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将鸭肿头出血症病毒(DSHDV)强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚,传3代,取第3代尿囊液接种鸭胚成纤维细胞(DEF),传代培养至有细胞病变出现,并对接毒细胞进行TCID50动态检测和透射电镜观察。结果显示,第1代接毒细胞培养至120h出现变圆、脱落,并形成少量蚀斑,第2代培养至96~120h,DEF形成大量圆形或椭圆形的典型蚀斑,第3代培养至72~96h,DEF出现典型蚀斑;此后可稳定适应于DEF,典型细胞病变出现于72~96h。DSHDV在DEF上的TCID50值随传代次数的增加而增高,由第1代的10^2.72增加到第10代的10^6.82,最高毒价出现于96h,该点是收获病毒的最佳时间。经透射电镜观察,可见DSHDV粒子呈球形或椭圆形,大小为60~75nm,无囊膜,具有双层衣壳。结果证实,DSHDV强毒株已经适应了DEF,传代后可获得较高的病毒效价。 相似文献
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为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)体外培养的细胞系,开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞(DEF)适应性和增殖特性的研究。结果表明,NGVEV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传4代,取尿囊液接种DEF,第1代无明显细胞病变;第2代培养至72~96hDEF出现颗粒状缺失、脱落,但无典型蚀斑出现;第3代培养至96~120h,DEF形成大小不等、圆形或椭圆形的典型蚀斑;第5代以后的NGVEV可稳定适应于DEF,典型细胞病变出现于48~72h。取适应DEF的NGVEV感染DEF细胞后制作超薄切片经电镜观察,可见典型的腺病毒粒子,大小为70~90nm。NGVEV在DEF上的TCID5。值随着传代次数增加而增高,由第1代的10^1.23增加到第8代的10^8.02,最高毒价出现于96~144h,96~120h是收获病毒的最佳时间。 相似文献
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减蛋综合征病毒AA-2株适应体外培养的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
在分离并系统鉴定了减蛋综合症病毒AA-2株的基础上,进行了该毒株的体外培养试验,以寻求适应于细胞培养物中继代的细胞适应毒。结果表明,AA-2毒株可在鸭胚成纤维细胞(DEF)、鸭胚肾细胞(DEK)、鸭胚肝细胞(DEL)、鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸡胚肾细胞(CEK)和鸡胚肝细胞(CEL)上增殖和继代,并随着继代次数的增加,CPE潜伏期缩短,持续期延长,半数细胞感染量(TCID50)呈逐代增加趋势,血凝效价(HA)逐代稳步增强,至第15代之后,之些变化趋于稳定。证明用鸭胚细胞培养的AA-2株病毒在PK-15,BHK-21,SP2/0等细胞中增殖的迹象。还较为系统的测定了第19代DEF毒的其它特性。发现在接毒后120小时,HA及TCID50值最高,细胞适应毒对鸭胚致死率为10%,比原毒降低23%,理化特性与原毒一致,且仍保持原毒的抗原性。 相似文献
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为进一步了解Ⅰ群禽腺病毒鸭源分离株的致病性和生物学特性,采取接种鸡胚和鸭胚,攻毒SPF鸡和雏鸭,并应用鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肝细胞(CEL)培养观察细胞病变。试验结果表明,SPF鸡胚和鸭胚均出现死亡以及心包积液等典型症状,SPF鸡和雏鸭也引起不同程度死亡,且出现与临床送检病例类似的症状,PCR检测与序列分析证实分离的2株鸭源Ⅰ群禽腺病毒均为FadV-4血清型,病毒接种CEF细胞后没有细胞病变,而接种CEL细胞后则出现很强的聚集性、细胞变圆等典型病变。表明分离的鸭源FadV-4对SPF鸡和雏鸭均具有一定的致病性,对CEL细胞具有一定的适应性。 相似文献
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试用鸡胚法氏囊原代细胞传代、增殖鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV),均不同程度地产生特征性细胞病变效应。采用双抗体夹心法ELISA和细胞毒回归鸡试验证实,IBD-VH株组织毒适应于鸡胚法氏囊细胞,并随传代次数增加,病毒增殖能力增强;而在鸡胚成纤维细胞上盲传2代之后才开始出现细胞病变效应。比较了IBDV在鸡胚法氏囊细胞和鸡胚成纤维细胞上增殖能力的差异,讨论了培养基PH值、小牛血清浓度对鸡胚法氏囊细胞培养及病毒增殖的影响。 相似文献
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鸡病毒性关节炎病毒S1133株,在鸡胚成纤维细胞培养传代,至第6代后,细胞产毒效价明显提高,已达到了鸡培养的产毒水平。这为开发细胞培养工艺提供重要依据。 相似文献
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在羔羊传染性口膜炎病(Contagiousecthyma Virus)可感染的试验动物极少的情况下,我们用人肺二倍体细胞KMB17、鸡胚成纤维细胞、犊牛睾丸细胞培养病毒,在犊牛睾丸细胞上获得成功。病毒接种在犊牛睾丸细胞上,6代之前细胞病变不规律,6代之后细胞病变趋于稳定,48小时左右,病变可达到50%。培养至30代以后,细胞病变与30代之前不相同,30代之前细胞病变以同缩脱落为主,圆缩的细胞中可见块状颗粒,30代以后,除圆缩脱落外,还在细胞单层上形成空斑,细胞融合,病变细胞内的颗粒成致密状态。用犊牛睾丸细胞培养物免疫初生羔羊近6千只,免疫期在5个月以上。用人肺二倍体细胞,鸡胚成纤维细胞培养这株病毒,初代培养可出现明显的细胞病变,这种变化随继代次数的增加而减弱,当传至7、 8代时,细胞病变消失,以这两种培养物回归有易感性的羔羊,不引起发病。 相似文献
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鸭瘟灭活疫苗种毒筛选及生产用种毒种子批的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究通过鸭胚(DE)传代,建立了鸭瘟病毒(DPV)AV1221株的鸭胚适应毒.通过与其他2株DPV(AV1222株鸡胚毒和AV18株鸭胚毒)免疫原性、毒力等特性的比较,选择AV1221株DE2代鸭胚毒作为制苗用种毒,NJ株D5代鸭肝组织毒作为检验用强毒.使用鸭胚对AV1221株DE2毒进行了连续6次传代.对DE2代~DE7代冻干种毒的鉴定结果表明:未发现细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染;病毒含量为每0.2 mL含104.38~105.25ELD50;能够被DPV抗血清中和;制成灭活疫苗,免疫成鸭后均能够产生完全保护.依据试验结果建立了能够满足疫苗生产所需的生产用种毒的种子批. 相似文献
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将共表达NDVF和IBDVVP0基因重组鸡痘病毒(重组鸡痘病毒vFV282)接种10日龄~11日龄SPF鸡胚,连续传10代,分别对第5、8、10代传代毒进行病毒毒价测定和PCR鉴定;重组鸡痘病毒vFV282接种鸡胚成纤维细胞,分别对第1、5、10、15、20、25、30代传代毒进行病毒毒价测定和PCR鉴定;重组鸡痘病毒vFV282翅翼刺种于鸡体上,连续传8代,对第3、5、8代传代毒进行病毒毒价测定和PCR鉴定。结果表明,重组鸡痘病毒vFV282在SPF鸡胚上传10代、在SPF鸡胚成纤维细胞传30代、在鸡体传8代后,其毒力未返强,F基因和VP0基因未发生缺失和变异。 相似文献
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HVT国内株的分离鉴定 总被引:3,自引:0,他引:3
用来自国内某火鸡饲养场的健康火鸡血白细胞 ,接种于鸡胚成纤维细胞 ,分离到一株火鸡疱疹病毒的野毒—SY8_2。电镜下可观察到分离株SY8_2的鸡胚成纤维细胞培养物中存在典型的火鸡疱疹病毒粒子 ;分离株SY8_2的细胞培养物经卵黄囊途径接种 4日龄鸡胚 ,14天后在绒毛尿囊膜上形成痘斑 ;用分离物SY8_2细胞培养物接种 1日龄SPF雏鸡 ,感染雏鸡可产生病毒血症 ,并能从感染雏鸡的血液白细胞中重新分离到病毒 ;经 2个月的临床观察人工感染鸡无不良反应 ,剖检无任何病理解剖学变化 ;用HVT特异性单克隆抗体L78(3型 )做间接免疫荧光染色试验证实分离株SY8_2为MD血清 3型病毒—HVT。 相似文献
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将马立克病病毒(MDV)Z_4毒种感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)悬液(7×10~5PFU/ml)接种到支原体培养基中作盲传培养,连传3代,未见有支原体生长。经鸡胚接种试验,细胞培养试验和血清学试验证明,Z_4毒种没有受到所试12种外源病毒的污染。利用电镜技术检查Z_4感染的CEF超薄切片,除在细胞核中见到较多典型MDV病毒粒子外,在细胞核、细胞浆及细胞间隙均未发现有支原体和其它非目的病毒粒子。 相似文献
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鸭黄病毒病为近年来新发的鸭病,给养鸭业带来了极大的经济损失。为了深入研究本病的防制,本试验对鸭黄病毒(duck flavivirus,DFV)进行了分离鉴定。取疑似感染DFV的病鸭病料,经细菌分离初步排除细菌感染后,应用RT-PCR检测呈现DFV阳性,处理后将其接种到鸭胚成纤维细胞(DEF)和健康鸭胚上进行病毒分离传代。结果显示,在DEF细胞上第1代48 h就开始出现CPE,随着时间的延长CPE更加明显,通常在72~96 h产生典型CPE;接种鸭胚每一代均出现死亡,且死亡时间多集中于接种后60~72 h,死亡鸭胚胚体水肿、出血、发育不良、胚肝严重出血、肿胀或斑驳样坏死等病变。将病毒DEF细胞和鸭胚分离物应用血凝试验、毒价测定、病毒中和试验、RT-PCR及人工感染试验进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为DFV,并将其命名为DFV SDbz株。 相似文献
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鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养 总被引:4,自引:0,他引:4
将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒(DHV)A66株接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)进行细胞培养,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查,证明了(DHV)A66毒株能够在CEF上增殖。试验还表明,犊牛血清对DHV增殖具有明显的抑制作用。此外,还根据细胞培养物病毒滴度测定结果绘制出了病毒在CEF上的生长曲线。从生长曲线可以看出,接种后8~16h病毒开始增殖,36~60h细胞培养物中病毒滴度达最高水平。这与(DHV)A66死鸡胚的时间基本一致鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养@张小飞$安徽… 相似文献
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将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒(DHV)A66侏接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)进行细胞培养,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查,证明了DHVA66毒株能够在CEF上增殖。试验还表明,犊牛血清对DHV增殖具有明显的抑制作用。此外,还根据细胞培养物病毒滴度毒滴度测定结果绘制出了病毒在CEF上的生长曲线。 相似文献