线粒体途径参与FTY720诱导白血病细胞凋亡的研究

为研究FTY720诱导K562细胞凋亡与线粒体途径的关系。体外培养人白血病K562细胞,用不同浓度FTY720处理细胞24 h,台盼蓝染色法检测K562细胞存活率;流式细胞术分析细胞凋亡和线粒体功能。免疫印迹技术检测线粒体相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。收集FTY720处理48 h细胞,流式细胞技术检测细胞周期。结果表明:随FTY720浓度的增加,K562细胞的存活率下降,细胞凋亡增加,线粒体膜电位下降,促凋亡蛋白Bax表达明显增加。细胞周期分析发现,Sub G1期细胞增加,而S期和G2M期细胞减少。表明线粒体途径参与FTY720诱导K562细胞凋亡。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对BHK-21细胞的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

为了探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养仓鼠肾细胞(BHK-21)的线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响,采用细胞培养、流式细胞术、免疫细胞化学染色等方法,研究DON对细胞早期凋亡率、线粒体膜电位及Bax和Bcl-2蛋白表达的变化.结果显示:不同浓度的DON均可诱导BHK-21细胞凋亡,各浓度组的凋亡率都显著高于对照组(P<0.05);DON可使BHK-21细胞线粒体膜电位下降,且表现出剂量和时间效应关系.免疫组织化学染色显示,DON处理细胞24 h,Bax蛋白表达显著高于对照组,而Bcl-2蛋白表达均低于对照组.上述结果表明:DON诱导了BHK-21细胞凋亡和线粒体膜电位下降,Bax表达增强而Bcl-2表达下降是DON诱导BHK-21细胞凋亡的分子机制之一.     

流感病毒在诱导A549细胞凋亡过程中对SIRT1和P53蛋白的影响

采用流式细胞术观察了流感病毒诱导A549细胞凋亡的情况,同时应用Western blot方法研究了SIRT1和p53等蛋白的表达情况。结果表明:1000 TCID50/mL剂量流感病毒感染A549细胞后,细胞表现出典型的凋亡特征,且凋亡比例随感染时间延长而逐渐增加。在流感病毒诱导细胞凋亡过程中,SIRT1蛋白的表达下降,p-p53的表达上升。线粒体中Bax的表达上调,Bcl-2的表达下降。可见SIRT1蛋白参与了流感病毒诱导的A549细胞凋亡,SIRT1蛋白表达下调可能促进了Bax释放进入线粒体和p53蛋白功能的进一步发挥。     

马齿苋结合态多酚和自由态多酚抑制肝癌细胞HepG-2增殖及诱导细胞凋亡的研究

[目的]研究马齿苋结合态多酚和自由态多酚抑制肝癌细胞HepG-2增殖并诱导细胞凋亡的作用。[方法]将不同浓度马齿苋结合态多酚和自由态多酚与HepG-2细胞在体外培养,采用MTT检测细胞增殖活性;光镜观察细胞形态;流式细胞术分别检测细胞周期、细胞凋亡和线粒体膜电位;酶标仪检测Caspase酶活力。[结果]结果表明,马齿苋多酚对肝癌细胞HepG-2的增殖抑制作用和凋亡促进作用与一定范围的处理浓度和处理时间呈正相关,36h、0.4g·L-1处理条件下,马齿苋自由态多酚对HepG-2细胞的抑制率仅为15.7%,而马齿苋结合态多酚对HepG-2细胞的抑制率达到73.8%;马齿苋结合态多酚作用下,HepG-2肝癌细胞光镜下可观察到细胞出现明显的形态学改变,处理后细胞周期阻滞于S期,Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶活性也显著提高,并诱导细胞发生凋亡。马齿苋结合态多酚可能通过激活膜受体通路和线粒体介导的内源性凋亡通路诱导HepG-2细胞凋亡。     

马尾松树皮提取物体外抑制人大肠癌细胞生长机理初探

为探讨马尾松树皮提取物(PMBE)体外抑制大肠癌LoVo细胞生长的作用特点和机理,通过MTT、显微镜术、凝胶电泳和流式细胞术,研究PMBE抑制LoVo细胞生长的特点,运用免疫组化和RT-PCR探究相关分子机理。结果表明:PMBE时间-剂量依赖地抑制LoVo细胞的体外生长;PMBE处理后,流式细胞检测发现LoVo细胞周期阻滞于G1或S期,同时可检测到亚二倍体峰的出现;荧光镜检和透射电镜观察可看到LoVo细胞的核皱缩、边集甚或碎裂,以及有凋亡小体形成,其基因组经过凝胶电泳呈现典型的梯形Ladder;RT-PCR和免疫组化结果显示PMBE处理可上调LoVo细胞中p53和p21基因的转录效率,并下调Bcl-2的蛋白表达量。说明PMBE通过上调p53和p21的表达量阻滞细胞周期、下调Bcl-2的表达量诱导细胞凋亡的双重机制,抑制LoVo细胞的体外生长,可供进一步探索相关信号传导通路参考。     

一种含硒鬼臼衍生物通过引起线粒体膜电位下降诱导SMMC-7721细胞凋亡

[目的]为从植物中提取和开发新药提供依据。[方法]研究含硒鬼臼衍生物4′-去甲基-4-脱羟基-4-硒代-对甲苯基-β-表鬼臼毒素(SEP)对SMMC-7721细胞凋亡的诱导,并分析SMMC-7721细胞线粒体膜电位的变化。[结果]SEP可抑制SMMC-7721的增殖,且有明显的剂量效应。经SEP处理后,SMMC-7721细胞形态明显改变,出现了皱缩、变小等疑似凋亡的特征。M30抗体检测表明SMMC-7721细胞凋亡率随SEP浓度的增加而增加,证实SEP可诱导SMMC-7721细胞凋亡。低浓度SEP(10、20μmol/L)可使SMMC-7721细胞阻滞在G2/M期,而40μmol/LSEP则使阻滞在S期的细胞数明显升高,说明细胞DNA发生了损伤,这很可能引起线粒体凋亡途径的产生。不同浓度SEP处理均可使SMMC-7721细胞线粒体膜电位的下降。[结论]SMMC-7721细胞凋亡可能是通过线粒体途径产生的。     

蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响及其可能机制

通过研究蜂王浆蛋白体外消化产物对胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制,为蜂王浆蛋白辅助治疗胃癌奠定实验基础。采用碱提酸沉法提取蜂王浆蛋白,并通过体外模拟消化实验得到蜂王浆蛋白体外消化产物,然后用不同质量浓度的蜂王浆蛋白体外消化物诱导体外培养的胃癌细胞SGC-7901,通过倒置显微镜观察其对胃癌细胞形态的影响,并通过集落形成实验检测诱导后胃癌细胞的集落形成能力;采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测其对胃癌细胞增殖的抑制作用,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡,并通过蛋白质印迹法检测其诱导后胃癌细胞中p53和PARP-1蛋白的表达情况。结果表明:蜂王浆蛋白体外消化产物使胃癌细胞形态发生皱缩,细胞密度降低,集落形成能力降低(P0.05),对胃癌细胞SGC-7901的增殖具有抑制作用。0.2 mg/mL体外消化产物经24 h和48 h培养后对胃癌细胞抑制率分别达到(57.58±3.48)%和(62.84±1.98)%(P0.05)。与空白对照组相比,蜂王浆蛋白体外消化产物对SGC-7901细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,S期细胞减少,从而引起细胞凋亡;且经蜂王浆蛋白体外消化产物诱导后,胃癌细胞中p53蛋白表达量增加(P0.05),PARP-1蛋白表达量减少(P0.05)。说明蜂王浆蛋白体外消化产物能抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖并诱导其发生凋亡,其机制可能与p53表达上调和PARP-1表达下调有关。     

重组杆状病毒AcMNPV-PK2-RFP诱导Sf9细胞凋亡的机制分析

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒是一种模式杆状病毒,在农业虫害防治中广泛应用。其表达的PK2蛋白可以通过竞争性的与宿主细胞e IF2α激酶结合形成异源二聚体,抑制其磷酸化e IF2α,从而加速病毒增殖、诱导细胞凋亡。为了探讨PK2诱导宿主Sf9细胞凋亡的机制,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒AcMNPV-PK2-RFP。Western blot分析结果表明,重组病毒AcMNPV-PK2-RFP处理组在病毒侵染后48,60,72 h,宿主细胞内凋亡因子SfP53蛋白的表达量显著高于AcMNPV处理组,分别是AcMNPV处理组的1.16倍、1.39倍和1.79倍;在病毒侵染后48,72 h,AcMNPV-PK2-RFP处理组反映线粒体膜电位的绿色荧光分别是野生处理组的1.54倍和1.89倍,表明AcMNPV-PK2-RFP处理组的线粒体膜电位显著低于野生病毒处理组;同时,观察到AcMNPV-PK2-RFP处理组线粒体中的细胞色素c从病毒侵染后12 h开始释放。结果说明,过表达PK2的重组病毒AcMNPV-PK2-RFP可在感染后期加速SfP53蛋白的表达,通过影响线粒体凋亡信号通路加速宿主Sf9细胞的凋亡,同时表明重组病毒AcMNPV-PK2-RFP是一种相比野生型病毒抗虫活性更高的杀虫剂。     

家蚕细胞色素C基因的克隆及其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放

 【目的】细胞色素C是线粒体凋亡路径上的关键因子,通过家蚕细胞色素C基因的克隆和其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放研究,为家蚕细胞凋亡的研究奠定基础。【方法】利用生物信息学和分子生物学方法克隆家蚕细胞色素C基因,通过紫外线照射诱导家蚕细胞凋亡,应用流式细胞仪和Western-blotting检测家蚕凋亡细胞的线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放。【结果】在家蚕中克隆了一个含有细胞色素C保守结构域的同源基因,该基因cDNA长570 bp,有3个外显子,开放阅读框（open reading frame,ORF）长324 bp,编码108个氨基酸,存在参与细胞凋亡时与下游凋亡蛋白酶激活因子（Apaf－1）相互作用的保守关键位点;紫外线诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1凋亡后12 h,细胞线粒体跨膜电位明显下降,同时检测到了细胞色素C由线粒体向细胞质释放。【结论】在家蚕细胞凋亡中可能存在细胞色素C由线粒体释放的路径。     

菹草类胡萝卜素抗癌作用与机理的研究

通过MTT细胞增殖抑制试验,测定肿瘤细胞膜唾液酸(SA)含量、线粒体跨膜电位(ΔΨm)、细胞培养液中NO和NOS含量等的变化,研究菹草类胡萝卜素(carotenoids extracts fromPotamogeton crispusL.,CEPC)对人宫颈癌Hela细胞株增殖的影响及其作用机制。结果表明:CEPC对Hela细胞增殖有明显的抑制作用;能显著降低Hela细胞表面的SA含量,诱导Hela细胞ΔΨm下降,导致iNOS活性增强,NO含量显著升高。CEPC对Hela细胞的生长抑制作用可能是通过降低肿瘤细胞膜SA含量,使线粒体跨膜电位下降i、NOS的活性增强、NO的浓度升高而引起肿瘤细胞凋亡。     

某豆科植物粗提物(JA1)对人肝癌细胞株端粒酶活性的抑制和细胞周期的改变

采用单管法一步完成端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞株,经不同浓度JA1及不同时间的作用前后端粒酶活性的变化,并采用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果显示,JA1可显著抑制人肝癌细胞端粒酶活性,而且这种抑制效果有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪分析细胞周期的变化表明,端粒酶活性被抑制后,肝癌细胞被阻滞在G2/M。同时,在检测标本中显示有明显的DNA低含量颗粒(“亚G1期”峰),表明肝癌细胞凋亡的存在。     

二氢杨梅素诱导MDA-MB-231细胞凋亡

为了探讨二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制,利用倒置显微镜观察细胞形态变化,用流式细胞仪检测DMY对MDA-MB-231细胞的致凋亡能力和细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位(ΔΨm)的改变,用蛋白质印迹(Western blotting)分析检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)的变化。结果表明:MDA-MB-231细胞随DMY质量浓度加大而变圆变小,细胞存活数减少;流式细胞仪检测显示随DMY质量浓度的增加,DMY对MDA-MB-231细胞有促凋亡作用,胞内钙离子浓度逐渐增加,而线粒体跨膜电位(ΔΨm)逐渐减少;Western blotting结果显示DMY可诱导MDA-MB-231细胞中caspase-3和caspase-9蛋白质活化,并呈现浓度依赖关系。表明DMY可通过线粒体途径诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

巴西菇多糖对肝癌细胞株凋亡的影响及其机制

目的：研究巴西菇多糖诱导人肝癌细胞株(SMMC—7721)凋亡的作用及机制。方法：采用电镜、DNA电泳、免疫组化法，对SMMC—772l株细胞凋亡以及凋亡抑制基因bcl—2的表达进行检测。结果：SMMC—772l株细胞经巴西菇多糖处理后出现核固缩、膜起泡、凋亡小体形成．琼脂糖凝胶电泳呈现出典型凋亡DNA梯状带．细胞内bcl—2表达较对照组低。结论：巴西菇多糖能诱导SMMC—772l株细胞发生典型凋亡．其抑制细胞内bcl—2的表达，是诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

干扰素通过上调BAX蛋白表达诱导肝癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨干扰素(IFN)体外诱导肝癌细胞凋亡及其相关基因表达的作用。[方法]不同浓度的干扰素(IFN)处理肝癌细胞系CBRH-7919细胞不同时间后,光学显微镜下观察其形态学改变,用琼脂糖凝胶电泳检测作用不同时间干扰素对其细胞凋亡的影响,利用细胞免疫组化技术检测不同作用时间下BAX蛋白表达量的变化。[结果]干扰素作用肝癌细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡形态学变化:细胞体积缩小,变形,细胞膜完整;细胞核固缩,染色质凝集,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等。琼脂糖凝胶电泳测得随着干扰素浓度的增高,出现典型的DNA LADDER。随着时间的增加BAX蛋白表达量出现增加,尤以48 h较明显。[结论]IFN可以诱导肝癌细胞凋亡,可能是由于IFN上调了BAX蛋白的表达,从而增强了自身对肝癌细胞的凋亡作用。     

槲皮素对BEL-7402细胞生长抑制作用的研究

[目的]探讨槲皮素对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。[方法]体外培养BEL-7402细胞,以不同浓度槲皮素处理细胞后,采用酸性磷酸酶（APA）法检测细胞增殖抑制率;光镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。[结果]槲皮素对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为4μg/ml。光学显微镜下可见细胞密度明显降低。经槲皮素作用6、12h后,流式细胞术检测到细胞凋亡率显著增加。[结论]槲皮素对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,可诱导肝癌细胞凋亡。     

辛伐他汀对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM增殖的抑制作用

目的研究辛伐他汀(SIM)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM体外增殖的抑制作用。方法MTT法检测SIM对HO-8910PM细胞增殖的抑制作用;流式细胞术分析SIM对细胞周期的影响;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变。结果SIM抑制HO-8910PM细胞的增殖,细胞被阻滞在G0/G1期;荧光染色法显示经SIM作用后细胞出现变形,染色质浓缩,产生凋亡小体。结论SIM在体外能有效地抑制癌细胞的增殖,其作用可能是通过诱导其凋亡产生的。     

羟基喜树碱对人白血病K562细胞增殖和凋亡的影响

[目的]研究羟基喜树碱对人白血病K562细胞增殖与凋亡的影响。[方法]通过光学显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法,探讨不同浓度羟基喜树碱作用不同时间后,K562细胞凋亡的情况。[结果]羟基喜树碱能够诱导K562细胞凋亡,作用48h的最佳浓度为8.0μg/ml。羟基喜树碱可影响K562细胞增殖周期中的S期,即DNA合成期,细胞在此期停滞,诱导其发生凋亡。[结论]为将羟基喜树碱应用于临床治疗白血病提供前期试验依据。