SLT-Ⅱe对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响

志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)是猪水肿病(ED)的主要致病因子[1],已有研究表明,SLT-Ⅱe致病机制是通过对其靶细胞-肠黏膜微血管内皮细胞(IMMVECs)的刺激,引发细胞分泌细胞因子机能的改变,从而影响细胞的正常形态和功能而致病的.     

槲皮素对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响

通过检测槲皮素对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的浓度变化,探索中药复方主要成分槲皮素对仔猪水肿痛的疗效机制.将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱ e组、不同浓度槲皮素处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1及TNF-α浓度的变化.结果,10 mg/L槲皮素可下调SLT-Ⅱ e诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1及sICAM-1的分泌,12 h内使NO、ET-1及sICAM-1的分泌浓度接近正常水平;1、5、10 mg/L槲皮素不能下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞P-选凝素和TNF-α的分泌.结果表明,槲皮素通过抑制SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、sICAM-1的过量分泌,缓解肠道微循环障碍,减轻炎症反应,达到治疗水肿病的目的.     

中药方剂五苓散对SLT-2e影响大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的观察

将中药方剂五苓散和志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-2e)分别加入大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIM-VEC)培养板中培养1、3、6和9h,观察五苓散及其抗SLT-2e对RIMVEC分泌NO的影响。结果:普通中药组中10μL/mL五苓散浓度在1-9h内使NO浓度升高;治疗组五苓散浓度0.1μL/mL、1μL/mL、10μL/mL在9h时内皮细胞分泌NO差异不显著;预防组0.1μL/mL在1-6h时变化不明显,在9h时NO升高;1μL/mL、10μL/mL在6h时NO量分泌最高,9h时下降。提示一定量的五苓散可使RIMVEC的NO分泌量升高(P<0.05);治疗组五苓散使NO分泌量不升高,预防组五苓散可使内皮细胞分泌NO量升高(P<0.05)。     

SLT-2e对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌PGI2、TXA2和PAF的影响

志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-2e)又叫猪水肿病毒素,能引起仔猪水肿病,是仔猪水肿病的主要毒力因子[1~3]。SLT-2e作用于微血管能引起微血管内皮细胞损害而导致水肿,因此在猪水肿病的发生中起着决定性作用。M eth iyapun等[4]研究表明水肿病大肠杆菌对猪肠黏膜没有重要的病理变化,而靶细胞是微血管内皮细胞,表现为内皮细胞空泡化、血管周围水肿、微血栓形成等。为了研究微血管内皮细胞在仔猪水肿病发病机制中的作用,本试验应用原代培养的肠黏膜微血管内皮细胞研究了SLT-2e对其培养上清液中PG I2、TXA 2及PDF浓度的影响,旨在了解SLT-2e…     

黄芪多糖对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌细胞因子的影响

通过检测黄芪多糖对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素及sICAM-1的浓度变化,探索中药复方主要成分黄芪多糖对仔猪水肿病的疗效机制。将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱe组、不同浓度黄芪多糖处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素及sICAM-1浓度的变化。10 mg/L黄芪多糖可下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、TXA2及sICAM-1的分泌,12 h内使NO、ET-1、TXA2及sICAM-1的分泌浓度接近正常水平;5、10、15 mg/L黄芪多糖不能下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞PGI2及P-选凝素的分泌。黄芪多糖通过抑制SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1 TXA2及sICAM-1的过量分泌,缓解肠道微循环障碍,减轻局部炎症反应。     

SLT-2e对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌PG12、TXA2和PAF的影响

志贺样毒素Ⅱ型变异体（SL T-2e）又叫猪水肿病毒素，能引起仔猪水肿病，是仔猪水肿病的主要毒力因子。SLT-2e作用于微血管能引起微血管内皮细胞损害而导致水肿，因此在猪水肿病的发生中起着决定性作用。Methiyapun等研究表明水肿病大肠杆菌对猪肠黏膜没有重要的病理变化，而靶细胞是微血管内皮细胞，表现为内皮细胞空泡化、血管周围水肿、微血栓形成等。     

LPS对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响

一氧化氮（Nitric oxide，NO）是一种由血管内皮细胞分泌的内源性血管舒张因子。NO作为一种重要的信使分子具有舒张血管、神经传递以及杀灭微生物和肿瘤细胞等多种生物学功能。     

志贺样毒素Ⅱ型变异体对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌IL-8 IL-6和PGI2的影响

志贺样毒素Ⅱ型变异体[1](SLT-Ⅱe)是猪水肿病大肠杆菌导致仔猪形成水肿病的主要致病因子.研究证明,SLT-Ⅱe能损伤小肠上皮细胞和血管内皮细胞[2],引起细胞分泌功能障碍,进而导致微血管舒缩和通透性发生变化,最终形成猪水肿病.本试验通过研究SLT-Ⅱe作用大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(MVECs)后,其培养上清液中IL-8、IL-6和PGI2的浓度变化,以期从SLT-Ⅱe影响微血管内皮细胞分泌功能方面,探讨SLT-Ⅱe对大鼠肠黏膜MVECs的损伤机制.     

茯苓酸对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的影响

通过检测茯苓酸对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌P-选凝素、sICAM-1及TNF-α的浓度变化,探索茯苓主要成分茯苓酸对仔猪水肿病的疗效机制.将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱ e组、不同质量浓度茯苓酸处理组5个组,采用ELISA法测定了培养3,6,9,12 h细胞上清液中P-选凝素、sICAM-1及TNF-α浓度的变化.结果表明,不同质量浓度茯苓酸处理组对SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞过量分泌P-选凝素、TNF-α无明显的抑制作用;0 mg/L茯苓酸处理组对SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞sICAM-1的分泌具有明显的下调作用,使其分泌sICAM-1的浓度逐渐下降至正常水平.由此可见,茯苓酸通过抑制SLT-Ⅱ e诱导肠黏膜微血管内皮细胞sICAM-1的过量分泌,阻止白细胞与内皮细胞之间的牢固黏附,防止过度炎症反应对机体的损害,以达到治疗疾病的目的.茯苓酸保护大鼠肠黏膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量为10 mg/L.     

小檗碱对脂多糖致肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌的影响

小檗碱属于异喹啉类生物碱，也称黄连素，常用其盐酸盐，为毛莨科黄连属植物黄连、黄柏的根茎提取物的主要成分，临床上用于治疗菌痢、肠炎、急性扁桃体炎和急性支气管炎等多种疾患。关于小檗碱的抗炎机制目前尚不清楚。本试验采用体外细胞培养技术，观察了小檗碱对肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌的影响，以期从细胞水平探讨其抗炎机理。     

LLO对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO和ET-1的影响

为探讨李斯特菌溶血素(LLO)导致大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)损伤的作用机制,将体外培养的RIMVECs分为对照组和LLO组,观察细胞形态变化,测定细胞生长情况,并检测细胞培养上清液中NO、ET-1浓度变化。结果表明:LLO组RIMVECs的细胞间隙变大,有大量细胞碎片漂浮;当LLO浓度达到50ng/m L以上时,测得细胞增殖(OD值)均呈极显著下降(P0.01);12 h内,NO、ET-1分泌量高于正常水平。试验表明,LLO引起RIMVECs细胞因子NO、ET-1分泌量升高,导致细胞微环境紊乱,是LLO导致肠黏膜微血管内皮细胞损伤的机制之一。     

硫酸软骨素对LLO诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO、ET-1的影响

为研究李斯特菌溶血素(LLO)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)分泌NO、内皮素(ET-1)的影响,以及硫酸软骨素(CS)通过调节细胞微环境保护RIMVECs的作用,将体外培养的RIMVECs分为LLO+CS组、LLO组、CS组、空白组,经过MTT比色法测定细胞生长情况,硝酸还原酶法测定细胞上清液细胞因子NO含量以及酶联免疫法检测ET-1含量,并用原位杂交方法对结果进行验证。结果表明:LLO可抑制RIMVECs增殖活性,提高NO、ET-1分泌量且高于正常水平,并导致NO/ET-1比值失衡(下降);而CS可提高RIMVECs细胞的增殖活性,并显著上调NO/ET-1比值。由此可知,CS可通过改善LLO引起细胞因子NO和ET-1失衡而起到保护微血管内皮细胞的作用。     

SLT-Ⅱe对PIMVECs分泌炎症反应相关细胞因子的影响

本试验旨在探究大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型变异体（SLT-Ⅱe）处理后,猪小肠微血管内皮细胞（PIMVECs）分泌的肿瘤坏死因子α（TNF-ɑ）、P选择素（P-selectin）、一氧化氮（NO）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和内皮素（ET）水平的变化。采用超速离心法提取SLT-Ⅱe,采用BCA试剂盒测定其质量浓度,使用SDS-PAGE及Western blotting验证蛋白纯度;用WST-1法从0.1、0.5、1、5、10 μg/mL SLT-Ⅱe和0、2、4、8、12、24 h中筛选出SLT-Ⅱe对PIMVECs最佳作用浓度与时间;ELISA法检测对照组（0 μg/mL SLT-Ⅱe）和试验组（1 μg/mL SLT-Ⅱe）细胞上清中TNF-ɑ、P-selectin、NO、ICAM-1和ET含量的变化。结果表明：所提蛋白为SLT-Ⅱe,蛋白含量为721.75 μg/mL;1 μg/mL的SLT-Ⅱe作用8 h后可极显著降低PIMVECs的活性（P<0.01）;1 μg/mL的SLT-Ⅱe作用9和12 h时PIMVECs的TNF-ɑ分泌量显著升高（P<0.05）,NO/ET的值显著高于对照组（P<0.05）,作用6、9、12 h时P-selectin的含量显著升高（P<0.05）,作用12 h时的ICAM-1分泌量显著升高（P<0.05）。综上所述,SLT-Ⅱe浓度为1 μg/mL时可以诱导PIMVECs分泌的TNF-ɑ、P-selectin、ICAM-1以及NO/ET上升,为研究仔猪水肿病发病机制提供参考。     

葛根芩连汤对小鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖的影响

为了探讨葛根芩连汤水煎液对小鼠肠黏膜微血管内皮细胞(MIMVECs)的影响,试验采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)检测葛根芩连汤水煎液对体外培养的MIMVECs增殖的影响。结果表明:当葛根芩连汤水煎液在6.40×10~(-2)~1.00×10~3mg/m L时,抑制MIMVECs增长;在2.56×10~(-3)~1.28×10~(-2)mg/m L时,促进MIMVECs增长。说明葛根芩连汤水煎液在一定浓度下对MIMVECs既有促进增殖又有抑制增殖的作用。     

黄芪多糖对体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖的影响

研究黄芪多糖对体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞（rat intestinal mucosa microvascular endothelial cells,RIMMVECs）增殖的影响。应用不同浓度的黄芪多糖作用于体外培养的RIMMVECs。通过MTT法检测黄芪多糖对RIMMVECs增殖的影响。不同浓度的黄芪多糖对细胞增殖的影响不同:黄芪多糖浓度在25～800 mg/L时可明显促进细胞的增殖（P<0.05或0.01）;浓度为1.6×10³ mg/L时对细胞的增殖无影响;浓度在3.2×10³～25.6×10³ mg/L时对细胞生长具有抑制作用（P<0.05或0.01）。黄芪多糖有促进体外培养RIMMVECs的增殖作用,此作用对保护内皮损伤、加速内皮修复有重要作用。     

口蹄疫146S病毒粒子抗原对微血管内皮细胞分泌IL-1的影响

白介素1（IL-1）是免疫与炎症反应启动的重要调节因子。为了研究微血管内皮细胞（microvascular endothelial cells,MVECs）在口蹄疫病毒（foot and mouth disease virus,FMDV）免疫反应中的作用,本试验采用ELISA方法检测了FMDV 146S抗原对体外培养大鼠心肌膜MVECs分泌IL-1α和IL-1β的影响。研究结果发现,正常情况下大鼠心肌膜MVECs能够低水平的分泌IL-1α和IL-1β,FMDV 146S刺激后其分泌量显著增加。结果表明,MVECs通过上调IL-1分泌,在FMDV抗原的免疫反应中发挥重要的调控作用。     

小檗碱、白头翁素对肠黏膜微血管内皮细胞E-selectin表达的影响

为了观察内毒素即细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对肠黏膜微血管内皮细胞(RIMECs)表面E-selectin表达的影响及小檗碱和白头翁素对E-selectin表达的调控作用,试验以体外培养的肠黏膜微血管内皮细胞为模型,采用免疫组化SP法检测不同浓度LPS(10μg/mL、5μg/mL、1μg...     

大肠杆菌热敏肠毒素对肠黏膜微血管内皮细胞的影响及白头翁素对其保护作用的研究

大肠杆菌病是严重危害养殖业的疾病之一,可引起动物腹泻,导致死亡,造成了较大的经济损失.研究表明,细菌产生的热敏肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)是引起腹泻的主要毒素之一.肠黏膜微血管内皮细胞(RIMECs)不仅构成肠道局部的血液与组织细胞间的物理屏障,保证血管内外的物质交换,并且通过合成和释放各种血管活性物质,在调节正常的血液循环、维持周围细胞环境的稳定方面具有十分重要的作用.白头翁素是传统抗腹泻中药白头翁的主要成分.本试验在建立LT损伤RIMECs体外病理模型的基础上,研究了白头翁素对其作用,以进一步了解白头翁素的抗腹泻机制.     

黄芪水煎液诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞增殖以及分泌IFN-γ的研究

为了探讨黄芪水煎液能否诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMVECs)表达IFN-γ,采用MTT和双夹心ELISA分别检测了黄芪水煎液对体外培养的RIMMVECs增殖以及表达IFN-γ的影响。结果显示,黄芪水煎液在25mg/L~3 200mg/L时促进RIMVECs增殖。为更好的研究黄芪水煎液诱导效果,将不同浓度的黄芪水煎液(0.1、1、6、30mg/mL)诱导RIMVECs 6、12、24h检测IFN-γ含量,结果显示,在各检测时间点0.1、1mg/mL组和空白组差异显著(P0.05),6mg/mL组差异极显著(P0.01),30mg/mL组差异不显著(P0.05)。说明黄芪水煎液的抗病毒作用可能与诱导微血管内皮细胞表达IFN-γ有直接的关系,为黄芪"益气解毒"功效的现代阐释提供了试验依据。     

乳酸杆菌对鸡肠黏膜SIgA分泌的影响

试验采用体外培养和动物饲养试验,研究了乳酸杆菌对鸡肠黏膜SIgA分泌的影响。取0日龄SPF鸡剖杀,在无菌条件下取出肠黏膜,培养肠黏膜上皮细胞,使其与乳酸杆菌混合培养,然后镜检。1日龄AA肉鸡随即分为2组,试验组喂服菌液10d。试验组和对照组分别在10、20、30、40、50日龄时随机取15只剖杀,并用辣根过氧化物酶标记兔抗鸡IgA检测,TMB显色,测定SIgA滴度。结果表明:乳酸杆菌对鸡肠道上皮细胞具有较强的粘附作用,能够提高鸡肠黏膜SIgA的滴度,增强鸡的抗病能力。