒／板栗疫病菌是研究植物病原菌致病机理和病毒与宿主相互作用的一个优秀模式系统。本研究克隆了板栗疫病菌转录水平最高的crypari凡基因的启动子,并构建了由该启动子控制的表达载体。构建的载体能成功表达GFP蛋白。利用该载体表达积累量较高的CHV1-Eur07病毒的病毒量控制基因,能提高细胞内CHV1-EP721的积累量,反式互补效率从常用的gpd启动子控制的低于10％提高至67％和80％。高效表达载体的成功构建,为研究板栗疫病菌功能基因以及低毒病毒与宿主板栗疫病菌的相互作用提供了新的工具。     

利用差减链式反应构建白菜基因组代表性文库

构建多态性比例高的基因组代表性文库是提高芯片和测序基础上的标记技术效率的关键。通过差减链式(differential subtractive chain, DSC) 反应,去除同一物种内的不同栽培种群间不具多态性的片段,能够提高基因组代表性文库中多态性片段的比例。研究利用白菜类作物（Brassica campestris） 8个栽培种群的材料构建tester DNA样品,利用水菜(B.campestris ssp. nipposinica) DNA作为driver样品。这两个DNA样品经EcoRⅠ/Mse Ⅰ酶切,酶切产物连接不同的接头。3遍DSC反应后,将反应产物连接到pDONR201载体中,构建基因组复杂性降低文库。分2批随机取其中20个单克隆和95个单克隆,分别进行Southern斑点杂交,结果分别显示9个和98个多态性片段,其比例分别为45%和61%,较之前关于多态性芯片技术的相关研究中15%～17%的多态性克隆比例大大提高。     

中国南瓜突变体库构建及表型变异的初步分析

为促进中国南瓜功能基因组学的研究,以中国南瓜高代自交系N87的种子为试验材料,构建中国南瓜突变体库.将材料在不同浓度的甲基磺酸乙酯(EMS)溶液中处理不同时间,并对诱变后代的表型变异特征进行分析.结果表明,以诱变后南瓜种子的发芽率、成苗率及幼苗生长状况为指标,筛选出1.6％EMS处理12 h为中国南瓜种子最佳诱变条件....     

Highly Efficient Removal of Cu(II) from Aqueous Solution by Using Graphene Oxide

Chemical reagents used by the textile industry are very diverse in their composition, ranging from inorganic compounds to polymeric compounds. Strong color is the most notable characteristic of textile effluents, and a large number of processes have been employed for color removal. In recent years, attention has been directed toward various natural solid materials that are able to remove pollutants from contaminated water at low cost, such as sugarcane bagasse. Cell immobilization has emerged as an alternative that offers many advantages in the biodegradation process, including the reuse of immobilized cells and high mechanical strength, which enables metabolic processes to occur under adverse conditions of pH, sterility, and agitation. Support treatment also increases the number of charges on the surface, thereby facilitating cell immobilization processes through adsorption and ionic bonds. Polyethyleneimine (PEI) is a polycationic compound known to have a positive effect on enzyme activity and stability. The aim of the present study was to investigate a low-cost alternative for the biodegradation and bioremediation of textile dyes, analyzing Saccharomyces cerevisiae immobilization in activated bagasse for the promotion of Acid Black 48 dye biodegradation in an aqueous solution. A 1 % concentration of a S. cerevisiae suspension was evaluated to determine cell immobilization rates. Once immobilization was established, biodegradation assays with free and immobilized yeast in PEI-treated sugarcane bagasse were evaluated for 240 h using UV–vis spectrophotometry. The analysis revealed significant relative absorbance values, indicating the occurrence of biodegradation in both treatments. Therefore, S. cerevisiae immobilized in sugarcane bagasse is very attractive for use in biodegradation processes for the treatment of textile effluents.     

晋麦47 EMS突变体库的构建及高代突变材料品质性状的初步分析

为加快小麦抗旱种质资源创制,推进抗旱品种的遗传改良工作,采用0.6％甲基磺酸乙酯(EMS)溶液处理晋麦47的种子,构建了包含12272个单株的M2突变体库,对各突变性状和突变率进行调查与分析.此外,对前期研究筛选出的50份M7和M8突变材料籽粒的硬度指数、蛋白质含量、湿面筋含量、沉降值、吸水率、稳定时间、最大拉伸阻力和...