几种匍匐翦股颖品种植株再生的研究

以匍匐翦股颖Agrostis stolonifera潘娜1号、海滨和普特的成熟种子为外植体,进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。结果表明：在MS培养基上,以不同浓度2,4 D诱导潘娜1号、海滨和普特的愈伤组织时,普特的愈伤组织诱导率均高于潘娜1号和海滨。2 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为潘娜1号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合,3 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为45.2%、76.5%和87.0%;MSO(MS培养基的大量、微量元素和铁盐+B5培养基的有机元素)为最适合的分化培养基,分化率分别为50.0%、59.0%和57.6%。1/2 MS +1.0 mg/L IBA为生根培养基。     

2,4-D对匍匐翦股颖不同品种愈伤组织诱导和分化的影响

以匍匐翦股颖Penn A-1和Penn A-4为供试品种,就2,4-D不同浓度和作用时间对匍匐翦股颖愈伤组织诱导及分化的影响进行试验。结果表明,2mg/L的2,4-D对Penn A-1愈伤组织诱导效果最佳,出愈率为36.4%,4mg/L的2,4-D对Penn A-4的效果最佳,出愈率为82.4%;愈伤组织最佳分化时间为2,4-D作用0～30d时,Penn A-1和Penn A-4分化率分别保持在50%和83%;分化能力随2,4-D作用时间的增长而下降,而颗粒状、质地松散的愈伤组织最终将失去分化能力。     

匍匐翦股颖转化受体系统的建立(简报)

以回旋、潘那A-1、L-93三种匍匐翦股颖品种为材料,进行了离体再生培养和遗传转化的研究,建立了这些品种的胚性愈伤组织高频诱导与再生系统,确定了遗传转化过程中常用抗生素的临界浓度,并从外植体的选择、最适培养基及最佳分化时间等3个方面探讨了建立匍匐翦股颖转化受体系统的必要条件。     

贵州匍匐翦股颖新品种选育

贵州匍匐翦股颖是利用贵州野生匍匐翦股颖资源作亲本,采用系统选育法,经品比、区域、生产、耐旱性试验及良种繁育研究育成。该品种抗逆性强、适应性广、坪用性好,在贵州全年青绿,耐热抗旱性能明显优于对照Cato。适宜贵州海拔300m以上地区推广种植,同时适宜于亚热带到暖温带及相似气候地区推广种植,是建植高质量园林观赏类草坪以及高尔夫球场草坪的首选草种。     

2,3-BD多次诱导对匍匐翦股颖抗褐斑病的效果

试验研究了250μmol/L的2,3-BD分别进行1、2、3、4次诱导对匍匐翦股颖植株抗病性的影响,计算了各处理的病情指数、诱导效果并测定了抗病相关酶以及叶绿素和丙二醛(MDA)等的含量。结果表明:2,3-BD多次诱导能使匍匐翦股颖植株的抗病性提升,其中,2次诱导处理的病情指数最低,为24.60%、诱导效果最好,为65.05%,同时与其他处理相比,,2次诱导处理下的SOD、POD、CAT、PAL等酶的活性增加,始终高于对照且差异显著,MDA的积累量最低。综合分析2,3-BD能够提高匍匐翦股颖的抗病能力,且经过2次诱导处理的效果最佳。     

匍匐翦股颖和狗牙根原生质体融合研究

以匍匐翦股颖克罗米和狗牙根新农1号为材料，通过愈伤诱导、继代和悬浮培养，进而细胞融合来探讨草坪草品种改良的新方法。结果表明：（1）匍匐翦股颖和狗牙根原生质体融合时酶解液的最佳组合为：1．5％纤维素酶、0．1％果胶酶、0．7M甘露醇，10h酶解时间，且酶解前应用高渗溶液预处理效果更佳；（2）细胞融合时，原生质体密度2×10^5个／mL，融合剂由30％的PEG4000、15mmol／LCaCl2·2H20、0．5mmol／L KH2PO4·H2O、0．5mol／L甘露醇组成，并调pH至7．5效果较好；（3）匍匐翦股颖和狗牙根细胞PEG融合率约为5％，以30min融合时间效果较好，产生的多核融合体少，杂种细胞多呈条形，具有较强的活力。     

匍匐翦股颖和狗牙根原生质体融合研究

以匍匐翦股颖克罗米和狗牙根新农1号为材料,通过愈伤诱导、继代和悬浮培养,进而细胞融合来探讨草坪草品种改良的新方法.结果表明:(1)匍匐翦股颖和狗牙根原生质体融合时酶解液的最佳组合为:1.5%纤维素酶、0.1%果胶酶、0.7M甘露醇,10h酶解时间,且酶解前应用高渗溶液预处理效果更佳;(2)细胞融合时,原生质体密度2×106个/mL,融合剂由30%的PEG4000、15mmol/L CaCl2·2H2O、0.5mmol/L KH2PO4·H2O、0.5mol/L甘露醇组成,并调pH至7.5效果较好;(3)匍匐翦股颖和狗牙根细胞PEG融合率约为5%,以30min融合时间效果较好,产生的多核融合体少,杂种细胞多呈条形,具有较强的活力.     

贵州野生匍匐翦股颖结实特性研究

观察了匍匐翦股颖的结实特性.在田间栽培条件下,匍匐翦股颖一般5月初开始抽穗,7月初结束;5月中旬开始开花,7月底结束.群体抽穗的时间不集中(58 d),开花时间也不集中(72 d).自交结实性差,不同时期的群体抽穗率和开花百分率不同.结实率与群体抽穗率,群体开花率均为正相关.探讨了结实率低下的原因,主要与生态因素结实花在穗上分布部位以及单株间结实性不一致相关.     

贵州野生匍匐翦股颖抗旱耐热性评价

于2008年7月,以贵州省内采集的5份野生匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera L.),以及对照Putter为材料,研究其在干热胁迫过程中的形态变化,测定叶绿素总含量、叶绿素a含量、叶绿素b含量、游离脯氨酸含量和相对电导率5个生理指标,根据隶属(反隶属)函数法,采用这5个指标对野生匍匐翦股颖资源及对照Putter进行抗旱耐热性综合评价。结果表明:材料及对照抗旱耐热能力依次为:材料4>材料2>材料1>材料3>Putter>材料5。试验研究结果将为抗旱耐热型匍匐翦股颖新品种筛选提供理论依据。     

高羊茅愈伤组织诱导及植株再生的研究

对高羊茅Festuca arundinacea4个品种的成熟种子进行了愈伤组织诱导及植株再生的研究,建立了高羊茅的组织培养体系。结果表明:1)外植体种子的消毒程序以“次氯酸钠(活性氯≥5%)1 h 无菌水搅拌去皮”最佳;2)4个高羊茅品种以“千年盛世”在愈伤诱导中优势最突出;3)“千年盛世”愈伤诱导的适宜培养基为:MS 9 mg/L 2,4-D 300 mg/L水解酪蛋白;4)愈伤组织再生培养基中6-BA的适宜浓度为0.05 mg/L,KT的适宜浓度为0.2 mg/L。     

假俭草侧芽愈伤诱导和植株再生

以中国优良品系Ｅ １２６假俭草的侧芽为外植体建立高效的再生体系。试验结果显示,１）适宜于侧芽生长的培养基为ＭＳ＋ＢＡＰ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ ｍｇ／Ｌ;２）在最佳诱导培养基ＭＳ＋２,４ Ｄ１．０ ｍｇ／Ｌ＋ＢＡＰ０．１ ｍｇ／Ｌ上,侧芽愈伤诱导率达９３％。较强的光照能提高愈伤组织的诱导率;３）在最佳分化培养基ＭＳ＋ＫＴ２．０ｍｇ／Ｌ 上,绿苗分化率为１２．６％;４）试管苗最佳生长培养基为ＭＳ＋ＢＡＰ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．８ ｍｇ／Ｌ;５）在最佳生根培养基ＭＳ＋ＮＡＡ０．６ｍｇ／Ｌ 上,试管苗的生根率达９８％,植株移栽成活率为９４％。本试验为假俭草体细胞筛选和遗传转化提供依据。     

日本矮生沿阶草愈伤组织的诱导及其分化

选用不同外植体和不同培养基,对日本矮生沿阶草Ophiopogon japonicus进行了愈伤组织的诱导及分化的研究.结果表明:幼嫩叶片的基部是最适宜诱导愈伤组织的外植体.G3(MS+KT 0.2 mg/L +2,4-D 0.1 mg/L)培养基的愈伤组织的诱导率达到89%以上,将诱导的愈伤组织置于J1(MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L)培养基中的愈伤组织的分化率最高,达到59%.因此,选用幼嫩的叶片基部置于G3培养基进行诱导,继代一次后置于J1培养基进行分化是最有利于再生的途径.     

农杆菌介导的Lyz-GFP基因对匍匐翦股颖Peen A-1 转化和表达的研究

 以匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１成熟胚为供试材料,建立了其植株高效再生体系。利用农杆菌介导法将溶菌酶与绿色荧光蛋白Ｌｙｚ-ＧＦＰ双元基因转入匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１ 胚性愈伤组织中,经培养获得抗病转基因植株。并对Ｌｙｚ-ＧＦＰ双元基因转化ＰｅｎｎＡ-１的适宜条件进行了研究。研究结果表明,在２．０ｍｇ／Ｌ２,４ Ｄ＋０．１ ｍｇ／Ｌ６-ＢＡ的ＭＳ培养基上ＰｅｎｎＡ-１愈伤组织诱导率最高,可达３６％,且质量最好。愈伤组织在ＭＳＯ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ 上分化率最高,达４２．５％;浓度为３００ｍｇ／Ｌ 的头孢霉素（Ｃｅｆ）可抑制农杆菌ＬＢＡ４４０４的生长;ＰｅｎｎＡ-１胚性愈伤组织经携有ｐＢＩ１２１-Ｌｙｚ-ＧＦＰ的农杆菌ＬＢＡ４４０４ （ＯＤ６００值０．３～０．５）侵染１０～１５ｍｉｎ,共培养３ｄ后,转化愈伤组织生长状况良好,转化率达１２．５％,且在后期的生长和转化苗的再生中有良好的表现,转化苗再生率为２７．５％;转化植株有较强的荧光表达量,并经ＰＣＲ 检测,获得的２株匍匐翦股颖ＰｅｎｎＡ-１转化植株中均扩增出７５０ｂｐ的目标基因片断。     

乙烯对匍匐翦股颖ISR抗病反应中AsA-GSH循环及胼胝质沉积的影响

以匍匐翦股颖品种“Penn-A4”为试验材料,侵染立枯丝核菌后,经丁二醇(BDO)诱导产生系统抗性(ISR),喷施不同浓度的乙烯合成抑制剂氯化钴(CoCl₂)和促进剂1-氨基环丙烷羧酸(ACC)后,检测抗坏血酸-谷胱甘肽(AsA-GSH)循环中抗坏血酸(AsA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量及相关酶活性的变化,并观察匍匐翦股颖ISR反应中胼胝质沉积的变化。结果表明,乙烯抑制剂处理下,匍匐翦股颖幼苗中AsA含量较低,抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性下降,大量GSH被催化还原为氧化型谷胱甘肽(GSSG),GSSG大量积累,同时谷胱甘肽还原酶(GR)活性较低,GSSG经GR少量还原为GSH。乙烯促进剂处理下,AsA含量较高,APX活性升高,GSSG在高活性GR作用下催化还原为GSH,使得GSH大量积累。因此在匍匐翦股颖ISR抗病反应中,高浓度乙烯促进AsA和GSH的大量积累,它们不仅参与了活性氧的代谢平衡,同时也作为信号分子在ISR抗病反应中起着重要作用。匍匐翦股颖感染褐斑病后,胼胝质主要沉积在厚壁细胞、韧皮部、木质部和表皮组织,其中厚壁细胞胼胝质沉积最多,表皮组织沉积最少。此外,胼胝质沉积面积在不同乙烯信号分子处理间存在差异,但随着处理时间的延长差异不显著。一定浓度的乙烯对ISR反应中胼胝质的沉积具有一定的影响,随着处理时间的延长显著增加,在100 μmol·L^-1ACC处理5 d后,胼胝质沉积总面积仅为9.916 mm²,处理10 d后升至最高,为38.396 mm²,但在病害侵染后期,胼胝质数量减少,在100 μmol·L^-1ACC处理15 d后,胼胝质沉积总面积降至20.052 mm²,反映了乙烯信号分子对胼胝质沉积的影响是一种短期效应,短期内可提高匍匐翦股颖植株抗病性,具有信号分子的短时效特点。研究结果为探清匍匐翦股颖ISR抗病响应中ET信号分子如何调控抗病生理特性提供了理论基础。     

长叶点地梅愈伤组织诱导和植株再生

以长叶点地梅（Androsace longifolia）的无菌实生苗的下胚轴和叶片为外植体,研究不同种类、不同浓度的激素组合培养对愈伤组织诱导、芽诱导和生根的影响。结果表明,诱导下胚轴基部愈伤组织的最佳培养基为MS+0.3 mg·L-1 6 BA+0.1 mg·L-1 NAA,诱导率达85%;诱导叶片愈伤的最佳培养基为MS+0.02 mg·L-1 NAA+0.3 mg·L-1 TDZ,诱导率为80%;下胚轴愈伤诱导芽的最佳培养基为MS+0.5 mg·L-1 6 BA+0.2 mg·L-1 NAA,分化率达92.5%;叶片愈伤诱导芽的最佳培养基为MS+1.0 mg·L-1 6 BA+0.2 mg·L-1 NAA,分化率达82.5%;最佳生根培养基为MS+1.0 mg·L-1 IBA,生根率达100%,移栽成活率达95%。     

多年生黑麦草愈伤组织诱导与芽分化的研究

对多年生黑麦草Lolium perenne的2个品种特拉华(Delaware)与尤文图斯(Juventus)进行了愈伤组织诱导以及芽分化的研究.结果表明,在种子和成熟胚2种外植体中,成熟胚的出愈率高,是较好的愈伤诱导材料.愈伤诱导培养基采用MS基本培养基,附加激素4 mg/L 2,4-D 0.025 mg/L 6-BA.特拉华和尤文图斯较适宜的芽分化培养基是MS基本培养基分别附加0.4 mg/L ZT 0.3 mg/L NAA和0.2 mg/L ZT 0.5 mg/L NAA.特拉华在愈伤诱导和芽分化两方面均优于尤文图斯.