鸡传染性法氏囊病基因工程疫苗的研制

鸡传染性法氏囊病(Infections bursal disease,IBD)基因工程疫苗的研究已日渐成为国内外学者关注的焦点。本文就鸡IBD的重组活载体疫苗、基因缺失苗、重组亚单位疫苗、核酸疫苗的研究现状及一些值得关心的问题进行了探讨，为进一步改进与完善鸡IBD基因工程疫苗提供了科学依据。     

表达鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组火鸡疱疹病毒的构建及生物学特性分析

鸡传染性法氏囊病（IBD）是一种严重危害养禽业的高度致死性和免疫抑制性传染病。为研制IBD重组火鸡疱疹病毒（HVT）活载体疫苗,本研究构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）保护性抗原VP2基因的重组HVT并对其体外生物学特性进行了分析。通过RT-PCR扩增IBDV超强毒株VP2基因并克隆入pCI载体,获得重组真核表达质粒pCI-VP2。用限制性内切酶将携带CMV启动子的VP2基因表达框架切下,连接于入门质粒pENTR,构建获得重组入门质粒pENTR-VP2。将pENTR-VP2与HVT重组黏粒H3-Kan/ccdB进行LR重组反应,构建重组表达黏粒H3-VP2。用H3-VP2与其他4个相互重叠并覆盖HVT全基因组的黏粒共同转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,拯救获得重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF中连续传至20代后用PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验进行检测,并绘制重组病毒体外生长曲线,分析其体外复制特性。结果表明,重组病毒rHVT-VP2能够稳定表达VP2蛋白,rHVT-VP2在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。重组病毒rHVT-VP2免疫鸡后能够诱导产生IBDV中和抗体,并对IBDV强毒株攻击引起的死亡提供90%免疫保护。重组病毒rHVT-VP2的构建为研制IBD重组HVT活载体疫苗奠定了基础,对IBD的防控具有重要意义。     

抗鸡球虫病基因重组疫苗的研究进展

鸡球虫病是由艾美耳属球虫引起的鸡的一种肠道原虫病,对养鸡业的发展危害严重。目前主要依靠药物和活卵囊疫苗来防治鸡球虫病,但药物防治存在耐药性和药物残留等问题,而免疫活卵囊疫苗带来的肠道损伤等问题使养鸡业在控制鸡球虫病方面面临巨大挑战,新型防控策略亟待开发。基因重组疫苗生产工艺简单、稳定、安全、高效,在分子生物学技术高速发展的当下,其将成为鸡球虫病防治的新型手段。目前对基因重组疫苗的研究日益增多,但缺乏系统的抗鸡球虫病基因重组疫苗的综述分析。鉴于此,论文从当前抗鸡球虫病措施、鸡球虫病基因重组疫苗候选因子及影响因素等方面对抗鸡球虫病基因重组疫苗的研究进展进行综述,以期为抗鸡球虫病基因重组疫苗的研发提供参考。     

表达传染性法氏囊vp2基因的重组马立克病疫苗对SPF鸡和商品鸡的免疫保护试验

国内外很多学者都在进行着传染性法氏囊(Infectious bursal disease,IBD)各种基因工程疫苗的研制,IBDV-vp2基因在多种载体中得到表达并取得了较好的保护效力。本实验室已构建了表达IBDV-vp2基因的重组马立克氏病病毒。本研究对该重组马立克氏病病毒疫苗的遗传稳定性以及对SPF鸡和含有母源抗体的商品鸡的免疫保护作用进行了评价。结果表明,103 PFU和104 PFU剂量的重组病毒免疫后对SPF鸡抗传染性法氏囊标准强毒的保护率分别为53%和73%。104 PFU剂量的重组病毒免疫后对含有母源抗体的商品鸡抗传染性法氏囊标准强毒的保护率为87%,结果显示重组疫苗具有一定的应用前景。     

鸡传染性法氏囊病新型疫苗的研究进展

鸡传染性法氏囊病(IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的雏鸡的一种高度接触性传染病,自1962年报道以来,世界上主要养禽国家和地区均有流行,给养禽业带来严重经济损失。目前,IBD防控的主要方法是采用疫苗接种,使易感雏鸡获得主动或被动免疫保护,因此疫苗的质量对临床上IBD的防控起着至关重要的作用。虽然各国均有较好的商品化疫苗,但随着IBDV毒株的不断变异,商品化疫苗的抗原性与流行毒株不能完全匹配,临床上免疫失败时有发生,因此迫切需要研发与临床流行毒株相匹配的新型疫苗用于IBD的防控。对近期IBD的基因缺失苗、亚单位疫苗、DNA疫苗以及活载体疫苗等新型疫苗的研究进展进行概述,以此为IBD新型疫苗的研究提供参考。     

鸡传染性喉气管炎基因工程疫苗的研究与应用

论述了鸡传染性喉气管炎亚单位疫苗、基因缺失疫苗、重组病毒活载体疫苗、基因疫苗的研究和应用进展情况,表明应用基因工程疫苗免疫可以从根本上改变鸡传染性喉气管炎的防治现状,使传染性喉气管炎的根除成为可能。     

美国推出传染性法氏囊病广谱疫苗

近几年的研究发现,鸡传染性法氏囊病(IBD)病毒抗原发生了不同程度的变异,已出现几个不同的血清亚型,因此目前亦已使用的IBD疫苗不能有效地控制某些地区的IBD爆发和流行。美国Select公司最近研制生产了一种IBD广谱疫苗,代号SVS510,这种疫苗由几个选择的IBD疫苗病毒组成,对标准的IBD毒株和现有的大多数IBD变异株能提供最大可能的保护。野外试验,7日龄鸡使用安全,并能克服母源抗体干扰,对鸡     

传染性法氏囊病重组亚单位疫苗免疫持续时间的研究

以三批次传染性法氏囊病（IBD）重组亚单位疫苗分别免疫SPF雏鸡和产蛋鸡,以琼脂免疫扩散试验检测鸡血清抗体或卵黄抗体,以其阳性率达到80%为免疫期确定依据。试验结果表明,IBD重组亚单位疫苗对青年鸡及产蛋鸡接种一次的免疫期为15～16周。     

马立克氏病基因工程疫苗研究现状及发展趋势

本文对MD基因工程疫苗中的重组亚单位疫苗、基因缺失苗、基因疫苗和活病毒载体疫苗的研究现状作一综述，并重点介绍了重组活病毒载体疫苗。结合其他疫苗的研究方法，可从鸡痘病毒载体插入部位的选择、增加外源基因的表达、使用多个抗原表位构建多价重组基因工程疫苗、使用两种病毒载体构建的重组病毒二次免疫、共表达细胞因子或细胞表面受体、表达微基因等方面来增强重组病毒活病毒载体疫苗的免疫效力。     

传染性法氏囊病重组亚单位疫苗免疫持续时间的研究

以三批次传染性法氏囊病(IBD)重组亚单位疫苗分别免疫SPF雏鸡和产蛋鸡,以琼脂免疫扩散试验检测鸡血清抗体或卵黄抗体,以其阳性率达到80%为免疫期确定依据.试验结果表明,IBD重组亚单位疫苗对青年鸡及产蛋鸡接种一次的免疫期为15～16周.     

鸡传染性法氏囊病病毒超强株VP2基因重组新城疫病毒胚胎免疫安全性及效力试验

为研制能够同时预防传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)的疫苗,本研究选用表达IBD病毒(IBDV)超强毒株(vvIBDV)VP2基因的重组ND病毒(NDV)LaSota疫苗株(rL-VP2),测定其半数鸡胚感染量、平均鸡胚致死时间、脑内接种指数和静脉内致病指数等指标,按不同剂量接种18胚龄SPF鸡胚,分别于出雏后第9d、第14d和第21d采血,用微量凝集法和ELISA方法测定血清中抗NDV抗体和抗IBDV抗体水平,并于出雏后28d用NDV强毒(F48E9株)和vvIBDVGx株攻毒,评估重组疫苗的胚胎免疫效果。结果显示:按104EID50/枚剂量进行免疫不会影响SPF鸡胚出雏率和出雏后21d存活率,并且该免疫组雏鸡能够对NDV强毒和vvIBDV攻毒提供安全的免疫保护。     

鸡马立克病疫苗研究进展

文章介绍了鸡马立克病使用的各种疫苗,包括单价、多价活疫苗和HVT冻干疫苗,并简述了各种疫苗的优缺点。同时对各种重组疫苗、基因缺失疫苗、核酸疫苗的研究情况做了概述,并指出了目前鸡马立克病疫苗研究存在的问题及发展前景。     

表达ILTV gB和UL32基因的重组鸡痘病毒疫苗安全性及稳定性分析

将重组疫苗在SPF鸡中进行连续传代评估表达ILTV g B和UL32基因的重组鸡痘病毒疫苗的安全性及稳定性。研究结果显示,将重组疫苗在SPF鸡体内连传5代,未观察到接种鸡有不良反应。接种鸡仅短暂排毒且重组病毒在环境中存在时间极短,而同居非免疫鸡未被感染,表明重组病毒不具有水平传播能力。免疫后14 d对第1代和第5代接种鸡进行鸡痘强毒株攻击,保护率均在90%以上,表明重组疫苗具有较好的保护力。第5代病毒与第1代病毒相比,UL32基因的序列无任何变异,表明该疫苗具有良好的遗传稳定性,且各代次毒株毒价稳定,无毒力返强现象。以上结果显示,表达ILTV g B和UL32基因的重组鸡痘病毒疫苗具有良好安全性和稳定性。     

利用传染性法氏囊病病毒VP2 ELISA抗体分析孵化场免疫威力克的准确性

威力克(VAXXITEK(R)HVT+IBD)是梅里亚动物保健有限公司于2011年在中国推出的一种新型传染性法氏囊病活载体疫苗,当年即在国内市场销售了近8亿羽份.威力克为载体疫苗,是将传染性法氏囊病(IBD)病毒的VP2基因片段插入火鸡疱疹病毒(HVT)的基因内,重新组成新的疫苗.VP2片段携带宿主保护性抗原决定簇基因,可以诱导免疫系统产生抗IBD的VP2抗体,因此威力克虽然不含有IBD病毒,但免疫后可以激发鸡免疫系统产生抗IBD抗体,从而预防IBD的感染.     

三种传染性法氏囊病疫苗病理致病性及其免疫效力研究

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起雏鸡的一种急性、高度接触性传染病,主要侵害鸡的中枢免疫器官法氏囊,导致免疫抑制.因此如何选择免疫效力高、不产生免疫抑制、毒力适中的IBD疫苗,是目前防制法氏囊的关键[1～5].本研究通过测定3种IBD商品活疫苗在病理致病性上的差异以及免疫效力,来确定毒力适中、免疫效力高的IBD疫苗株,从而为防制IBD提供首选疫苗,这对于目前防制IBD的发病、流行以及避免鸡群免疫抑制的发生是十分必要的,同时为中等毒力高免疫力无免疫抑制的IBD疫苗的研制和大规模工厂化生产奠定了基础.     

美国推出传染性法氏囊病广谱疫苗

近几年的研究发现,鸡传染性法氏囊病(IBD)病毒抗原发生了不同程度的变异,已出现几个不同的血清亚型,因此目前亦已使用的 IBD 疫苗不能有效地控制某些地区的 IBD 暴发和流行。美国 Select 公司最近研制生产了一种 IBD 广谱疫苗,代号 SVS510,这种疫苗由几个选择的 IBD 疫苗病毒     

表达IBDV VP2蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建及免疫原性分析

通过PCR克隆出IBDV VP2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-VP2。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550（缺失Asd、Cya、Crp基因）,获得重组疫苗菌株X4550（pYA3341-VP2）。进行重组菌VP2蛋白表达的鉴定;测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性以及小鼠免疫试验。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE和Western blot证实重组菌表达的VP2蛋白能与鸡抗IBDV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;口服重组菌免疫小鼠,ELISA检测产生了抗IBDV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。本试验成功构建了能稳定表达IBDV VP2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550（pYA3341-VP2）,为研究IBD口服基因工程疫苗奠定了基础。     

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗

H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗系以高度成熟安全的鸡痘病毒为载体研制的新型基因工程禽流感一鸡痘二联疫苗，该疫苗毒株的研制是采用重组DNA技术，将我国H5N1亚型禽流感病毒早期分离株的HA和NA基因同源重组到鸡痘病毒疫苗株的基因组中，构建重组鸡痘病毒(rFPV—HA—NA)，经体外、体内试验表明该重组鸡痘病毒具有良好的免疫原性。同时经细胞连续传代，证实了重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性，从而进一步保证了该疫苗的免疫原性。     

IBDV VP2与Gallus Akirin2真核双表达载体的构建及应用

为提高传染性法氏囊病(IBD)VP2DNA疫苗的免疫效力,将优化合成的IBDV VP2与Gallus Akirin2串联基因定向克隆至真核表达载体pTriEx-4,获得重组质粒pVP2-Akirin2。体外转染293T细胞,提取表达产物进行SDSPAGE和Western blot分析,结果显示:在58 000和35 000附近各有一蛋白条带,分别能与鸡IBD阳性血清和兔Akirin2多克隆抗体发生特异性反应。将pVP2-Akirin2与同期构建的pVP2对照质粒分别免疫SPF鸡,加强免疫2周后,攻IBDV BC6-85强毒,4d后统计保护率,并监测免疫过程中血清IBD抗体滴度和IBDV中和抗体滴度的动态变化,结果显示:SPF鸡二免后14d,pVP2-Akirin2组血清IBD抗体滴度和IBDV中和抗体滴度均极显著高于pVP2组(P<0.01),且对IBDV强毒株BC6-85攻击的保护率为75%,高于pVP2对照组(55%)。结果表明:Gallus Akirin2基因对IBD VP2DNA疫苗具有明显的免疫增强作用。     

鸡新城疫病毒F基因和鸡IL—2重组DNA疫苗的构建

利用已克隆到的新城疫D26株F基因和鸡IL－2基因，经过载体改建，将他们共同克隆于真核表达质粒pCDNA3上，经酶切分析、PCR鉴定证实成功构建了共表达鸡新城疫病毒F基因和鸡IL－2的重组质粒，为探讨禽类重组基因疫苗的构建及鸡IL－2在基因疫苗中的作用奠定了基础。