水牛体细胞核移植方法的研究

探讨电融合参数对水牛体细胞核移植效果的影响。体外成熟培养 22~24 h的水牛卵母细胞,在含有 5μg/mL细胞松弛素的操作液中进行去核,然后将经0 .1 mg/L Aphidicolin (APD)处理1 d, 再用0. 5% FBS培养2~9 d的水牛耳皮成纤维细胞或颗粒细胞注射到去核的卵母细胞卵周隙中,再经电融合形成重构胚。重构胚经 5μmol/L离子霉素激活处理5 min并在2 mmol/L的 6 DMAP中培养 3 h后,在含有颗粒细胞单层细胞的微滴中(30μL)培养7~9 d,观察其卵裂和胚胎发育情况。当电融合的电场强度为1 500 V·μs/mm(电压100 V/mm×脉时15μs)时,电脉冲3次,颗粒细胞核移植的融合率为 74.18%,分裂率为 71.82%,囊胚发育率为 10%,融合率显著高于2次电脉冲(52.03%,P<0. 05),卵裂率显著高于4次电脉冲(53.95%,P<0. 05);当电脉冲次数为 3 次时,电场强度为2 000 V·μs/mm的分裂率(53.54%)显著低于1 500 V·μs/mm,2 500 V·μs/mm的融合率(62.0%)和分裂率(53.23%)均显著低于1 500 V·μs/mm(P<0 .05)。采用耳皮成纤维细胞作供核的融合率(59.75%)和分裂率(57.45%)均显著低于颗粒细胞。染色体组型分析显示,66.7%的核移植胚胎具有正常的供体细胞二倍体核型。将来自1头22岁的摩拉公牛耳皮成纤维细胞的2枚冻胚移植给受体母牛,妊娠到215 d时发生流     

冻胚日龄对绵羊胚胎移植效果的影响

受体羊同期发情处理后 ,于发情后的第 4～ 7天 ,将冻胚随机移植给与其胚龄相同的受体羊有黄体侧的子宫角。 4日龄、5日龄、6日龄、7日龄冻胚的移植妊娠率分别为 62 5 % (15 / 2 4 、48 5 % (16/ 3 3 、42 8% (6/ 14 、3 8 7% (12 / 3 1) ,产羔率分别为 5 0 % (12 / 2 4)、45 5 % (5 / 3 3 )、42 9% (6/ 14 )、2 9 0 % (9/ 3 1)。 4日龄、5日龄与其它日龄妊娠率间差异极显著(P <0 0 1) ;羔羊初生重各日龄间差异不显著 (P >0 0 5 )。     

牛卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵泡大小、卵泡液和卵丘细胞对牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明 :直径 2～ 6mm卵泡中的卵母细胞成熟率 ( 72 1%)最高 ,与直径小于 2mm( 5 8 4%)、6～ 8mm( 5 6 4%)及大于 8mm ( 3 5 0 %)卵泡中的卵母细胞组差异显著 ;成熟培养基中添加 10 %的新鲜牛卵泡液 (bFF)对牛卵母细胞的体外成熟有促进作用 ,但高浓度的bFF( 2 0 %、3 0 %)则抑制牛卵母细胞的体外成熟 ;卵丘 -卵母细胞复合体的质量影响卵母细胞的体外成熟 ,A、B、C三级卵母细胞成熟率分别为 86 1%、66 3 %、3 5 6%,卵裂率分别为 42 8%、3 1 9%、10 5 %,差异均显著 (P <0 0 5 )。     

延边黄牛卵母细胞激活及孤雌发育

探讨了提高延边黄牛卵母细胞激活率及孤雌发育率的适宜方法。从屠宰场回收的卵巢中采集未成熟的卵母细胞 ,置于体外成熟培养液中 ,体外成熟培养 2 0～ 2 2 h。将体外成熟的卵母细胞 ,分别用不同浓度的乙醇或 Ca- ionophore进行单一激活处理。试验结果表明 ,用 5 %、7%、9%、1 1 %及 1 3 %乙醇激活卵子 ,激活率分别为 4 1 .2 %、4 7.2 %、5 3 .1 %、3 9.7%及 2 3 .4 %,7%和 9%乙醇处理组的卵子激活率显著高于其他组 (P<0 .0 5 ) ,但二者之间差异不显著 (P>0 .0 5 )。用 2 .5、5 .0、7.5μm ol/L Ca- ionophore激活卵子 ,激活率分别为 2 9.3 %、5 1 .8%、4 5 .4 %,5 .0、7.5μmol/L Ca- ionophore处理组的卵子激活率显著高于 2 .5 μmol/L 组 (P<0 .0 5 )。用 9%乙醇或 5 .0 μm ol/L Ca- ionophore分别与 1 0 m g/Lcyclohexim ide(CH)组合激活卵子 ,卵子的激活率分别为 77.3 %和 76 .8%,比单独用 9%乙醇 (48.8%)或 5 .0μmol/LCa- ionophore(43 .2 %)的激活率显著提高 (P<0 .0 5 ) ,二者卵子的卵裂率和发育到 8细胞期的孤雌发育率均无显著差异     

不同电融合参数及融合液对昆明小鼠2-细胞胚胎融合及囊胚率的影响

四倍体胚胎在研究哺乳动物配子发生、发育、四倍体的发生、遗传、免疫机制等方面具有重要作用,因此提高融合及发育效率至关重要。为找出适合小鼠2-细胞胚胎融合的最佳方案,试验采用两种融合液0.3mol/L甘露醇溶液和0.3mol/L蔗糖溶液,两种融合液均采用了120V/mm,20μs×2、100V/mm,40μs×2、80V/mm,80μs×2三种电融合参数。其中采用0.3mol/L甘露醇溶液作为融合液且融合参数采用80V/mm,80μs×2获得了92.5%的融合率和90.6%的囊胚率,是小鼠2-细胞胚胎融合的最佳方案。     

培养介质、卵丘细胞和卵泡直径对猪卵母细胞体外成熟的影响

A类卵母细胞在mTCM 199、NCSU2 3和NCSU37体系中培养 4 4～ 5 2小时后 ,成熟率分别为 76 .1%、78.1%和 6 5 .2 %。前两者差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,但显著高于后者 (P <0 .0 5 )。卵母细胞在添加eCG和hCG的NCSU2 3体系中的成熟率 (75 .6 % )明显高于添加FSH的LH和成熟率 (6 5 .2 % ) (P <0 .0 5 )。A、B、C三类卵母细胞在NCSU2 3的成熟率分别为 73.3%、6 0 .4 %和 11.0 % ,三者间差异显著 (P <0 .0 5 )。大 (ф >6mm)、中 (ф =3～ 6mm)和小 (ф <3mm)三种卵泡中的卵母细胞在NCSU2 3中培养后 ,成熟率分别为 5 6 .2 % ,78.1%和 5 1.9% ,中等卵泡中卵母胞的体外成熟率显著高于其他两组 (P <0 .0 5 )。     

国产克洛素隆驱除山羊肝片吸虫的临床试验

为了验证国产克洛素隆的抗肝片吸虫疗效 ,对 14 0只山羊自然病例 ,进行了临床疗效观察实验。结果表明 :单次用药治疗 2 1d后 ,克洛素隆具有明显的驱除肝片吸虫作用 ,其每 kg体重 6,4,2 mg组的精计驱虫率分别为 91.0 %、90 .7%和 60 .6% ,驱净率分别为 95 %、92 .5 %和 75 % ,粗计驱虫率分别为 9 7.2 %、95 .8%和 80 .6%。较阳性对照组均有极显著性差异 ( P<0 .0 1) ;每 kg体重 6mg和 4mg组与对照药物丙硫苯咪唑组精、净、粗驱虫率 ( 63 .3 %、80 %和 83 .3 % )比较分别有显著性差异 ( P <0 .0 5 )。克洛素隆的临床推荐剂量为 4m g/kg。     

不同品种或组合猪多产性研究

本文以 1 2个品种或组合猪为研究对象 ,收集了其 1胎、2胎及经产共 42 6 9窝产仔数和产活仔数的数据资料。纯种猪混合胎次窝产仔数以四川白猪Ⅰ系为最高 ,产仔数和产活仔数分别为 1 1 6 1头和 1 0 71头 ,本地猪、杜洛克猪和长白猪居中 ,分别为 1 0 86头和 1 0 0 6头、1 0 0 7头和 9 33头、9 85头和 9 2 6头 ,大白猪的产仔数和产活仔数最低 ,分别为 9 34头和 8 87头。二杂母猪的窝仔数以DL、DI、YI、DY较高 ,其产仔数和产活仔数分别为 1 1 4 9头和 1 0 80头、1 1 4 8头和 1 0 38头、1 1 36头和 1 0 4 5头、1 0 89头和 1 0 89头 ,YL、YB较低 ,分别为 1 0 2 7头和 9 6 5头、1 0 1 8头和 9 84头。二杂母猪产仔数和产活仔数的平均杂种优势率分别为 8 2 6 %和 9 4 1 % ,其中DL、DI、DY3个组合产仔数和产活仔数的平均杂种优势率分别为 1 1 1 4 %和 1 3 1 3% ,TI、YL、YB相应为 5 39%和 5 6 8%。     

四川省生猪生产面临良好市场机遇

今年以来 ,四川省生猪价格保持稳中有升的势头 ,但与全国其他省市相比 ,增长幅度较小。据全省 36个物价基点县调查结果表明 ,5月份仔猪、活猪、猪肉价格分别为 5 .6 6元 /千克、7 5 6元 /千克和 8.6 5元 /千克 ,同比分别增长 30 .1 1 %、7.2 9%和 6 .1 3% ;而当前仔猪、活猪、猪肉全国平均价格分别为 7.6 4元 /千克、5 .46元 /千克、9.5 6元 /千克 ,同比分别增长达 6 2 .80 %、1 5 .6 9 %、1 2 .82 % ,其价格分别比四川高出37 98%、1 9.74%和 1 0 .5 2 % ,特别是内蒙、新疆等地仔猪价格在 1 0元 /千克以上。价格上扬表明市场需求旺盛 ,四…     

大鼠成纤维细胞同步处理的流式细胞仪分析

目的 :研究 SD大鼠成纤维细胞同步处理后的各细胞周期的变化 ,探讨供体细胞的细胞周期对核移植胚胎发育的影响。方法 :分离培养 SD大鼠皮肤成纤维细胞 ,传 3～ 5代 ,分别经血清饥饿 2～ 6d和 1 0 mg/ ml nocodazole处理 2 4 h,流式细胞仪分析处理组和对照组的细胞周期百分比。结果 :血清饥饿、nocodazole处理及对照组的 G0 + G1期成纤维细胞的百分比 ( % )分别为 74.5± 4.4、49.5± 4.65和 5 0 .1 2± 3.9;G2 / M期细胞的百分比 ( % )分别为 :1 9.2 5± 4.2、2 5 .98± 2 .7及 45 .9± 5 .2 1。结论 :血清饥饿能较好地使大鼠成纤维细胞同步于 G0 和 G1期 ;nocodazole处理则使细胞较大程度同步于 G2 和 M期。     

免胚胎细胞核移植重组胚的发育力

以兔为模型 ,对影响胚胎细胞核移植重组胚发育力的电融合与激活参数、体外培养系统进行了探索性研究。结果表明 ,有利于重组胚发育力的适宜电融合与激活参数为 2 0 0 V/ m m的电场强度、10 0μs的脉冲宽度 ;在不同的体外培养系统中 ,TCM- 199培养液内于兔胎儿成纤维细胞饲养层 (REF feeder)上共同培养的重组胚获得了最高的 2～ 4-细胞发育率和桑椹胚或囊胚的发育率 ,分别为 6 5 .7%和 2 2 .9%;移植 111枚重组胚给 9只假孕母兔 ,其中 2只妊娠 ,1只完成足月妊娠产出 2只克隆仔兔 ,另 1只在妊娠 2 2 d流产 1只克隆死胎。     

应用1.8mol/L乙二醇+蔗糖冷冻保存奶牛胚胎

以 1 .8 mol/L乙二醇 0 .1 mol/L蔗糖 2 0 ?S-m PBS和 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖 2 0 ?S-m PBS对奶牛胚胎进行了冷冻保存试验 ,并与以 1 .4 mol/L丙三醇 2 0 ?S-m PBS常规冷冻保存奶牛胚胎效果进行了比较。冷冻程序为 -7℃平衡 5min后植冰 ,平衡 1 0 min,然后以 0 .3℃ /min的速率降至 -3 3℃ ,直接浸入液氮中保存。胚胎解冻后的培养结果 ,3组之间的胚胎存活率 ,分别为 80 .0 %( 1 6/2 0 )、90 .5%( 1 9/2 1 )、90 .0 %( 1 8/2 0 ) ,差异不显著 ( P>0 .0 5) ;胚胎的囊胚孵化率 ,1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖组达 81 .0 %( 1 7/2 1 ) ,极显著高于 1 .8mol/L乙二醇 0 .1 mol/L蔗糖组的 3 0 .0 %( 6/2 0 )和 1 .4mol/L丙三醇组的 2 5.0 %( 5/2 0 ) ( P<0 .0 1 )。 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖组冷冻的 A级胚胎和 B级胚胎之间的存活率差异不显著 ( P>0 .0 5) ,但是 A级胚胎的囊胚孵化率 ( 1 0 0 %,1 1 /1 1 )显著高于 B级胚胎( 60 %,6/1 0 ) ( P<0 .0 5)。另外 ,胚胎解冻后透明带断裂对其发育率无影响 ;冷冻前胚胎在 1 .8mol/L乙二醇 0 .0 5mol/L蔗糖液中平衡 1 0 min和平衡 2 0 min,冷冻解冻后培养发育率差异不显著 ( P>0 .0 5)。试验结果表明 ,应用 1 .8mol/L乙二醇 0 .0     

日本七鳃鳗肉的营养成分分析

对日本七鳃鳗肉中氨基酸及矿质元素进行了测定。结果表明 ;日本七鳃鳗肉富含多种氨基酸及矿质元素 ,所测的 1 6种氨基酸总和为 90 975 % ,8种必需氨基酸含量占氨基酸总量的 3 9 95 6% ,矿质元素K、Mg、Ca、Cu、Zn、Fe、Mn的含量分别为 9 5 41 6mg/g、0 95 72mg/g、0 3 80 9mg/g、0 0 0 5 4mg/g、0 1 2 5 8mg/g、0 4863mg/g、0 0 0 5 6mg/g。     

猪脾转移因子对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响

成年健康小鼠分别口服或注射不同剂量的转移因子 ( Transfer factor,TF) ,第 8d检测小鼠外周血中性粒细胞对葡萄球菌的吞噬率 ,第 1 1 d检测小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬率。结果表明 ,注射 TF的 、 、 组小鼠中性粒细胞吞噬率分别为( 38.5 6± 3.82 0 ,( 4 4.6 4± 2 .48) ,( 5 1 .0 7±3.84) ,而对照组的相应值为 ( 2 9.81± 2 .5 3) ;注射 TF的 、 、 组小鼠巨噬细胞吞噬率分别为 ( 5 8.0 4± 2 .1 9) ,( 6 7.8± 3.38) ,( 75 .82± 1 .73) ,对照组为 ( 4 6 .1 6± 1 .6 7) ;口服 TF的 、 、 组小鼠中性粒细胞吞噬率分别为 ( 4 0 .6 4± 4.85 ) ,( 5 3.45±5 .39) ,( 5 1 .0 7± 3.84) ,对照组为 ( 2 9.81±2 .5 3) ;口服 TF的 、 、 组小鼠巨噬细胞吞噬率分别为 ( 5 7.71± 2 .80 ) ,( 6 7.8±3.38) ,( 80 .39± 2 .30 ) ,对照组为 ( 4 6 .1 6±2 .6 8)。注射、口服 TF组小鼠脾脏重量与对照组比较 ,无明显差异 ( P >0 .0 5 )     

无应激敏感基因双肌臀大约克种猪的繁殖性能初报

经引种扩繁选育 ,育成无应激敏感基因 (RYR1基因 )双肌臀大约克猪公猪 1 8头 (6个血统 )、母猪 99头的育种群体。 36头后备公猪和 1 4 4头母猪校正到 1 0 0kg体重时的日龄分别为 1 61 4和 1 62 4d ;倒数 3～ 4腰椎处背膘厚、倒数 3～ 4肋骨处背膘厚分别为 1 6 4～ 1 6 5mm和 1 4 2～ 1 4 6mm ;选择指数分别为 1 2 6 82和 1 2 4 38。纯繁初产 91窝和经产 94窝平均总产仔分别为 1 0 2 4和 1 1 2 1头 ;产活仔数 9 68和 1 0 85头 ;初生窝重、 2 1日龄窝重 68 32和 69 2 4kg;35日龄育成仔数 9 93和 1 0 62头 ;窝重 1 1 7 91和 1 33 48kg ;育成率 94 5 %和 94 3 %。     

血管内皮生长因子对日本和牛胚胎卵裂率和4～8细胞期发育率的影响

为了探明血管内皮生长因子对IVM/IVF/IVC生产的日本和牛胚胎的卵裂率和到 4～ 8细胞期胚胎发育率的作用 ,在IVM/IVF/IVC的过程中 ,分别在SOF成熟液、BO液以及SOF培养液中添加 0、0 .1、1、10ng/ml的VEGF。通过对5 33个胚胎的检测得出 ,添加VEGF对胚胎卵裂率和 4～ 8细胞期发育率有促进作用 ,其卵裂率分别从对照的 4 7.3%提高到 5 1.4 % (0 .1ng/ml,P >0 .0 5 )、72 .6 0 % (1ng/ml,P <0 .0 5 )和 6 8.5 % (10ng/ml,P <0 .0 5 ) ;4～ 8细胞期发育率则分别从32 .0 %提高到 36 .4 %、5 9.7% (P <0 .0 5 )、5 2 .9%。结果证明 :VEGF对IVM/IVF/IVC的日本和牛胚胎发育有积极的促进作用。可以提高胚胎的卵裂率和 4～ 8细胞期胚胎发育率 ,这与作者前期从荷斯坦牛上得到的试验结果一致     

反相高效液相色谱法测定饲料中喹乙醇的含量

建立了反相高效液相色谱法测定饲料级喹乙醇、预混合饲料和配合饲料中喹乙醇含量的方法。色谱柱为C1 8,1 5 0× 4.6mm ,5 μm ;流动相为甲醇 +水 ( 1 5∶85 ,V/V) ;检测波长为 2 60nm ;柱温为室温。结果表明 :在 0～ 1 83.2 6μg/mL之间呈现良好的线性关系 ,相关系数r2 =1 .0 ;3个不同浓度样品加样回收率分别为 96.1 4%、98.61 %和 99.42 %。本方法简便 ,快速 ,准确度和精密度较高 ,适用于饲料中喹乙醇含量的测定     

江滩地区耕牛血吸虫病季节性感染规律的研究

目的 :为了解江滩地区耕牛血吸虫病季节性感染规律。方法 :随机选择黄牛和水牛各 5 0头为研究对象 ,分别于 2 0 0 3年 3、5、7、9、1 1月和次年 1月中旬重复调查感染情况 ,对每次粪检阳性者均给予化疗。于同年 4月和1 1月分别用 GPS法对有螺滩地进行定位随机抽样调查钉螺。结果 :3、5、7、9、1 1月和次年 1月牛的感染率分别为1 1 .76 %、1 .6 5 %、9.76 %、2 0 .4 7%、1 9.84 %和 1 7.97% ;4月和 1 1月钉螺感染率、感染性钉螺密度分别为 3 .1 9%、1 .5 4只 /4m2 和 7.2 2 %、1 .6 4只 /4m2 。结论 :秋季为耕牛血吸虫病感染的高峰季节     

在成熟过程中添加牛血清和猪卵泡液对猪卵母细胞核成熟及体外受精后早期胚胎发育的影响

研究目的在于探讨在成熟过程中添加牛血清和猪卵泡液对猪卵母细胞核成熟、卵丘细胞扩散及体外受精后早期胚胎发育的影响。卵母细胞·卵丘细胞复合体在含FSH和LH的以下处理组的成熟液中成熟培养 2 3～ 2 4h :(1)对照组-改良TCM - 199+0 .1%PVA ;(2 )试验组 1-改良TCM - 199+10 %新生牛血清 ;(3)试验组 2 -改良TCM - 199+10 %猪卵泡液 ,再移至无FSH和LH的不同处理组的成熟液中成熟培养 2 3～ 34h。试验 1中 ,卵母细胞在 4 6～ 4 8h成熟培养后 ,观察卵丘细胞扩散情况 ,并对卵母细胞进行固定和染色 ,鉴定卵母细胞减数分裂情况 :试验 2中 ,对在不同处理组的成熟液中成熟培养 4 6～ 4 8h的卵母细胞进行体外受精 ,再培养 8d。受精后第 2天检查分裂率、第 6天检查桑椹胚 /囊胚率、第 8天检查囊胚率。 4 6～ 4 8h成熟培养后试验组 1和试验组 2的大部分卵母细胞 -卵丘细胞复合体的卵丘细胞完全扩散 ,而对照组的卵丘细胞只有 5 0 %扩散。试验组 1和试验组 2的卵母细胞核成熟率分别为 39.9% (77/ 193)和 4 4 .3% (93/ 2 10 ) ,与对照组的卵母细胞核成熟率 4 8.1% (99/ 2 0 6 )相比没有显著差异 (P <0 .0 5 )。卵母细胞分裂率试验组 1(5 0 .0± 1.8) %和试验组 2 (49.9± 2 .6 ) %与对照组的卵母细胞分裂率 (49.0± 2     

烟曲霉菌灭活疫苗免疫剂量与免疫力的关系

5组雏鸡均于 1日龄滴鼻接种相同剂量烟曲霉菌丝灭活疫苗 ,1 0日龄分别肌肉注射烟曲霉菌丝福氏完全佐剂灭活疫苗 0 .1、0 .3、0 .5、0 .7和 0 .9ml。第 1 2 d攻毒感染烟曲霉菌孢子 (5×1 0 9孢子 /只 ) ,测定各组雏鸡免疫保护率、生长发育及肺脏与大脑烟曲霉菌分离率。结果表明低剂量免疫组 (第 1组 )与对照组基本一致 ;中剂量组 (第 2、3组 )能够介导产生血清抗体 ,有效地抵抗强毒株的攻击 ;高剂量疫苗 (第 4、5组 )免疫效果最好。 5组免疫鸡的血清抗体 OD值为 0 .37～ 0 .68,免疫保护率为 45%～ 90 % ,比对照鸡平均多增重 8.3～ 68.75g(36日龄 ) ,肺脏与大脑霉菌分离率分别为 52 .9%～ 1 0 0 %和 2 3.4%～ 44.4%。表明烟曲霉菌丝福氏完全佐剂灭活疫苗的最低免疫剂量为 0 .3ml(50 mg/ml)。