不同检测时间对原料乳中嗜冷菌检测结果的影响

[目的]为提高原料乳中嗜冷菌检测的准确性,制定更加合理的嗜冷菌检测标准流程。[方法]本试验根据《NY/T 1331—2007乳与乳制品中嗜冷菌、需氧芽孢及嗜热需氧芽孢数的测定》中的MPC中平板计数法对新疆地区10个不同养殖模式牧场,共计120份原料乳样品在不同检测时间下的嗜冷菌水平进行检测。[结果]在10-2和10-3两个稀释梯度下,3个不同模式牧场嗜冷菌检测结果均随着检测间隔时间的增加而增加,其中现代化牧场和传统牧场嗜冷菌即时检测结果与间隔12 h和24 h的检测结果均存在显著性差异（P<0.05）,养殖小区嗜冷菌即时检测和间隔24 h差异显著（P<0.05）,间隔12 h检测结果与即时检测和间隔24 h检测结果无显著差异（P>0.05）。[结论]检测间隔时间对原料乳中嗜冷菌检测结果存在影响,样品检测间隔时间越久,最终检测结果越大,导致最终结果不具有准确性和说服性。     

原料乳中嗜冷菌种类及嗜冷芽孢杆菌研究进展

嗜冷菌能在原料乳冷藏条件下生长,其分泌蛋白酶和脂肪酶降解牛乳中的蛋白和脂肪,导致牛乳变质。本文归纳了原料乳中嗜冷菌的种类,总结嗜冷芽孢杆菌的危害研究进展,重点包括嗜冷菌常见种型、危害特点、分泌的蛋白酶和脂肪酶。最后探讨了嗜冷芽孢杆菌的研究方向。     

原料乳中嗜冷菌数的检测方法的比较

通过使用标准平板计数法与3M细菌总数测试纸片法检测原料乳中嗜冷菌数的比较实验，确定3M细菌总数测试纸片法为快速、精确的检测嗜冷菌数的方法。     

原料乳中嗜冷菌计数及产脂肪酶特性的研究

从乳中分离出产脂肪酶活力较大的菌种，该菌种属革兰氏阴性短杆菌，在Rodamine B培养基中产生较大的荧光圈，即产酶活力较大。该菌种最佳生长温度为30℃左右，最佳生长pH值为7．0左右。根据菌落形态，菌体特征及生理生化反应特征分析结果，对其进行了初步鉴定。将该菌种接入产酶培养基中，对其产酶特性进行研究发现，其最佳产酶温度为30℃左右，最佳产酶pH值为7．0左右，产酶高峰出现在接入产酶培养基后24h左右，在确定最佳产酶条件后，对不同时间测得的酶活与菌数之间的关系进行了初步探讨。     

原料乳中尿素掺假快速检测方法的研究

针对目前市场上出现的原料奶中掺尿素的现状，研究了一种方法可以快速检测掺假乳中的尿素，利用简单的试纸即可检测出乳中尿素。本文研究了试纸的制作工艺，以及试纸的干扰性。结论：原料奶中Ca、Zn和Cu到了一定浓度会影响试纸显色，其余金属影响不大。     

原料乳中外源性β-内酰胺酶快速检测方法的建立

β-内酰胺酶是乳及乳制品中的非法添加物,卫生部已发布相关检测方法,但是方法耗时,不利于乳制品企业应用。本文采用间接测定原理,即利用β-内酰胺酶在原料乳中降解青霉素G(青霉素钠)的能力,建立了外源性β-内酰胺酶快速检测方法,并确定了该方法的检出限、重复性和抗干扰性能。结果显示:该方法的检出限为4IU/mL,10组平行性实验结果符合度为100%;阴性样品的掺假添加检测结果均为阴性,说明抗干扰性能好;对阳性结果的样品进行定量验证,验证结果均为阳性,说明准确度高,且普遍性较好,是一种适应用于原料乳收购过程的快速检测方法。     

大规模牧场生鲜乳中嗜冷菌的控制策略

嗜冷菌是指能够在7℃以及更低温度条件下生长繁殖的一类微生物总称。其产生和分泌的蛋白酶和脂肪酶十分耐热,会导致生鲜乳的物理和感官品质下降,影响货架期和保质期,因此本文从嗜冷菌的污染途径、检测方法、如何控制等几个方面进行阐述,希望对牧场有效控制生鲜乳中的嗜冷菌数量有所帮助。     

学生奶原料乳的质量检测与控制

概述了我国奶业的发展状况以及目前学生奶的研究现状；分析了学生奶原料乳业存在的不安全因素、污染来源和可能存在的质量问题；阐述了学生奶原料乳质量检测的内容、方法和要求，并提出了质量控制措施。     

原料乳三聚氰胺检测国标发布

10月15日,国家质检总局、国家标准化管理委员会批准发布了《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》国家标准,标准自发布之日起实施。     

原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法研究

全面分析和比较了目前原料乳及乳制品中三聚氰胺的检测方法,主要包括色谱检测法(高效液相色谱法、气相质谱法、液相色谱-串联质谱法)、光谱检测法(拉曼光谱法、近红外光谱法、荧光光谱法)以及免疫检测方法。     

酶联免疫法对生鲜乳中黄曲霉毒素M1的快速检测

采用酶联免疫法（ELISA）对生鲜乳中黄曲霉毒素M₁进行检测,对比了3个不同厂家的试剂盒检测结果。结果表明,在空白样品中添加浓度为0.5、1.0、2.5 μg/kg时,试剂盒的回收率在93.5%～103.5%。不同厂家的试剂盒测定结果重复性、精确度均较好,说明酶联免疫法能够有效检测生鲜乳中黄曲霉毒素M₁。     

快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的赖解旋酶恒温基因扩增方法的建立

建立赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）快速检测发酵乳中葡萄糖杆菌的方法。选择葡萄糖杆菌ITS基因序列（基因号为KF896260.1）为目的基因,设计特异性引物,并优化反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的添加量,建立最优反应体系。采用建立的HDA体系对多种菌株进行扩增和电泳检测,验证方法特异性,通过HDA法直接检测发酵乳中的葡萄糖杆菌,并确定其检出限。结果表明：采用HDA法检测发酵乳中葡萄糖杆菌,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32的适宜添加量分别为0.10 μg和5.0 μg,扩增产物与设计序列长度（309 bp）一致,特异性良好,检出限为4.3×101 CFU/g。该方法用于检测发酵乳中葡萄糖杆菌的灵敏度高、耗时短。     

牛乳中未变性乳清蛋白的快速检测方法研究

采用微滤法结合双缩脲比色法测定牛乳中未变性乳清蛋白含量，并测定该方法的准确度，精密度及回收率。标准曲线回归方程：y=0．0146x＋0．0093，R^2=0．9955，检测精密度为1．34％-2．12％，回收率为96．16％-109．15％，平均101．63％。本研究表明用双缩脲法快速测定牛乳中的未变性乳清蛋白操作简便，准确快速，可用于大批量样品的检测。     

Study on Colloidal Gold Immunochromatographic Assay for Rapid Detection of Estradiol in Milk

In order to develop a sensitive and specific method for the detection of estradiol residues (E₂) in milk, a colloidal gold immunochromatographic method was established. Colloidal gold particles were prepared by trisodium citrate reduction method and labeled with rabbit polyclonal antibodies (PcAb) by physical adsorption method. After optimization of reaction conditions such as the amount of coating antigen and labeled antibody to assemble test strip, the sensitivity, specificity, repeatability and accelerated preservation of the test strip were determined. The estrogen analogue cross reaction and milk matrix interference reaction were also measured. The results showed that the optimized concentration of E₂-OVA antigen was 2 mg/mL and the optimized antibody concentration was 20 μg/mL, visual detection limits of E₂ was 10 μg/L in PBS within 10 min. The cross reaction rate of this method with estriol was 40%, there were no negligible cross-reactivities with other estrogen compounds including estradiol valerate, estradiol benzoate, estrone, diethylstilbestrol, quinestrol, ethinyloestradiol and nonylphenol. Milk samples only needed two times diluted before analysis, and the results could judge by naked eye after 10 min with cut-off of 20 μg/L. The results demonstrated that the developed method was suitable for rapid on-site screening of E₂ residues in milk samples.     

牛奶中雌二醇胶体金试纸条快速检测技术研究

为了建立快速、敏感、特异的雌二醇（E₂）残留免疫检测方法,本研究应用胶体金免疫层析技术,研究制备一种快速检测牛奶中E₂的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,采用物理吸附法将E₂兔多克隆抗体偶联至胶体金,经过优化抗原包被量和多克隆抗体标记量等反应条件组装成检测试纸条,测定检测试纸的灵敏度、特异性、重复性和加速保存等参数,并对E₂类似物交叉反应和牛奶基质干扰反应进行了测定。结果表明,试纸条最优包被抗原浓度为2 mg/mL,抗体浓度为20 μg/mL。采用消线法判定结果,检测时间10 min,PBS缓冲液中E₂检测限为10 μg/L,该方法与雌三醇的交叉反应率为40%,与戊酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、雌酮、己烯雌酚、炔雌醚、乙炔雌二醇、壬基酚等类似物均无可见交叉反应,牛奶样品经2倍稀释消除基质干扰直接用于检测,该方法在牛奶样品中的判定值为20 μg/L。本研究建立的E₂胶体金试纸条使用简单方便,适合现场快速检测牛奶中E₂残留。     

Soleris微生物实时光电法与平板计数法测定生乳中菌落总数的比较研究

建立Soleris微生物实时光电检测法检测生乳中菌落总数的快速测定方法,并将该方法与国标的平板计数法进行比较。结果表明：Soleris法检测生乳中菌落总数的标准曲线为y=－0.651 5x＋8.263 9（y为菌落总数（lg（CFU/mL））,x为胶体栓变色时间（h））,相关系数R2=－0.939 6,表明标准曲线相关性良好;重复性实验结果的相对标准偏差均小于5%;Soleris法与平板计数法测定结果的比较表明,2 种方法之间没有显著性差异（P＞0.05）。在本研究的实验条件下,Soleris法检测生乳中     

发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立

建立依赖解旋酶恒温基因扩增（helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA）快速检测发酵乳中沙门氏菌方法。以沙门氏菌invA基因序列为目的基因,设计特异性引物,优化反应体系中UvrD解旋酶及T4 gp32添加量,建立最优反应体系。通过HDA方法直接检测发酵乳中沙门氏菌,扩增其产物后进行电泳检测,验证方法特异性。结果表明：采用HDA快速检测法检测发酵乳中沙门氏菌特异性良好,优化后反应体系体积50 μL时,UvrD解旋酶添加量为0.10 μg,T4 gp32添加量为5.0 μg,得到与设计序列长度（304 bp）一致的扩增产物,检出限为2.6×102 CFU/g;该方法用于快速检测发酵乳中沙门氏菌能够满足检测需求,具有较高的灵敏度、易操作,可作为一种基础且快速的方法检测发酵乳中沙门氏菌。     

牛奶中土霉素残留检测方法改进及临床消除规律探究

试验对牛奶中的土霉素残留检测方法进行了改进,并采用改进后的方法对牛奶中土霉素的临床消除情况进行了探究。样品前处理过程中,选取0.1mol/LNa₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取牛奶中的土霉素,正己烷除脂及HLB固相萃取柱净化浓缩。釆用Symmetry Shield RPC18(250mm×4.6mm,5μm)反相色谱柱,以乙腈和0.048%的磷酸溶液(pH2.5)为流动相,采用梯度洗脱的方式对样品进行分析。方法改进后,土霉素的出峰时间为6.5min,峰形尖锐,与样品中的杂质峰分离良好。土霉素标准溶液在5~2000μg/kg范围内线性关系良好,标准曲线R²=0.9999;牛奶中土霉素在10、20、100μg/kg3组浓度的加标回收率分别为87.9%、90.5%和87.8%,批内变异系数范围为2.2%~5.8%,批间变异系数范围为4.0%~5.1%。土霉素在牛奶中的检出限为5μg/kg,定量限为10μg/kg,适用于研究土霉素在牛奶中的残留消除规律。选取了29头产后患有子宫内膜炎的奶牛,分成4个不同剂量组(2、3、4和5g),通过子宫内灌注土霉素的方式进行治疗,然后采用优化后的方法检测牛奶中残留的土霉素。结果发现,4g及以下剂量组给药72h后,牛奶中的土霉素可以消除至残留限量以下;而当给药剂量达到5g时,72h后牛奶中的土霉素未消除至残留限量以下,因此不建议采用5g及以上剂量灌注病牛子宫。