小麦幼胚愈伤组织的遗传转化

将从水稻中提取的抗性调节转录因子OsDREB2.2基因,通过农杆菌介导进入小麦组织细胞内的方法,培育筛选稳定遗传的植株,使小麦中的一系列抗性基因得以表达,从而培育出抗逆性强的小麦新品种。采用河北农业大学自主培育的小麦新品种河农825、河农827、河农831等为试验材料,以各自幼胚为外植体,诱导的愈伤侵染农杆菌后,获得的抗性愈伤组织数平均为170.44、分化愈伤数平均为24.56、抗性芽与转化幼胚总数的比例平均为0.96%。表明本研究中采用的愈伤组织诱导、农杆菌侵染和植株再生条件是适宜的。     

小麦未熟胚离体培养的研究——愈伤组织发生及器官建成

对小麦胚离体培养过程中愈伤组织发生及器官的形态建成进行了解剖学观察。结果表明,胚龄对愈伤组织发生的起始部位有明显影响。胚的各个部位对离体培养反应的敏感程度随胚龄的增长盾片形成愈伤组织的能力而减弱,3周龄至成熟胚的盾片不能产生愈伤组织,只起分泌α-淀粉酶、转化、吸收和运转养分的作用。同时还观察到输导系统分化完善之前存在传递细胞。不定根及不定芽的分化和形成,既存在器官发生途径,也存在胚状体途径。根、芽原基形成的先后顺序并不固定。     

小麦幼胚愈伤组织诱导影响因素的研究

小麦幼胚愈伤组织是目前小麦遗传转化中最常用的转化受体系统。以小麦幼胚为外植体,对愈伤组织诱导中的不同基因型、基本培养基、激素、碳源进行了研究。结果表明,不同基因型材料、不同基本培养基的幼胚愈伤组织诱导存在明显差异,其中西农1376和小偃22两个基因型小麦的组培特性较好,MS培养基适于作为小麦幼胚愈伤组织诱导的基本培养基。在MSD培养基中加入1.0mg/LABA或0.2mg/L6-BA能明显改善愈伤组织的生长状态,并以ABA的效果更为显著。将MSD培养基中的蔗糖浓度从30g/L降为15g/L,同时加入15g/L山梨醇,可显著提高愈伤组织的质量。选择适宜的基因型和合理的培养基构成是改良小麦幼胚愈伤组织诱导效果的关键。     

小麦幼胚愈伤组织的诱导

为建立小麦(Triticum aestivum Linn.)幼胚的转化体系,获得转基因的小麦再生植株,对小麦幼胚进行愈伤组织诱导。以新春6号和新春9号小麦幼胚为试验材料,选择不同诱导培养基对幼胚进行愈伤组织诱导。结果表明,4种培养基诱导的愈伤组织质量和诱导率有明显的差异,其中MCIMA+KT高于其他3种培养基,新春6号和新春9号诱导率分别为53.80%和52.25%,愈伤组织的质量级别为A级,属于极适宜进行遗传转化状态。SD2培养基上诱导出的2个小麦品种愈伤组织分别为0.002%和0.59%,是不适宜进行遗传转化的培养基。新春6号和新春9号2个基因型诱导的愈伤组织数量和质量之间没有明显差异,适于进行遗传转化。     

小麦幼胚胚性愈伤组织诱导和再分化研究

以4个小麦品种的幼胚为外植体,通过脱分化和再分化培养,研究了影响小麦幼胚愈伤组织诱导和再分化的因素。结果表明:小麦幼胚胚性愈伤组织的诱导和再分化主要受基因型的限制,同时也受培养基组成的影响;培养基中添加0.5mg/L的ABA不利于胚性愈伤组织的诱导和分化;胚性愈伤组织诱导率和幼苗分化率之间呈极显著正相关,提高胚性愈伤组织的诱导率和形成量是建立小麦植株再生体系的关键。     

小麦幼胚愈伤组织辐照后代的遗传变异分析

以３个普通小麦品种为材料，用＾６０Ｃｏγ射线辐照小麦幼胚愈伤组织，在ＭＲ１、ＭＲ２代中才观察到广泛变异，其后代在育性、株高、抽穗期、千粒重、株型、蛋白质含量等方面者发生了明显变异，这些变异较单纯用组织培养得到的无性系的后代的变异频率更大，变异范围也更为广泛，并且从ＭＲ２中得到了几个有较高利用价值的变异株系。     

番木瓜胚性愈伤组织的诱导及体胚发生

以番木瓜的幼胚、下胚轴、叶片和子叶作为外植体,研究不同的激素配比、附加物以及培养方式和条件对胚性愈伤组织和体胚的诱导效果.结果表明,幼胚是胚性愈伤组织和体胚发生的好材料.幼胚最佳诱导培养基为:改良MS+10 mg·L-12,4-D+5 mg·L-1NAA+2 mg·L-1KT+0.5 mg·L-1 BA;最适合的增殖培...     

洋葱胚性愈伤组织的诱导及胚状体萌发的研究

以洋葱雄性不育系种子（10-8F）为材料,研究Picloram浓度对愈伤组织诱导及BA和2,4-D浓度配比对胚性愈伤组织诱导的影响,同时为探明胚状体发生的条件,研究了GA。和ABA对胚状体发生的影响。研究结果表明,洋葱愈伤组织在Picloram浓度为1mg／L时出愈率最高,达到72．3％;MS培养基中添加2mg／L BA和0．25mg／L2,4-D时促进胚性愈伤组织的诱导,诱导率（56．7％）显著高于其它处理;ABA浓度为0．5mg／L时胚状体萌发率（70．73％）最高且生长情况最好,但GA。对洋葱胚状体的萌发起抑制作用。     

玉米基因型与幼胚培养胚性愈伤组织发生能力的初步研究

实验通过对不同基因型玉米胚性愈伤组织诱导能力的比较,证实了玉米胚性愈伤组织发生主要受遗传控制。并从53份玉米材料中筛选出了11个胚性愈伤组织发生率较高的基因型,为基因工程等在玉米育种中的应用奠定了基础。同时初步探索了通过杂交方式转移胚性控制基因的可行性,获得了高诱导力杂交组合48-2×18(红)。     

四川小麦幼胚离体培养变异性及其性状的相关研究

本试验利用N6培养基，对四川省22个小麦推广品种幼胚离体培养变异性及其性状相关性进行了研究。结果表明：（1）推广品种间愈伤组织诱导率没有明显差异，极差仅6．25％；（2）X^2独立性测验揭示叶状体绿区化愈伤组织发生率受基因型极显著影响，变异于0．00－87．50％之间。植株再生率在基因型间存在极显著变异，变幅为0．00－90．63％；（3）方差分析揭示，基因型间每外植体胚胎愈伤组织上再生1．0cm以上的芽数，及其最长芽长度均存在极显著差异；（4）相关分析表明，愈伤组织诱导率与其余各性状间无明显关系。然而，叶状体绿区化愈伤组织发生率与植株再生率、每胚愈伤组织上再生芽数及其最长芽长度之间，植株再生率与每胚愈伤组织上再生芽数及其是长芽长度之间，每胚愈伤组织上再生芽数与其最长芽长度之间均存在极显著正相关关系。供试材料中，雅安早、大粒早、五一麦、,绵阳15在综合性状上表现为愈伤组织诱导率高，胚性化能力强、植株再生率高、克隆数多和生长旺盛的特点。     

小麦组织培养体细胞胚胎的次生胚状体发生研究

本研究首次通过幼胚和成熟胚培养，对小麦体细胞胚胎的次生胚状体发生潜力进行了探讨。结果表明，幼胚培养效益显著优于成熟胚，主要体现为成熟胚外植体存在严重的难以克服的微生物污染难题，其平均污染率达50％以上，而幼胚仅为0．97％。同时．叶状体化愈伤组织发生率和植株再生率．幼胚极显著高于成熟胚（P〈0．001）。对愈伤组织再分化培养物的组织学切片观察发现，成熟胚愈伤组织的细胞大、多呈长形或不规则形、胞质稀薄或空囊状、胞间排列松散，没有明显的分生组织区；而幼胚愈伤组织的细胞小、多圆形、胞质浓密、染色深、胞间排列紧密、具有明显的分生组织区，能分化形成体细胞胚胎，并且还发现材料“Fan-33”具有体细胞胚胎的次生体细胞胚胎发生潜力。这种优异的体细胞无性克隆特性，对优化小麦遗传转化系统，提高转基因工程效率具有重要意义。     

碳源对柑橘愈伤组织生长及体细胞胚胎发生能力的影响

为探讨继代多年的柑橘愈伤组织不能再生胚状体的原因,寻找碳源与柑橘愈伤组织体细胞胚胎发生之间的关系和选择柑橘愈伤组织快速生长的最佳碳源,本文就碳源对柑橘愈伤组织生长及体细胞胚胎发生能力的影响进行了探讨。结果表明:蔗糖和葡萄糖有利于柑橘愈伤组织生长,乳糖和甘油对柑橘愈伤组织的生长影响较小,而可溶性淀粉不利于柑橘愈伤组织的生长。不同碳源对具有体细胞胚胎发生能力的柑橘愈伤组织的影响各异,但对于失去再生能力的柑橘愈伤组织而言,不同碳源对其体细胞胚胎发生不起作用。     

玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

农杆菌介导玉米幼胚愈伤组织遗传转化体系的优化

以玉米骨干自交系‘郑58’的幼胚为材料,用农杆菌介导法对诱导培养出的胚性愈伤组织进行三价植物表达载体的遗传转化,同时对影响转化效率的主要因素进行研究.结果表明,当浸染液和共培养培养基中乙酰丁香酮(AS)的浓度为150mg·L-1时,抗性愈伤组织获得率显著提高17.39%;在菌液浓度D600为0.3、浸染时间为20min、共培养时间为60h、共培养温度为22℃、共培养培养基pH为5.4以及头孢霉素浓度为400mg·L-1的试验体系下,有利于提高玉米抗性愈伤组织的获得率,其获得率最高可达17.26%.     

商陆抗病毒蛋白基因导入玉米幼胚愈伤组织研究初报

以87-1自交系,87-1×综3,郑22×87-1,郑22×HI(A×B)4个基因型的玉米幼胚愈伤组织为受体,利用基因枪介导法将商陆抗病毒蛋白(PAP)基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式导入玉米胚性愈伤组织,然后在含有25～40 mg@L-1G 418培养基上筛选愈伤组织并分化得到再生植株.PCR和Southern杂交结果表明,PAP基因已经转入由抗性愈伤组织再生出的玉米植株中.     

长期继代对棉花胚性愈伤组织体胚发生能力及再生植株变异的影响

植物细胞在离体培养时，再生频率和再生植株的质量与培养时间密切相关。为探讨棉花胚性愈伤组织长期继代的可行性和适宜的继代策略，以川棉239胚性愈伤组织为材料，观察其在继代过程中颜色、质地、生长速度和体胚发生能力的变化，体胚及再生植株畸形变异的发生频率。结果表明，通过在MSB＋ET0．1mg/L＋KNO31．9g/L和MSB＋KT0．1mg/L IAA0.1mg/L两种培养基上交替培养并结合选择性继代，川棉239体细胞胚胎发生能力虽然可保持较长时间，但随着继代时间的延长，再生能力却逐渐下降，畸形胚发生频率和再生植株不育率逐渐升高。棉花胚性愈伤组织的继代时间不宜超过1．5年。     

四川省常规小麦品种抗条锈基因推导初报

根据对已知毒性基因的26个不同毒性谱小麦条锈菌的反应，结合系谱分析，研究了四川省32个常规小麦品种所具有的抗条锈基因。结果表明，在已知的抗条锈基因中，Yr2所占比例最大，至少存在于川麦29等7个品种中，Yr9次之，存在于绵农5号等4个品种中，个别品种则具有YrA、Yr Sel或Yr 15，还有些品种可能具有未知的抗条锈基因或基因组合，但没有一个品种能够抵抗所有供试的26个条锈菌菌系，培育和推广具有有效抗条锈基因的新品种迫在眉睫。     

小麦幼胚体细胞无性系及其继代过程的微观结构观察

利用扫描电子显微镜,观察了由小麦“千斤早”和“小偃22”幼胚离体培养产生的体细胞胚性无性系继代过程中微观结构的变化,以及胚性无性系和非胚性无性系的结构差异。结果发现,小麦“千斤早”和“小偃22”的幼胚体细胞胚性无性系的微观结构存在较大差异,主要表现在体细胞之间的组织形式上,胚性无性系发生能力强的小麦具有较好的细胞组织形式,胚性无性系发生能力弱的小麦其体细胞组织形式也较差。随着继代次数的增加,体细胞胚性无性系在组织结构上趋于无序化,且这种无序化的进程也受到小麦基因型的影响:对于耐离体培养小麦,在经历多次继代后,组织的有序化程度仍然保持着较高的水平;对于胚性无性系产生频率低的小麦,不仅其早期培养过程中胚性细胞所占的比例较低,且组织间的有序性很快在有限的继代过程中趋于崩溃。     

四川小麦品种数量性状遗传多样性

本文对四川50年来推广面积60.7hm^2以上的40个小麦品种进行了数量性状遗传多样性探讨。方差分析表明品种间确实存在直实遗传差异，用8个主成分中代表92.2%变异的5个主成分计算了品种间遗传距离（GD），变异范围0.62-46.86，平均遗传距离14。根据遗传距离可将供试品种聚为5类，性状差异大的品种分别聚为不同的类，分析认为四川小麦品种间数量性状上的遗传差异大，遗传多样性丰富。