猪细胞因子IL-2、IL-4和IFN—γ作为免疫增强剂和新型基因工程疫苗的研究

通过综述猪IL-2、IL-4和IFN-γ的基因结构、作为免疫佐剂和作为构建新型基因工程疫苗方面研究进展,以了解细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的相关研究成果。为细胞因子进行更深入的研究提供参考。     

PRRS病毒感染对猪细胞因子IL-2、IL-4和 IL-10mRNA转录的影响

通过构建猪细胞因子IL-2、IL-4和IL-10的缺失cDNA竞争分子，利用定量竞争PCR技术对猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒感染过程中细胞因子IL—2、IL—4和IL—10的mRNA进行转录水平变化的定量检测，研究PRRS病毒感染对猪细胞因子IL—2、IL-4和IL—10mRNA转录的影响。结果 表明猪Th1型细胞因子IL—2的mRNA转录水平分别在PRRS病毒感染后1d、28d和56d出现3个mRNA转录高峰；而Th2型细胞因子IL—4的mRNA转录水平在病毒感染后56d内，一直处于低水平，而后才逐渐升高；IL—10的mRNA转录水平在病毒感染后6d内，一直处于低水平状态，第6d后才逐渐上升，至42d到达高峰，而后下降，恢复正常。结果显示PRRS病毒感染可导致Th2型细胞因子IL-4和IL-10基因转录的抑制。     

中西药复合“新型免疫增强剂”对鸡新城疫疫苗免疫增强实验研究及机理探讨

由黄芪提取物、茯苓提取物及相关西药组成“新型免疫增强剂”，对其免疫增强作用和毒性进行了试验研究，并对增强机理作了初步探讨。结果表明：“新型免疫增强剂”可以作为疫苗的辅助成分纳入鸡的免疫程序中，以提高其免疫效价，延长免疫期。     

重组鸡IL-2作为传染性法氏囊病疫苗免疫增强剂对鸡细胞免疫水平的影响

传染性法氏囊病是危害养禽业的一种最为重要的疾病之一，经常造成鸡只的死亡，耐过鸡免疫抑制，以后疫苗接种免疫失败和产蛋率下降，造成严重的经济损失。传染性法氏囊病活苗免疫效果虽然较好，但保护期短，易引发感染和免疫抑制；灭活苗较安全，保护期长，但效果较差，应寻找一种免疫增强剂，     

甘草次酸脂质体体外对鸡IL-2、IL-4和IFN-γ mRNA表达的影响

为了研究甘草次酸脂质体(GAL)增强免疫的作用和分子机理.采用Primer Primier 5.0软件自行设计白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)3对引物.培养鸡外周血淋巴细胞,分别加入3种浓度的GAL、甘草次酸(GA)和空白脂质体(BL),另设LPS对照组,培养36 h后收集细胞,提取总RNA,然后对其进行反转录.用荧光定量PCR方法测定GAL对鸡外周血淋巴细胞IL-2、IL-4和IFN-γ的mRNA表达的影响.结果:在8.750 mg/L、2.188 mg/L、0.547 mg/L时,GAL促进外周血淋巴细胞3种细胞因子mRNA的转录能力显著强于GA和BL,且在8.750 mg/L时的作用最强.这可能是GAL增强机体免疫的分子机制之一.     

翁苋颗粒对鸡白痢IL-2和IFN-γ的影响

为了探讨翁苋颗粒对雏鸡感染鸡白痢后疗效及IL-2、IFN-γ的影响,采用腹腔注射鸡白痢沙门菌菌液的方法人工复制鸡白痢的病理模型,通过在饲料中添加一定比例的翁苋颗粒,于试验前、攻毒后、试验后各组随机取雏鸡抽取心血,分离血清检测雏鸡IL-2、IFN-γ的含量。结果翁苋颗粒高剂量组、阳性药物组对雏鸡白痢的治愈率、有效率最高。与空白组比较,模型组雏鸡IL-2的含量升高,差异极显著(P<0.01),IFN-γ的含量无显著性差异;与模型组比较,翁苋各组雏鸡IL-2的含量降低,差异极显著(P<0.01),IFN-γ的含量无显著性差异。表明翁苋颗粒能防治雏鸡白痢,其作用与促进雏鸡体液免疫水平,增强其非特异性免疫功能有关。     

梅山猪血液细胞因子水平的测定与分析

试验利用猪多细胞因子检测试剂盒（ProcartaImmunoassayKits）对35日龄梅山猪血液中部分重要细胞因子（IFN-α IFN-γ IL-2 IL-6 IL-10 IL-12 ）水平进行测定，分析梅山猪各细胞因子水平间的相互关系，并比较梅山猪和大白猪之间部分重要细胞因子水平的差异。结果表明：健康状态下梅山猪血液中IFN-α、IL-2的水平较高，而IFN-γ，IL-6、IL-10及IL-12水平相对较低；IL-2、IL-6、IL-10水平之间显著相关，存在密切的联系；梅山猪IL-10水平极显著高于大白猪（P〈0．01），而IL-6水平极显著低于大白猪（P〈0．01）。试验结果初步解释了地方品种梅山猪与引进品种大白猪抗病力差异的免疫学基础，并为今后梅山猪一般抗病力评价体系的建立和抗病育种工作提供一定的理论依据。     

鸡白细胞介素-2（IL-2）基因与真核表达质粒及禽类疫苗的免疫增强剂

内容介绍：本发明提供了一种鸡白细胞介素-2（IL-2）基因。本发明还提供一种含有IL-2基因的真核表达质粒，它以pC工作为真核表达载体，含有上述白IL-2基因的编码序列的重组载体。本发明还提供了一种禽类疫苗的免疫增强剂。它为上述真核表达质粒的水溶液。其浓度为1～20μg／μl；或为含有上述真核表达质粒在真核细胞或动物体内所表达的鸡白细胞介素-2蛋白。鸡白细胞介素-2蛋白所占重量比为1％～20％。     

中药复方对热刺激小鼠脾脏IFN-γ、IL-4含量的影响

用ELISA法测定了中药复方对热刺激小鼠脾脏IFN-γ和IL-4水平的影响。结果,高温对照组IFN-γ、IL-4和IL-4/IFN-γ上升,中药复方组IFN-γ从热刺激后第1天显著上升,第3天达高峰,第6天下降到常温对照组水平;IL-4在第1天显著下降,然后回升,第6天显著升高,第10天下降,接近常温对照组水平;IL-4/IFN-γ第1天显著降低,然后逐步回升。研究表明,热刺激会引起小鼠脾脏IFN-γ、IL-4水平的紊乱,中药复方有显著的调节作用,从而促进免疫功能的恢复。     

热应激后猪血清中IL-2、IFN-γ及TNF-α水平的动态变化

检测热应激后猪血清中的IL-2、IFN-γ及TNF-α水平,观察其变化规律.将12头体重基本一致的3月龄中国试验用小型猪随机分成高温试验组和常温对照组两组.高温试验组在人工气候仓内饲养,模拟夏季炎热气候,气温从26～39℃24 h循环变温,39℃时维持4 h;常温对照组在22℃下饲养.试验持续10 d,在热应激的第1、3、5、7、9天,39℃高温持续期结束的时刻采血,分离血清.用ELISA法检测各血清样品中IL-2、IFN-γ及TNF-α水平.结果显示：IL-2水平有所上升,且在热应激的第1天和第3天与常温对照组差异显著（P＜0.05）;IFN-γ水平有所下降,且在热应激的第3天和第5天与常温对照组差异显著（P＜0.05）;TNF-α水平有所上升,但与常温组比较差异不显著（P＞0.05）;热应激试验进行的10 d中,IL-2、IFN-γ及TNF-α水平变化有其共同特点,即随着试验的进行各细胞因子浓度都向常温对照组的正常值发展.本研究从细胞因子的角度验证了前人热应激抑制机体免疫机能的结论.     

中药复方对猪热应激时脾脏中IFN-γIL-4水平的影响

热应激是指当环境温度超过动物等热区中舒适区上限临界温度时,动物所产生的非特异性反应应答的总和[1]。猪热应激时,通过改变自身的各种生理和生化反应实现对高热环境的适应,必然会导致其生产性能、免疫功能的下降[2]。目前国内外对热应激的研究多集中在热休克蛋白(HSPs)上[3],     

猪白细胞介素-2,4作为猪圆环病毒灭活疫苗免疫增强剂对仔猪免疫效果的研究

为评价猪白细胞介素-2,4(PoIL-2,4)与猪圆环病毒灭活疫苗(PCV2灭活疫苗)联合免疫对仔猪免疫增强作用,本研究将60头三元杂交仔猪随机平均分成3组,试验组于14日龄和28日龄注射PCV2灭活疫苗0.5头份+"PoIL-2,4"0.1 mL,对照组接种PCV2灭活疫苗0.5头份,空白组注射等体积生理盐水。结果显示:试验组仔猪各免疫器官指数均比对照组有所提高,不同日龄淋巴细胞转化率均显著高于对照组,外周血白细胞数量和淋巴细胞数量显著增加,PCV2 ELISA抗体及中和抗体均极显著高于对照组,攻毒后其临床症状和病理变化未受到影响,抗体水平经历短暂下降后显著升高,血清和组织中均未检出PCV2。表明PCV2灭活疫苗与PoIL-2,4联合免疫可以提高仔猪对PCV2的细胞和体液免疫水平,有效阻止病毒在机体内的复制,改善仔猪的生长性能。     

猪全血中IFN-γ、IL-2、TNF-αTaqMan定量RT-PCR方法的建立及对猪瘟疫苗的免疫评价

为建立猪相关细胞因子的检测方法,本研究针对GenBank中猪IFN-γ、IL-2、TNF-α的基因设计特异性引物和荧光探针,建立了这3种细胞因子TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,建立的检测方法在101～109拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数R2均高达0.999。利用该方法对猪瘟(CSF)活疫苗进行细胞免疫评价,结果显示,CSF疫苗免疫组猪瘟病毒(CSFV)刺激细胞相对于空白对照细胞,IFN-γ、IL-2、TNF-αmRNA表达量在免疫后3 d～10 d之间均显著升高(p<0.05),而IFN-γ在14 d仍保持高水平表达;对照组CSFV刺激细胞和空白对照细胞的3种细胞因子表达量均无明显差异(p>0.05)。以上结果表明,该方法具有高度的特异性、敏感性和重复性,对不同疫苗的细胞免疫反应评价是可靠的。     

细胞因子IL-2和IL-4对病毒保护性抗原基因真核表达影响的研究

如何提高和改善疫苗的免疫效果是目前疫苗研究的热点,近年来许多研究发现与DNA疫苗联合应用的细胞因子可通过不同的环节调节和增强DNA疫苗免疫效应,白细胞介素作为免疫佐剂能协同DNA疫苗能取得较好的免疫效果。细胞因子是动物体内特异高效调控免疫细胞和协调免疫应答重要的信号分子,它主要包括淋巴毒素(LT)、肿瘤坏死因子(TNF)、干扰素(INF)、白细胞介素(IL,如IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-12)和集落刺激因子(GM-CSF)等。其中IL-2和IL-4对病毒保护性抗原基因真核表达影响的研究较多。主要综述了IL-2和IL-4作为免疫佐剂对病毒保护性抗原基因真核表达的影响,以期为更深入地进行IL-2和IL-4对DNA疫苗免疫增强作用的深入研究提供参考。     

表达猪圆环病毒2型ORF2和猪IFN-γ基因重组腺病毒的免疫保护作用

本研究以构建的猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2和猪IFN-γ重组腺病毒(简称rAd-OI)为免疫原免疫30日龄、母源抗体为阴性的三元杂商品仔猪.25头猪随机分为5组,每组5头.A组肌注免疫rAdOI 106.12 TCID50/头,B组肌注免疫rAd-OI 107.12TCID50/头,C组肌注免疫rAd-OI 1...     

新型兽用疫苗的研究现状和发展动向

中国加入WTO,将我国的经济贸易纳入国际化运行轨道,必然给我国带来很多机遇和挑战,国内的生物技术产业进入蓬勃发展的阶段,开发安全有效、方便价廉的食品疫苗成为可能.生物制品业随着免疫学理论及其相关技术的发展与突破,不断得到发展和提高.早期利用传统疫苗产品,并结合其它综合防制措施,某些动物传染病已在一些国家消灭,我国也消灭了牛瘟和牛肺疫.由于有些病原微生物所具的特殊性质,对开发常规的疫苗有更大的困难和更高的技术要求.     

猪囊尾蚴重组抗原和基因工程疫苗的研究进展

猪囊尾蚴病（Cysticercosis）是由猪带绦虫的幼虫囊尾蚴寄生于人或猪等而引起的人畜共患寄生虫病,是公认的世界经济病之一。严重威胁着人体健康,并给畜牧业造成重大经济损失,猪囊尾蚴病的免疫防治势在必行。然而在猪囊尾蚴病疫苗研究中,疫苗抗原的选择和来源一直困扰着兽医工作者。该文就近年来猪囊尾蚴病诊断重组抗原和基因工程疫苗的分子生物学研究进展进行了综述。     

猪支原体肺炎亚单位疫苗的免疫应答

利用分子克隆、定点突变以及重组表达技术获得猪肺炎支原体的主要免疫原蛋白p36、p46、p65和p97R1-Nrdf。设立以重组蛋白p36、p46和p65为试验Ⅰ组,以p36、p46、p65和p97R1-Nrdf为试验Ⅱ组,猪支原体疫苗安百克（M＋PAC）为试验Ⅲ组,PBS＋佐剂为空白对照组来免疫BALB/c小鼠。检测小鼠血清、肺脏以及经蛋白刺激脾淋巴细胞的猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4。结果显示,Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体水平极显著高于Ⅰ、Ⅲ组（P〈0.01）;Ⅱ组IFN-γ水平极显著高于Ⅲ组,而Ⅱ组与Ⅰ组、Ⅰ组与Ⅲ组的IFN-γ水平无显著差异（P〈0.05）;但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的IL-4水平差异不显著（P〈0.05）,但都极显著高于对照组（P〈0.01）;肺的检测结果中猪肺炎支原体抗体、IFN-γ和IL-4水平呈现一致性,都为Ⅱ组〉Ⅰ组〉Ⅲ组〉对照组;而经刺激脾淋巴细胞检测结果为Ⅱ组的猪肺炎支原体抗体和IFN-γ水平最高,而IL-4水平为Ⅲ组最高。由此可见,Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫途径,产生的猪支原体肺炎抗体水平最高;Ⅰ组亦能通过这2种免疫途径达到与Ⅲ组同样的免疫效果。     

PRRSV特异性肽对CSF、PRRS免疫猪IFN-γ、IL-10分泌的影响

应用PRRSV-GP5特异性肽刺激CSF、PRRS免疫猪外周血淋巴细胞,采用ELISA方法测定不同时间点淋巴细胞分泌IFN-γ及IL-10的水平,分析PRRSV-GP5特异性肽刺激后,淋巴细胞培养上清中细胞因子的变化规律。结果显示,CSFV高抗PRRSV低抗体组于PRRSV免疫14d,肽刺激组中IFN-γ水平显著高于对照组(P<0.05);其他组均差异不显著(P>0.05)。PRRSV免疫14d,细胞培养24,72h后加PRRSV-GP5肽刺激,各组中试验组与对照组相比IL-10水平明显降低(P<0.01);PRRSV免疫28d,各组中肽刺激组与空白组相比,IL-10水平均无显著性差异(P>0.05)。结果表明,PRRSV-GP5肽在PRRSV免疫早期可以促进IFN-γ的分泌,并抑制IL-10的产生,但在免疫后期对淋巴细胞分泌的调节作用还需进一步研究。