鸭源新城疫强毒株的分离鉴定及生物学特性研究

从病死肉鸭脑、肝脏、脾中分离到1株病毒, 尿囊液有血凝性,且这种血凝性可被NDV标准阳性血清所抑制。在HI试验中,NDV单因子血清呈现2⁶的HI滴度,对H9和H5亚型AIV单因子血清不呈血凝抑制活性,由此确定为新城疫病毒。对该分离毒株的生物学毒力指标进行测定,其MDT、ICPI和IVPI分别55 h、1.88、2.72,分离株应为强毒NDV。     

13株新城疫病毒强毒株的分离鉴定及部分生物学特性

2004年-2005年从黑龙江省11个地区鸡场、鸽场、鹅场疑似新城疫(ND)病死鸡、鸽、鹅体内分离到24株具有血凝活性的病毒,经HA、HI试验和电镜观察证实了13株病毒为NDV。其鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(IC-PI)分别为36.8 h~73.6 h和1.51~2.00之间,属于NDV强毒株或中强毒株。除HLJ-12-04株外,强毒株的血凝素热稳定性较差,属快速或中速血凝解脱型;弱毒株的血凝素热稳定性好,属慢速血凝解脱型。所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大,对马和兔的红细胞凝集无规律。     

鸽新城疫野毒株的分离及生物学特性研究

对分离的Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３３株鸽新城疫病毒进行了电镜检查、致病性指数测定、血凝试验（ＨＡ）,与鸡新城疫Ｌａｓｏｔａ毒株的交叉血凝抑制试验（ＨＩ）、致病性试验。测得鸡胚半数感染量（ＥＩＤ５０）分别为１０－８．４１,１０－７．５３,１０－７．８３;鸡胚最小致死量（ＬＤ）均为１０－４;鸡胚平均致死时间（ＭＤＴ）分别为８０ｈ,９０ｈ,９６ｈ;１日龄雏鸡脑内致病指数（ＩＣＰＩ）分别为１．６０,１．５０,１．５５;分离毒株与Ｌａｓｏｔａ毒株和其相应血清的交叉凝集抑制试验有明显差异。将分离毒株分别接种１月龄鸽各３只,４～１０ｄ全部出现典型神经症状,１５ｄ内死亡。结果表明所分离的３株病毒为鸽新城疫病毒,在抗原性上与鸡新城疫病毒存在一定差异,对鸡也有一定致病力。为制定防制措施,研制鸽新城疫疫苗,控制新城疫流行提供了科学依据。     

鸡新城疫病毒强毒株的分离及生物学特性鉴定

用SPF鸡胚及鸡胚成纤维细胞，从病死鸡的脑组织中分离到一株病毒。此病毒能凝集鸡的红细胞，而且这种凝集可以被特异性抗血清所抑制。通过对分离株进行回归实验，MDT、ICPI、IVPI及其他生物学特性实验、空斑实验、中和试验、电镜观察等，证实该分离株为新城疫病毒强毒株。     

新城疫病毒强毒株的分离鉴定

鸡新城疫是危害我国养禽业的一种严重的烈性传染病。经过多年的综合防制 ,已经基本控制了该病的爆发 ,典型新城疫的发生已逐渐减少。但是 ,1999年 10月以来 ,一些地区相继发生一种以呼吸道、消化道黏膜出血为典型症状并致部分鸡死亡的急性传染病 ,严重影响了该地区养鸡业的发展 ,给养鸡户造成很大的经济损失。为了尽快查明病因 ,以便制定有效的防制措施来控制该病的流行 ,我们对该地区采集的病料进行了病原分离鉴定 ,并对分离毒株的生物学特性进行了测定 ,现将试验方法和结果报道如下。1　材料和方法1.1　材料SPF鸡胚 ;1日龄SPF雏鸡 (自…     

一株新城疫强毒株的分离鉴定

从昌吉市肉种鸡发病鸡群中分离到1株病毒,对其进行了SPF鸡胚接种试验,HA及NDV和AIVH5、H9单因子血清HI试验,动物回归试验,MDTI、CPI和IVPI毒力学指标测定,分离株与NDV Lasota株交叉HI试验,鸡胚半数感染量(EID50)测定。结果表明,分离株的MDT为55 h;ICPI为1.78;IVPI为2.41,第6代病毒EID50为3.98×10-8/0.1 mL。分离株能被NDV La-soda株阳性血清中和,动物回归试验鸡出现典型的新城疫症状。证明该毒株为新城疫强毒株。     

鸡胚中新城疫强毒的分离、鉴定与生物学特性研究

将来自有产蛋下降表现的一个肉用型父母代种鸡群的种蛋在实验室内孵化,每日观察鸡胚死亡情况。在孵化的24个鸡胚中有2个在孵化后8~9 d死亡,尿囊液有血凝性。在HI试验中,NDV单因子血清呈现26的HI滴度,对H9和H5亚型AIV单因子血清不呈血凝抑制活性,由此确定为新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),分别命名为Tengz060104和Tengz060107。对该2个NDV分离株的生物学毒力指标进行测定,Tengz060104株的MDTI、CPI和IVPI分别为56.4 h、1.88和2.67,Tengz060107株的MDTI、CPI和IVPI分别为40.8 h、1.88和2.79。在6周龄SPF鸡攻毒后产生典型的ND症状的病变。表明来自鸡胚的2个分离株属强毒力、速发型NDV毒株。交叉HI中Tengz060104和Tengz060107相互间的同源性为100%,而与经典NDV毒株F48E8的同源性比较分别是66.7%和57.7%。从鸡胚中分离到新城疫强毒株在国内尚未见报道。     

两株鸽源新城疫强毒株的分离鉴定及分子特性分析

从山东地区疑似新城疫病毒(NDV)感染鸽群中分离到两株新城疫病毒分别命名为pigeon/China/bz12和pigeon/China/bz11,经蚀斑纯化后测定其鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为76.6 h、78.8 h,1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)分别为1.98、1.95,符合NDV强毒特征.设计NDV F基因特异性引物,使用RT-PCR从纯化后鸡胚尿囊液中扩增获得了约1 662 bp基因条带,序列测定确认为NDV F基因,其氨基酸一级结构包含553位氨基酸残基,F0蛋白裂解位点含112-RQKRF-117氨基酸序列,具有NDV强毒株分子特性.依据yellow基因序列同源性对获得2株NDV分离株和42株NDV参考毒株基因型分型,结果显示,2株鸽源NDV分离株都属于基因Ⅶ型,其与基因Ⅶ型NDV不同分离株同源性达93.5％～99.8％,与鸡源强毒NDV分离株Chicken/China/SD8/2010同源性高达99.8％,表明这两株鸽源分离毒株可能来源于感染的鸡群.     

鸡新城疫强毒株的分离与鉴定

从山东某鸡场的产蛋下降而无其他典型ND症状的高抗体蛋鸡群中分离到一株病毒。经过试验鉴定．该分离株具有血凝性，且可被ND标准阳性血清所抑制和中和，不能被AI（H5亚型与H9亚型）标准阳性血清抑制；该病毒的最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间（MDT）为50．4，1日龄SPF鸡脑内接种分离病毒致病指数（ICPI）为1．85，6周龄SPF鸡静脉接种致病指数（WPI）为2．42，回归试验鸡出现了新城疫症状和病变，该病毒株确定为新城疫病毒强毒型，并暂命名为ShD-dzh04。     

鸡新城疫病毒分离鉴定及其部分生物学特性的研究

了解内蒙古乌兰察布市集宁地区鸡新城疫的流行概况,对该地区疑似新城疫病毒(NDV)感染的病料进行分离鉴定.通过接种10日龄SPF鸡胚,结果分离到2株病毒,经血凝试验及新城疫和禽流感阳性血清的血凝抑制试验,证明2个分离株均为新城疫病毒,分别命名为JN1、JN2,并对分离的2个毒株进行MDT、ICPI和IVPI.毒力测定,结果表明,分离株的MDT分别为40.5 h和43.5h,ICPI分别为1.86和1.85,IVPI分别为2.38和2.69.可以判定JN1和JN2病毒株为新城疫病毒强毒株.     

一株鸡新城疫强毒株的分离及生物学特性鉴定

本试验应用一步法RT-PCR和荧光RT-PCR方法分离到一株新城疫病毒,并对此毒株F基因进行了克隆、测序和分析,发现F蛋白裂解位点氨基酸序列为112Arg-Arg-Gln-Lys-Arg-Phe117,与新城疫病毒强毒株特征相符,从分子水平上证明了本试验所分离毒株为新城疫强毒株。结合GenBank中其他新城疫参考株F基因序列进行比较发现,本试验所分离毒株与目前流行的强毒株Taiwan/95、SKY/03、SGM/01的F基因裂解位点氨基酸序列完全一致,而与传统疫苗毒La Sota株的裂解位点则不同。     

斗鸡新城疫病毒的分离与生物学特性鉴定

从病死的越南斗鸡脑组织中分离到l株病毒,能凝集鸡的红细胞,而且这种凝集能被新城疫阳性血清特异性抑制。通过对分离株进行RT—PCR检测、动物致病性试验、MDT与ICPI值测定,证实为中等偏强毒力新城疫病毒。动物感染试验表明,20日龄非免疫鸡感染分离毒后24～120h可用RT—PCR方法从喉头和泄殖腔检出新城疫病毒。     

鸵鸟新城疫病毒野毒株的分离及其生物学特性

用鸡胚从疑似鸵鸟新城疫的送检病料中分离到 2株病毒。 2株病毒均能凝集鸡红细胞 ,且能被抗新城疫病毒 ( NDV)阳性血清抑制 ;用抗 NDV单抗 PEG夹心 ELISA测定 2株分离毒均为阳性。对其中 1株作进一步生物学特性鉴定 ,按照国际上规定的 NDV毒力判定标准测定的该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间 ( MDT)为 54h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数 ( ICPI)为 1 .88,6周龄雏鸡静脉接种致病指数 ( IVPI)为2 .75。结果表明 ,本分离株为鸵鸟新城疫病毒强毒     

Isolation,Identification of Four Newcastle Disease Virus Strains and Study on Their Biological Characteristics and Genetic Characteristics

In order to study the relationship and evolution between the latest Newcastle disease virus (NDV) epidemic strain and the vaccine strain (Mukteswar,La Sota and Clone 30 strains),four NDV epidemic strains were initially isolated and identified from immunized chicken groups in Guangdong,Guangxi and Hainan provinces. Fusion (F) gene and hemaglutinin neuraminidase (HN) gene of four isolated stains were amplified,cloned and sequenced by RT-PCR method,and the homology analysis of amino acid sequences deduced by F and HN genes of NDV and other strains published in GenBank were studied, the phylogenetic tree were build,and the pathogenicity index of each strain (EID₅₀,MDT, ICPI and IVPI) were determined. The results showed that the EID₅₀,MDT,ICPI and IVPI of the HN-08 strain were 10^-8.37/0.2 mL,58.5 h,1.78 and 2.45,that of the XX-08 strain were 10^-6.50/0.2 mL,75.0 h,1.61 and 2.41,that of the YS-09 strain were 10^-7.75/0.2 mL,64.5 h,1.71 and 2.38,and of the LF-09 strain were 10^-7.60/0.2 mL,63.8 h,1.84 and 2.38.In this experiment,the similarity of amino acid sequences of F and HN genes was over 95.8% among four strains of NDV isolated from chicken,the similarity of four NDV strains with chicken epidemic strains (GX11/03 and GM strains),vaccine strains (Mukteswar,La Sota and Clone 30 strains) and standard virulent strain (F₄₈E₉ strain) were from 96.8% to 98.6%,86.7% to 90.6% and 88.4% to 91.3%,respectively. The results showed that four NDV epidemic strains were virulent strains,which were closely related to the GX11/03 and GM strains that were popular in China in recent years,but relatively far from the traditional vaccine strains.     

4株NDV流行株的分离鉴定、生物学特性及遗传学特性的研究

为研究近年国内的新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）流行株与传统疫苗株（Mukteswar、La Sota及Clone 30）的亲缘关系和遗传演化情况,试验从广东、广西和海南地区患病的免疫鸡群病料中分离鉴定得到4株NDV流行株。通过RT-PCR技术对各毒株的F和HN基因进行扩增、克隆与序列分析,然后与GenBank上发表的NDV序列进行同源性比对、遗传进化树分析,并测定各毒株致病指数。结果显示,本试验中HN-08株的鸡胚半数感染量（EID₅₀）、平均死亡时间（MDT）、脑内致病指数（ICPI）和静脉致病指数（IVPI）分别为10^-8.37/0.2 mL、58.5 h、1.78和2.45,XX-08株分别为10^-6.50/0.2 mL、75.0 h、1.61和2.41,YS-09株分别为10^-7.75/0.2 mL、64.5 h、1.71和2.38,LF-09株分别为10^-7.60/0.2 mL、63.8 h、1.84和2.38。4株鸡源NDV流行株彼此间F和HN基因推导的氨基酸序列同源性在95.8%以上,与鸡源流行株GX11/03、GM株的同源性为96.8%~98.6%,而疫苗株Mukteswar、La Sota及Clone 30株的同源性为86.7%~90.6%,与标准强毒株F₄₈E₉的同源性为88.4%~91.3%。表明4株NDV流行株均为强毒株,与近年来国内流行的GX11/03、GM株有较近的亲缘关系,而与传统疫苗株的关系相对较远。     

鸭源新城疫病毒分离株的生物学特性鉴定

从河北某鸭场产蛋锐减而无其他典型新城疫症状的高抗体蛋鸭群中分离到1株病毒(命名为HB/1/06/Dk).经过鉴定,该分离株具有血凝性,可被新城疫病毒(NDV)标准阳性血清所抑制,不能被禽流感病毒(AIV H5与H9亚型)阳性血清和减蛋综合征病毒(EDSV)标准阳性血清抑制;该病毒致死鸡胚的平均时间(MDT)为67.2 h,1日龄SPF雏鸡的脑内接种致死指数(ICPI)为0.86,表明该病毒属中等毒力毒株.     

鸽新城疫病毒的分离与鉴定

用SPF鸡胚从疑为鸽新城疫的浙江温州某肉鸽场分离到一株毒株。该毒株能凝集鸡红细胞,初代分离毒HA效价高达8 log2;且其凝集作用能被鸡新城疫标准阳性血清抑制;将分离毒回归鸽,复制出与自然病例相似的临床症状和病变,且感染后10d内全部死亡,说明为强毒株。试验结果表明该毒株为鸽新城疫病毒。     

一株新城疫病毒弱毒株的分离鉴定

于１９９６年８月从长春地区－－养鸡场分离到一株新城疫病毒,该毒株经过鸡胚传代培养,病毒形态学观察,血凝谱测定、鸡胚平均致死时间试验、鸡脑内致病指数试验、脉致病指数试验及１入毒试验等生物学特性结果表明该新城商株为弱毒株。     

鸽新城疫病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从疑似鸽新城疫的信鸽饲养场分离到一株新城疫病毒。分离株利用电镜负染技术观察到典型的新城疫病毒粒子。生物学试验表明,该株病毒具有较强的毒力,最小致死量鸡胚平均致死时间（MDT）为68.4小时,1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）为1.375,6周龄雏鸡静脉接种致病指数（IVPI）为1.34,在鸡胚成纤维细胞上能引起细胞病变。动物回归试验证明,分离株能致2月龄鸽死亡。