绵羊VEGF-B基因可变剪切体克隆与鉴定

为克隆绵羊血管内皮生长因子B(VEGF-B)基因,探寻该基因与毛囊发育及毛用性状形成的潜在关系,本文利用RT-PCR从小尾寒羊与新吉细毛羊皮肤组织克隆出VEGF-B基因mRNA并对不同组织中VEGF-B基因表达进行分析。扩增显示存在2条扩增条带,克隆测序发现均为VEGF-B基因,大小为978 bp和877 bp。分析发现片段中间部位缺失导致编码氨基酸序列改变,但并未破坏PDGF功能结构域,仅引起一端蛋白酶切位点改变。不同组织器官中两突变体表达检测发现具有组成型表达的特点。定量检测发现VEGF-B在肺脏和卵巢组织中较心脏组织表达升高,脾脏、肾脏与心脏表达持平。肠道、肝脏、脑及肌肉组织则表达降低。本研究成功克隆了绵羊VEGF-B基因并对其进行了系统的鉴定分析,为进一步研究绵羊VEGF家族功能奠定基础。     

绵羊VEGF-C基因可变剪切体克隆与序列分析

为克隆不同品种绵羊血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因,探寻该基因与绵羊毛囊发育及毛用性状形成的内在关系,本实验利用RT-PCR方法从小尾寒羊与新吉细毛羊皮肤组织克隆出VEGF-C基因mRNA并进行生物信息学分析。以皮肤组织cDNA为模板,RT-PCR扩增显示存在多个扩增条带,克隆测序结果发现所有条带均为VEGF-C基因序列。除最长片段为全长VEGF-C基因外,其他均为VEGF-C异构体,片段长度依次为1 318、1 298、1 197、890、732、604 bp。所有异构体均表现为序列中间部位的缺失,分析显示各异构体由不同类型的可变剪切方式组合加工产生。氨基酸分析发现大部分异构体造成移码突变,编码类VEGF-C蛋白小肽,推测可能参与VEGF-C蛋白成熟或功能调节。本研究首次证明VEGF-C基因在绵羊皮肤组织存在复杂的转录后加工过程,为进一步研究VEGF家族在绵羊皮肤组织中的功能奠定基础。     

我国首次证实绵羊生殖系统中存在抗菌肽

<正>新疆生产建设兵团农垦科学院的专家从绵羊生殖器官中分离出两种天然抗菌肽,这是国内外首次证实绵羊生殖系统中存在抗菌肽,同时抗菌肽在多种动物生殖道天然免疫防御方面起着重要作用。     

TMEM219基因可变剪切体相对表达量及其对鹿茸重量的影响

试验旨在研究TMEM219基因3种剪切体在不同重量鹿茸尖端的表达规律及TMEM219基因表达对鹿茸重量的影响,以期探究TMEM219基因对鹿茸生长发育的调控机理。利用实时荧光定量PCR技术对TMEM219基因及其3种剪切体在同一重量组鹿茸的不同组织及不同重量组鹿茸的同一组织mRNA的相对表达水平进行检测,同时测定并比较不同产茸量梅花鹿的血清中胰岛素生长因子1（IGF-1）和胰岛素样生长因子结合蛋白3（IGFBP-3）的浓度。结果表明,TMEM219基因的3种剪接体在梅花鹿鹿茸的间充质及前成软骨组织（RP）、过渡组织（TZ）及软骨组织（C）中均有表达,TMEM219-918基因相对表达量极显著高于TMEM219-1005与TMEM219-1960基因（P<0.01）,TMEM219-1005与TMEM219-1960基因相对表达量无显著差异（P>0.05）;高重量组TMEM219基因表达量显著高于低重量组（P<0.05）;同时,高重量组个体血清中IGF-1浓度显著高于低重量组个体（P<0.05）,而IGFBP-3浓度显著低于低重量组个体（P<0.05）。结果提示,TMEM219基因高表达可能会促进鹿茸的生长,增加鹿茸重量;推测其可能的机理是TMEM219竞争性结合IGFBP-3,减少与其结合的IGF-1,加强IGF-1与IGF-1R的亲和力,进而提高IGF-1对鹿茸生长的促进作用。TMEM219基因可能成为影响鹿茸生长发育的候选基因,为提高鹿茸生长提供理论基础。     

TMEM219基因可变剪切体相对表达量及其对鹿茸重量的影响

试验旨在研究TMEM219基因3种剪切体在不同重量鹿茸尖端的表达规律及TMEM219基因表达对鹿茸重量的影响,以期探究TMEM219基因对鹿茸生长发育的调控机理。利用实时荧光定量PCR技术对TMEM219基因及其3种剪切体在同一重量组鹿茸的不同组织及不同重量组鹿茸的同一组织mRNA的相对表达水平进行检测,同时测定并比较不同产茸量梅花鹿的血清中胰岛素生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的浓度。结果表明,TMEM219基因的3种剪接体在梅花鹿鹿茸的间充质及前成软骨组织(RP)、过渡组织(TZ)及软骨组织(C)中均有表达,TMEM219-918基因相对表达量极显著高于TMEM219-1005与TMEM219-1960基因(P0.01),TMEM219-1005与TMEM219-1960基因相对表达量无显著差异(P0.05);高重量组TMEM219基因表达量显著高于低重量组(P0.05);同时,高重量组个体血清中IGF-1浓度显著高于低重量组个体(P0.05),而IGFBP-3浓度显著低于低重量组个体(P0.05)。结果提示,TMEM219基因高表达可能会促进鹿茸的生长,增加鹿茸重量;推测其可能的机理是TMEM219竞争性结合IGFBP-3,减少与其结合的IGF-1,加强IGF-1与IGF-1R的亲和力,进而提高IGF-1对鹿茸生长的促进作用。TMEM219基因可能成为影响鹿茸生长发育的候选基因,为提高鹿茸生长提供理论基础。     

牦牛KLF8基因剪切体克隆及组织表达分析

为了阐明KLF8基因在牦牛不同组织中的表达水平,试验采用RT-PCR方法克隆KLF8基因剪切体序列,利用荧光定量PCR技术检测该基因在不同组织中的表达丰度。结果表明:获得牦牛KLF8基因剪切体序列长度为1 246 bp(Gen Bank登录号为KX964629),其中CDS为963 bp,编码320个氨基酸,与牛(登录号为XP_010820342.1)的氨基酸同源性达99.69%,无信号肽剪切位点和跨膜结构域,具有KLFs家族保守的锌指功能结构域;KLF8基因在牦牛的脂肪组织中存在高水平表达,极显著高于其他组织(P0.01)。     

猪TLR4基因可变剪接体的鉴定

为合理、有效地利用民猪资源进行抗病育种,本研究利用重叠延伸RT-PCR结合巢式PCR法扩增民猪TLR4基因,寻找可变剪接体;利用竞争性RT-PCR方法研究各可变剪接体的组织表达情况。获得了猪TLR4基因3个可变剪接体(其中2个是未见报道的),并且鉴定出一类特殊的剪接模式——外显子内部的部分片段被单独剪除,该类型在动物中尚属首次发现;组织表达分析表明3个可变剪接体普遍表达。TLR4基因存在着复杂的剪接机制,也暗示着其功能的复杂性。     

绵羊Myostatin基因shRNA慢病毒载体的构建与鉴定

针对绵羊Myostatin基因特异性序列,设计4对shRNA,并合成高表达载体。将干扰质粒和高表达载体瞬时共转染HEK293细胞,应用Real-time PCR鉴定干扰效率,将筛选到最有效的shRNA表达载体和pDONR221载体进行BP重组反应,以获得含干扰序列的入门载体。然后将含干扰序列的入门载体和慢病毒表达的目的载体pLenti6/BLOCK-iT-DEST进行LR重组反应,以获得含干扰序列的慢病毒表达载体。qPCR检测病毒物理滴度。结果本试验成功构建绵羊Myostatin基因RNAi慢病毒载体,病毒的滴度为：9.3×109 TU/mL。为研究Myostatin基因对肌肉生长的影响提供了稳定感染细胞载体。     

绵羊Y染色体基因鉴定及其与父系起源的研究进展

绵羊是世界上主要的畜种资源之一,也是较早被驯化的家养动物。从遗传学角度看,Y染色体基因标记为家畜的起源和多样性提供了重要信息,并对常染色体、X染色体及线粒体DNA的信息进行了重要的补充。由于Y染色体含有大量的重复序列,造成它的基因组测序和组装极其困难,目前尚没有完整的绵羊Y染色体序列。根据灵长类Y染色体测序的启示,国内外相关研究在绵羊上鉴定了一些Y染色体DNA片段和分子标记,为我们更好的理解绵羊的父系起源起到了很大的作用。本文主要对绵羊Y染色体雄性特异区基因的鉴定、YSNPs等遗传标记的筛选以及它们与绵羊父系遗传多样性及父系起源等方面的研究进行概述,为进一步对绵羊起源、家系判定等方面研究提供理论依据。     

绵羊的皮肤寄生虫病

侵袭绵羊的皮肤寄生虫,常常造成羊毛脱落或损伤,以及与产量有关的经济损失。有些寄生虫,它们本身作为病原是重要的,有的作为其它感染的传播媒介则更重要。刺激、脱毛和皮炎等一般临床症状,常见于许多外寄生虫侵袭。为了准确的诊断,需要做实验室检查。有些非寄生性疾病,例如皮肤沙蚤病或羊搔痒病,具有类似于寄生虫侵袭的行为特征和皮肤损害。尤其在冬季,脱毛对患病绵羊抗寒冷的应激有着严重的影响。     

内蒙古阿尔巴斯绒山羊与蒙古绵羊BMP2基因片段的克隆及该基因在绒山羊皮肤组织中的表达

从阿尔巴斯绒山羊及蒙古绵羊血中提取基因组DNA，PCR扩增绒山羊及蒙古绵羊的BMP2基因片段，克隆到pMD18－T载体，筛选阳性克隆提取质粒DNA测序，和GenBank数据库进行比对。结果山羊与蒙古绵羊BMP2基因片段在核苷酸水平的同源性达99％，与人、小鼠、牛的同源性分别为87％、85％、99％。将克隆得到的山羊及蒙古绵羊BMP2基因片段体外转录成用地高辛标记的RNA探针，利用原位杂交方法研究BMP2基因片段在绒山羊75d胎儿皮肤和成年羊10月皮肤组织中的表达情况，结果发现在75d胎儿皮肤的毛球部位有表达信号，成年羊在10月皮肤毛囊中没有表达信号，说明BMP2基因和绒山羊毛囊发育有关。     

MEI1基因可变剪切事件对蒙古马精子生成的调控作用

旨在探索发生可变剪切事件的MEI1基因对蒙古马精子生成的调控作用,实现利用分子调控技术提高马的精子数量和精液品质,有效提高繁殖效率,降低生产成本,加快遗传进展,促进种群繁衍.本研究以两岁蒙古马的睾丸支持细胞(SC)作为研究对象,构建未发生外显子跳跃(exon skip,ES)事件的MEI1-1-pIRES2-EGFP重...     

绵羊链球菌病分离与鉴定

沙湾县安集海镇某村几个养羊户的羊群相继发生了以高热、败血和胆囊肿大为主要特征的传染病.送检5份病料到本实验室要求确诊病因,经细菌学检验、动物实验、生化鉴定、结合了解到的流行病学特点、临床症状、剖检变化,诊断为绵羊链球菌病.并进行了药敏试验,根据药敏结果对已发病羊进行治疗,对假定健康羊群进行预防性治疗2～3天,结果第3天发病羊只病情好转,再没有出现新的病例.     

绵羊NYD-SP27基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

构建并筛选针对干扰绵羊NYD-SP27基因的shRNA慢病毒载体。使用RNAi Target Sequence Selector软件设计并合成针对绵羊NYD-SP27基因的4条shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及1条阴性对照序列(NC),分别将其连接到载体pLentiLox3.7(PLL3.7)中,得到4个shRNA干扰载体NYDSP27-shRNA及1条阴性对照载体NC-shRNA,同时将构建好的干扰载体及辅助质粒瞬时共转染至HEK-293FT细胞中,收集病毒液纯化后感染SP27-21细胞,48h后用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NYD-SP27相对表达量,将干扰效果最好的载体用于进一步的研究中。结果表明,构建了重组慢病毒干扰载体,并成功包装成干扰慢病毒NYDSP27-shRNA-LV以及用来感染BHK-SP27-21细胞,48h后用实时定量PCR筛选出高效干扰绵羊NYD-SP27的片段NYDSP27-shRNA-1。为进一步研究NYD-SP27基因表达下调对绵羊精子发育的影响奠定了基础。     

绵羊痘病毒的分离与鉴定

利用羔羊睾丸细胞、Marc-145、Vero细胞对病毒进行分离和培养,通过动物回归试验、组织病理学切片的观察、透射电镜观察、PCR鉴定等方法进行病毒的鉴定,并参照GenBank中绵羊痘病毒P32基因序列设计并合成1对特异性引物,成功地对分离株的P32基因进行克隆、测序,并与多株参考毒株进行同源性比对分析。结果显示:透射电镜下观察到典型的痘病毒粒子;动物回归试验中试验动物临床症状为典型的羊痘症状;组织病理学切片中观察到羊痘病毒嗜酸性包涵体;通过DNASTAR与参考毒株进行同源性比对,与参考株同源性为97.2%~99.5%。结果表明:该分离株为绵羊痘病毒,并命名为SPPV-NeiMengG2015。     

绵羊H-FABP基因不同组织表达差异研究

为了检测心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因在绵羊不同组织的表达差异,试验采用实时荧光定量PCR法检测绵羊H-FABP基因在不同组织中的表达情况。结果表明:H-FABP基因在不同的组织中表达量不同,由高到低依次为腿部半腱肌、背最长肌、心脏、肾脏、脾脏、十二指肠、肝脏、肺脏。     

绵羊全基因组ROH检测及候选基因鉴定

旨在利用长纯合片段(runs of homozygosity,ROH)信息评估不同绵羊群体的近交情况,并鉴定与绵羊经济性状相关的基因。本研究基于Illumina Ovine SNP50芯片对来自10个绵羊群体共440个个体进行全基因组ROH检测,统计ROH在不同绵羊群体中的数目、长度及频率,根据ROH计算基因组近交系数(F_(ROH)),并对高频ROH区域进行基因注释。结果,在10个绵羊群体中共检测到25 920个ROH片段,不同绵羊群体ROH的数目、长度、频率及分布存在明显差异。ROH平均数目的变化范围从10.17个(苏尼特羊)到95.99个(杜泊羊),平均长度的变化范围从2.04 Mb(四川藏羊)到4.71 Mb(罗布羊),平均F_(ROH)的变化范围从0.010(苏尼特羊)到0.172(杜泊羊)。引进品种的(杜泊羊和德美羊)平均F_(ROH)明显高于地方品种。在地方绵羊群体中,西藏藏羊(0.085)具有最高的平均F_(ROH)。在高频ROH区域鉴定到26个与绵羊经济性状相关的基因,如与生长发育相关的基因NCAPG、LCORL、PRKAA2、FAIM2和HYDIN,与脂肪代谢相关的基因LEPR、WNT10B和NCKAP5L,与肉质及胴体性状相关的基因CDIPT、CAPN3和FGF9。基于ROH评估的近交情况可为绵羊种群育种和保种提供参考依据,鉴定到的候选基因可以作为绵羊标记辅助选择重要的基因。     

BECN1基因在绵羊皮肤毛囊上表达的研究

BECN1基因是细胞自噬的启动基因之一。检测该基因在细毛羊不同发育时期皮肤毛囊上的表达规律,可为细毛羊皮肤毛囊发育是否存在细胞自噬提供参考。利用实时荧光定量、免疫组化及免疫印迹法对BECN1基因分别在细毛羊休止期、生长期、退行期皮肤毛囊上的定位和表达进行了研究。结果表明,BECN1基因在细毛羊各个时期皮肤毛囊的内根鞘、外根鞘以及毛母质中均有阳性表达,但以退行期最为显著;在细毛羊各个时期的毛囊中均检测到BECN1基因的转录与蛋白表达,均以退行期表达量最高,且显著高于休止期和生长期（P<0.05）,而生长期与休止期间的表达量无明显差异（P>0.05）。上述结果间接表明,细毛羊的毛囊周期中均存在细胞自噬现象,并以退行期最为明显。     

绵羊组织特异性长链非编码RNA的鉴定与功能分析

本研究通过对绵羊不同组织的转录组分析,获得了肌肉、皮肤、脂肪组织的特异性长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)集合,预测了其上下游10 kb/100 kb区域内的蛋白编码基因,并基于皮尔森系数建立了lncRNA-mRNA调控网络,同时通过AnimalQTLdb数据库对可能具有重要经济性状的lncRNA进行筛选。结果表明,共预测出36340条lncRNA,基于τ指数对其进行组织特异性筛选,鉴定到213条肌肉特异性lncRNA,467条皮肤组织特异性lncRNA,295条脂肪特异性lncRNA。这三种组织特异性lncRNA的上下游基因可能分别参与调控肌肉生长、表皮发育、脂肪合成等生物学过程。通过构建的lncRNA-mRNA互作网络发现了2个重要表达模块,分别与角质化和脂肪合成相关。QTL分析表明,有14个lncRNA可能作为绵羊肌肉与脂肪相关性状的候选lncRNA。研究结果为lncRNA在绵羊育种工作中的应用提供借鉴和参考。     

组织粘合剂与缝合对绵羊皮肤创的愈合过程的比较观察

氰基丙烯酸酯(Cyanoacrylate)粘合剂,具有快而强的粘合特性,已广泛的应用于人医外科手术。近年来,关于鼠、犬、牛和马应用粘合剂闭合皮肤创已有报道。氰基丙烯酸酯粘合剂是一种同系系列的有机单体,对湿润的活组织具有聚合迅速、粘合坚固的特性。氰基丙烯酸酯的许多单体由于聚合作用由液态向固态转化,这一过程是组织表面存在很少数量水分起催化作用而