牛胚胎冷冻技术的实用化研究

采用不同的冷冻程序，不同的植冰温度，不同的冷冻保护剂，不同的解冻液及不同的解冻方式对牛胚胎冷冻及解冻技术的各个环节进行研究，目的是选择简便，高效的牛胚胎冷冻方法，综合冷冻过程，减少冷冻，解冻中对胚胎的损伤，提高胚胎解冻成活率和移植妊娠率。     

不同抗冻剂和冷冻—解冻方法对绵羊胚胎冷冻效果的研究

<正> 前言 到目前为止,国外研究绵羊胚胎冷冻并获得活的后代的有:Moor,N.W.(1976);Willadsen,S.M.(1977);Willadsen,S.M.(1976)。牛、羊胚胎冷冻一解冻后,存活率的变化幅度很大,多数移植成活并发育至产出活仔畜的数量约占全部冷冻胚胎数的35％。 哺乳动物胚胎冷冻过程中,不同抗冻剂配合使用不同的冷冻—解冻方法,对冷冻胚胎解冻后的存活率有明显的影响。目前很多学者对抗冻剂及冷冻和解冻方法进行了大量     

动物胚胎玻璃化冷冻的试验

胚胎的玻璃化冷冻技术是胚胎生物工程技术在生产中进行生产化应用的技术关键，本研究通过对该方法的研究和探讨，试图取得该技术在牛胚胎生产中应用的技术关键，为牛胚胎的玻璃化冷冻提供科学依据和技术支持。我们利用小白鼠和牛超排胚胎开展了本项试验，并在小白鼠和牛胚胎的玻璃化冷冻和解冻方面，选出了一组比较理想的玻璃化冷冻剂、解冻剂和操作程序，在实验中获得了良好的冷冻和解冻效果。     

家畜卵和胚胎冷冻的现行方法及有待研究的问题

近17年来,采用建立起来的牛非手术采卵及冷冻方法,已能将牛桑葚胚和囊胚冷冻,并获得较高的存活率。现在试验中和商业上牛胚胎冷冻大多数是采取控制降温和解冻的程序。解冻后存活率按形态评定可达90％～100％,非手术移植的妊娠率为60％。绵羊、山羊和马的桑葚胚和囊胚用控制降温和解冻程序也能有效的冷冻。简化的控制降温和解冻程序的一步法用于牛胚胎,妊娠率可达50％。此法免去了解冻后较繁琐的脱除冷冻保护剂和胚胎评定过程。玻璃化法和快速冷冻法是较先进的方法,可大大缩短胚胎冷冻时间,而且无需复杂的冷冻设备。不过,迄今家畜胚胎冷冻的结果还是有待提高的,尽管牛、绵羊、山羊桑葚胚和囊胚用玻璃化法冷冻已经成功,移植后产了仔。另外,卵母细胞、早期胚胎、显微手术(切割、克隆、活组织检查)后的胚胎、猪胚胎冷冻成功率还很低。因此,为使胚胎移植技术能在生产中应用和开展胚胎显微操作、体外受精、克隆和基因转移之类生物技术的试验及应用,很有必要加强研究建立起更为有效的胚胎冷冻解冻方法。     

应用牛冷冻胚胎对秦川系受体牛移植的效果

应用进口加拿大牛冷冻胚胎解冻后对秦川系受体牛进行移植，共解冻6个品种的胚胎175枚，解冻后直接移植给161头受体牛，妊娠83头，移植妊娠率51.6%。其中灵台点移植32头，妊娠20头，移植妊娠率达62.5%。     

在生产条件下牛冷冻胚胎直接移植的效果

牛冷冻胚胎解冻后能直接移植给受体牛的胚胎冷冻保存方法,对在商业条件下应用胚胎移植技术最有价值。传统冷冻法通常在胚胎解冻后用蔗糖溶液分步稀释抗冻保护剂,在显微镜下检查胚胎品质,合格者方能移植。与此相比,直接移植法简化了移植前胚胎的处理,可消除由于稀释抗...     

哺乳动物胚胎冷冻原理及研究进展

哺乳动物胚胎冷冻研究始于 5 0年代 ,先后在小鼠、大鼠、兔、马、牛、绵羊、山羊等动物胚胎上获得成功。目前该方面的研究进展很快 ,部分家畜的冷冻胚胎已逐步走向商品化应用。本文比较全面的综述了哺乳动物胚胎冷冻的原理、方法过程和冷冻胚胎的解冻及解冻后保护剂脱除。     

家畜胚胎冷冻近期试验结果

近年来在改进牛、绵羊、马胚胎的冷冻和解冻方法方面,已取得了显著的进步。然而,猪胚胎的冷冻至今仍未取得满意的结果。我们研究的重点是牛的胚胎,对绵羊、猪和兔的胚胎也做了试验。本文主要论述近期来牛的完整和切割胚胎及完整的绵羊和猪胚胎的冷冻试验结果。     

动物胚胎玻璃化冷冻的试验

胚胎的玻璃化冷冻技术是胚胎生物工程技术在生产中进行生产化应用的技术关键,本研究通过对该方法的研究和探讨,试图取得该技术在牛胚胎生产中应用的技术关键,为牛胚胎的玻璃化冷冻提供科学依据和技术支持。我们利用小白鼠和牛超排胚胎开展了本项试验,并在小白鼠和牛胚胎的玻璃化冷冻和解冻方面,选出了一组比较理想的玻璃化冷冻剂、解冻剂和操作程序,在实验中获得了良好的冷冻和解冻效果。     

进口奶牛冻胚一步解冻移植效果的研究

冷冻胚胎移植效果不仅能检验胚胎冷冻保存技术的可靠性,且直接影响牛胚移技术的普及应用与商业利益。与传统的胚胎冷冻一解冻处理技术相比较,牛冷冻胚胎解冻后立即移植给受体牛更适于现场操作,简化了移植前胚胎的分步脱甘油处理,具有省时、不需专门仪器设备等优越性。如果直接移植效果接近或超过冷冻精液人工授精技术水平（情期受胎率平均55％）,则对提高冷冻胚胎的利用率,增进国际问的引种,以及形成胚胎产业化、推动胚胎移植技术商业化具有重要意义。     

引进加拿大牛冻胚解冻后直接移植的效果

对进口的加拿大牛冷冻胚胎进行解冻后移植效果观察.结果共解冻24枚冻胚,解冻后直接移植给24头受体牛,妊娠19头,移植妊娠率79.2%,其中荷斯坦奶牛冻胚移植21头,妊娠17头,移植妊娠率达81.0%,创造我国牛冷冻胚胎移植成功率的最高记录.     

BMY牛冷冻精液质量控制及影响因素研究

[目的]为了加大BMY牛的推广应用力度和提高人工授精受胎率,开展了BMY牛冷冻精液质量控制研究,优选出冷冻稀释液及得出冷冻精液质量控制技术程序。[方法]采用不同的初始冷冻温度、不同种类的稀释液、不同的冷冻方法对BMY牛精液冷冻及解冻效果进行试验。[结果]不同的初始冷冻温度、不同种类的稀释液、不同的冷冻方法,BMY牛精液冷冻解冻效果各异。初始冷冻温度为-121--140℃时,TRIS液为基础稀释液添加糖类和氨基酸一步法稀释BMY牛精液冷冻6-10 min BMY牛冷冻精液解冻效果较好,用程控冷冻仪冷冻BMY牛精液,同样获得良好的解冻效果,解冻活力达到0.372±0.026。BMY牛冷冻精液平均解冻活力可达0.357±0.029以上,精子解冻复苏率达50%以上。精子畸形率平均为16.8%±4.26%,BMY牛采精成功率为75.3%。[结论]全放牧条件下BMY牛电刺激采精法获得很好效果,精液质量好,更有利于种质资源的保存和利用。     

牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究

本文进行了牛胚胎冷冻与移植受胎技术研究。摸索出了提高牛冷冻胚胎成活率和移植受胎率的综合配套技术。牛冷冻胚胎解冻成活率达８４．４％（５７／１２２）。其中１９９６年移植受胎率达到５５．６％（２０／３６）。Ａ级胚胎达以７７．８％（２１／２７），并在我国首次获得中国荷斯坦牛冷冻胚胎的二分胚的同孵孪生牛犊。且达到４２．９％（３／７）移植受胎率。     

甘肃省进口肉牛冷冻胚胎移植的研究

1999年5月至2000年12月在甘肃省武威市、平凉市、信县、灵台县开展了进口肉牛冷冻胚胎移植工作。经过对386头当地黄牛母牛及杂交母牛进行了诱导同期发情，结果获得84．9％的同期发情率和77．1％的黄体合格率。对于黄体合格的253头母牛进行了进口肉牛冷冻胚胎移植，获移植妊娠率50．9％，其中45头受体牛由甘肃省家畜繁育中心技术人员移植，获得51．1％的移植妊娠率。对同一批次经产牛与青年牛移植妊娠结果、常规法与一步法解冻胚胎移植妊娠结果进行了对比分析，结果显示，经产牛移植妊娠率（37．5％）显著低于青年牛（56．6％）常规胚胎解冻法与一步细管解冻法解冻胚胎，移植妊娠率差异显著（41．6％，69．5％，P＜0．05），后者较高。     

牛胚胎冷冻方法的应用研究

为研究使用常规冷冻法和OPS法对牛体内生产胚胎进行冷冻、保存及移植的效果,在阿克苏市进行了牛胚胎冷冻和移植试验.结果显示,这两种方法生产的冻胚解冻后的移植受胎率分别为28.89%和26.08%,差异不显著.对常规冷冻法和OPS法的冻胚生产费用进行比较.结果表明,OPS法冷冻胚胎比常规冷冻法的步骤简单、费用低,不需要专用...     

切割取样后胚胎的冷冻保存技术的研究

研究了切割取样后小鼠胚胎和牛胚胎冷冻-解冻的技术方法。结果表明：（1）分别以10％甘油、10％乙二醇作为冷冻液以及在以上两种冷冻液中分别添加10％葡聚糖＋0．1mol／L蔗糖作为冷冻液常规方法冷冻切割后的小鼠胚胎，冷冻-解冻后体外培养72h总发育率分别为56．9％（259／455）、81．8％（604／738）、84．8％（540／637）和59．5％（308／518）。（2）取样后胚胎体外短暂培养（0-4h）并不能提高切割取样后小鼠胚胎冷冻-解冻体外培养发育率。（3）切割取样小鼠胚胎在25％甘油＋0．25mol／L蔗糖＋20％的血清为冷冻液，在-100～-110℃左右熏蒸2min快速冷冻后体外培养发育率为73．3％（33／45），切割取样牛胚胎快速冷冻-解冻移植妊娠率为57．1％（4／7）。     

引进加拿大冻胚解冻后直接移植的效果

对进口的加拿大牛冻胚胎进行解冻后移植效果观察。结果共解冻２４枚冻胚,解冻后直接移植给２４头受体牛,妊娠１９头,移植妊娠率７９．２％,其中荷斯坦奶牛冻胚移植２１头,妊娠１７头,移植妊娠率达８１．０％,创造我国牛冷冻胚胎移植成功率的最高记录。     

哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究进展

自1985年胚胎玻璃化冷冻(v itrification)保存技术发明以来,玻璃化法先后在小鼠、兔、绵羊、牛、猪、山羊等动物胚胎上获得成功,近年来有关哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存的研究主要集中在冷冻和解冻方法上,相继发明了一些新的玻璃化冷冻方法:冷环玻璃化法(cryo loop)和开放式细管法(open pu lled straw,OPS),并且对解冻后细管内直接脱除防冻剂进行了广泛深入的研究,使得冷冻胚胎移植更易于在生产上推广应用。现将胚胎玻璃化冷冻的原理、冷冻保护剂、冷冻方法、解冻后保护剂脱除方法的最新研究进展作一综述。     

哺乳动物胚胎冷冻保存技术的研究进展

哺乳动物胚胎冷冻保存效果受冷冻保护剂、冷冻方法、解冻方法等多种因素的影响,其中冷冻方法是一个关键因素.这项技术的应用需要保证胚胎在冷冻和解冻后具有较高的成活率.自1972年小鼠胚胎冷冻保存获得成功以来,许多学者在简化冷冻程序、缩短冷冻时间等方面进行了深入研究.胚胎冷冻保存技术的应用更加广泛,对胚胎生物工程和其他生物技术产生了推动作用.文章对胚胎冷冻保护剂、冷冻方法及冷冻胚胎的解冻等进行了综述.     

控制牛冷冻精液中细菌数的综合措施

在牛冷冻精液生产过程中，被细菌污染的精液精子活力下降，生存时间缩短，而且输精后极易造成早期胚胎的死亡，降低受胎率。自2009年01月01日开始实施的《牛冷冻精液国家标准》（GB4143-2008）明确规定牛冷冻精液解冻后，每剂量中细菌数应≤800个。