鸽源新城疫病毒的分离与鉴定

实验从疑为新城疫或禽流感发病的鸽群中分离到一病毒性病原,该病原具有血凝活性,通过电镜观察、血凝抑制试验、RT-PCR等一系列试验确定引起该鸽群发病的是新城疫病毒.现报告如下.     

鸽新城疫病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从疑似鸽新城疫的信鸽饲养场分离到一株新城疫病毒。分离株利用电镜负染技术观察到典型的新城疫病毒粒子。生物学试验表明,该株病毒具有较强的毒力,最小致死量鸡胚平均致死时间（MDT）为68.4小时,1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）为1.375,6周龄雏鸡静脉接种致病指数（IVPI）为1.34,在鸡胚成纤维细胞上能引起细胞病变。动物回归试验证明,分离株能致2月龄鸽死亡。     

鸽新城疫病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从疑似鸽新城疫病鸽群中分离到1株病毒,该病毒株能凝集鸡红细胞,这种凝集作用能被抗新城疫病毒阳性血清抑制。病毒对氯仿、乙醚、胰蛋白酶、盐酸敏感。将病毒分离物回归鸽子,复制出与自然病例相似的临床症状,且全部感染鸽都发生了血清学抗体转换;静脉接种6周龄雏鸡,10 d后HI价显著增高,且其IVPI为0。试验结果表明该毒株为鸽新城疫病毒。     

鸭源新城疫病毒的分离鉴定

从病死肉鸭肝脏中分离到2株病毒(ZH1、ZH2),均能够凝集鸡、肉鸭、绵羊、山羊、猪、人、兔、牛等的红细胞,且这种血凝性可被NDV标准阳性血清所抑制.参照NDV毒力判定标准及其方法对分离毒株ZH1、ZH2进行了鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT)、鸡胚半数感染量(EID50)以及1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定,结果ZH1、ZH2株的MDT为52 h和44 h,EID50为106.4/0.1mL和108.64/0.1mL,ICPI为1.93和1.975.表明这2株分离病毒均为NDV强毒株.     

湖南省鸽新城疫病毒的分离与鉴定

用SPF鸡胚从疑似命ND病鸽群中分离到一株病毒。根据HA、HI及病毒中和试验结果表明该分离毒为鸽NDV。其生物学特性ICPI为1.38，IVPI为1.0，MDT为99.8h，表现出与鸡NDV不同的生物学特性。     

鹌鹑新城疫病毒的分离与鉴定

从表现呼吸道症状、拉黄绿色稀粪为主要特征的发病鹌鹑的脑、脾、肺气管粘液中分离到一株病毒,经HA、HI试验、血清中和试验及动物回归试验,证实所分离毒株为新城疫病毒。     

白鹭源新城疫病毒的分离与鉴定

从1只患病的白鹭的咽喉、泄殖腔棉拭子中分离到1株病毒,经血凝、血凝抑制试验和RT-PCR法鉴定为新城疫病毒。根据该毒株对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、鸡胚半数感染量的测定和新城疫强弱毒鉴别的RT-PCR检测,表明该分离株为新城疫强毒株。     

一株鸽源新城疫病毒的分离鉴定

从广东发病鸽群中采集的拭子样本中分离到1株新城疫病毒,用聚合酶链反应(PCR)、血凝抑制试验(HI)及基因测序等对其进行鉴定。结果表明,此分离株具有血凝活性,且可与新城疫病毒标准阳性血清发生特异性抑制反应;用针对新城疫病毒的F基因及P基因特异性鉴定引物对该分离株进行PCR扩增,可扩增出特异性目的片段;测序及BLAST分析表明,其与美国新城疫病毒分离株Pigeon/US(TX)/98的F基因核苷酸序列相似性高达97%以上。毒株被鉴定为鸽源新城疫病毒,并命名为Pigeon/Guangdong/ZQ-17。     

云南省鸽新城疫病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从疑为鸽新城疫的云南省某信鸽场分离到一株毒株。该毒株能凝集鸡红细胞，且其凝集作用能被抗新城疫阳性血清抑制；该毒株对氯仿、酸敏感；在病毒中和试验中，抗NDV阳性血清对该毒株中和效价为1：2^1.75；将病毒分离物回归鸽子，复制出与自然病例相似的临床症状，且全部感染鸽都发生子血清学抗体转换；静脉接种6周龄雏鸡，10天后HI价显著增高，且其IVPI为0。试验结果表明该毒株为鸽新城疫病毒。     

孔雀NDV的分离鉴定

为对1例疑似新城疫病死孔雀进行确诊,采集病死孔雀的心、脾、肺制成匀浆,接种9~11日龄鸡胚进行病毒分离,并采用血凝和血凝抑制试验对分离病毒进行鉴定。结果表明,该孔雀死于新城疫。     

鸡新城疫病毒的分离与鉴定

从山东某鸡场的产蛋下降而无其他典型新城疫(Newcastle Disease)症状的高抗体蛋鸡群中分离到一株病毒。经过试验鉴定,该分离株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,不能被AI(H5亚型与H9亚型)标准阳性血清抑制;该病毒的最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间(h)为50.4 h,1日龄SPF鸡脑内接种分离病毒致病指数(ICPI)为1.85,6周龄SPF鸡静脉接种致病指数(IVPI)为2.42,回归试验鸡出现了新城疫症状和病变,经外源病毒检测及回归试验该病毒株被确定为新城疫病毒,并属强毒型,命名为ShD-5-04。     

一株基因VII型新城疫病毒的分离与鉴定

应用一步法RT-PCR技术成功扩增了一株自然分离NDVF基因的重要功能区片段(约500bp)。最后测序结果表明:该分离株F0裂解位点氨基酸序列为NDV强毒株特征性序列(112-R-R-Q-K-R-F117),且具有NDV基因VII型的特征性氨基酸,即101位的K和121位的V。     

广东省新城疫病毒地方强毒株的分离鉴定

从广东省各地方分离10余株地方强毒株，对其中的五株地方强毒株进行了分离鉴定，将各毒株病肝研磨离心后取上清，绒毛尿囊腔接种9-11日龄的鸡胚，鸡胚接种后36-42h死亡，鸡胚全身出血，含病毒的尿囊液红血球凝集效价（HA）为1：9^9-1:2^15，并能被ND阳性血清特异性抑制，却不能被AIVH5亚型血清所抑制，用自己设计的特异性检测引物，对五个毒株进行了PCR鉴定，可扩增出特异性的目的条带，再结合临床症状和剖检病变，可初步判定为新城疫病毒，为以后进行广东省新城疫病毒分子流行病学研究打下了基础。     

新城疫病毒野毒株的分离及其致病新特点

１９９８年４月份,本厂收检２０日龄患病肉仔鸡８只,发病群临症主要表现为扭颈、后退、长病程（２周以上）、高死亡率（９０％￣１００％）及内脏无眼观病变。迫杀取病料以ＳＰＦ鸡胚分离出新城疫病毒（ＮＤＶ）。经致病性检验证明分离物为ＮＤＶ野外强毒株（该强毒株可被常规抗ＮＤＶ血清中和）。说明目前已经出现了仅表现单一神经症状而内脏又无眼观病变、长病程且高死亡率的“新型ＮＤ”。     

新城疫病毒F48E9株HN基因的克隆与酶切分析

为深入探讨新城疫病毒（ＮＤＶ）的结构与功能的关系，扩增和克隆了Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ的ＨＮ基因。首先以提取的Ｆ４８Ｅ９株ＮＤＶ基因组ＲＮＡ为模板逆转录合成第一链ｃＤＮＡ，然后用ＨＮ基因特异性引物作ＰＣＲ扩增ＨＮｃＤＮＡ，结果得到１条分子量约１．８ｋｂ的ＤＮＡ带，与ＮＤＶＨＮ基因的大小一致。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交进一步证实其为ＨＮ特异性ｃＤＮＡ。随后采用平端连接法将其克隆到ｐＳＶ·Ｓｐｏｒｔｌ质粒中，应用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＳｃａⅠ、ＭｌｕⅠ、ＡｐａⅠ、ＰｓｔⅠ、和ＳｍａⅠ对ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮｃＤＮＡ重组质粒作单酶或双酶切，结果表明，ＮＤＶＦ４８Ｅ９株ＨＮ基因较ＨｉｔｃｈｎｅｒＢ１株的ＨＮ基因缺少１个ＭｌｕⅠ位点（７０５ｂｐ左右），多１个ＰｓｔⅠ位点（８０２ｂｐ左右）。     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

鸡新城疫病毒的分离与鉴定

从山东某鸡场的产蛋下降而无其他典型新城疫（Newcastle Disease）症状的高抗体蛋鸡群中分离到一株病毒。经过试验鉴定,该分离株具有血凝性,且可被ND标准阳性血清所抑制和中和,不能被AI（H5亚型与H9亚型）标准阳性血清抑制;该病毒的最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间（h）为50．4h,1日龄SPF鸡脑内接种分离病毒致病指数（ICPI）为1．85,6周龄SPF鸡静脉接种致病指数（IVPI）为2．42,回归试验鸡出现了新城疫症状和病变,经外源病毒检测及回归试验该病毒株被确定为新城疫病毒,并属强毒型,命名为ShD-5-04。     

奶牛布鲁氏菌病的病原分离与鉴定

为给奶牛布鲁氏菌病实验室诊断提供技术参考,对疑似布鲁氏菌病病例进行了病原分离培养,并采用平板直接凝集试验、革兰氏染色镜检、柯兹洛夫鉴别染色镜检和PCR方法对分离菌株进行了鉴定.结果表明：分离的4株细菌均为布鲁氏菌属细菌.