枯草芽孢杆菌XM16分泌蛋白的抑菌作用及抗菌蛋白的分离纯化

以苹果腐烂病菌等22种植物病原真菌为供试菌,研究了枯草芽孢杆菌XM16无菌滤液的抑菌活性,结果表明,该无菌滤液对供试的植物病原菌具有强烈的抑制作用,抑菌谱非常广。无菌滤液经硫酸铵盐析,然后过Sephacryl S-100HR凝胶柱进一步分离纯化,获得2种不同组分的具强抑菌作用的抗菌蛋白。SDS-PAGE电泳显示,2种蛋白的分子量分别为21kD和30kD。     

地木耳藻蓝蛋白α和β亚基分离纯化的研究

经过研究建立了盐析、离子交换层析和凝胶过滤层析的分离纯化程序,从地木耳（Nostoc commune）细胞中分离纯化出藻蓝蛋白的α和β两个亚基,其纯度（A615/A280）为5.7,最大吸收峰为615 nm,荧光发射峰为560 nm,α和β亚基的分子量分别为18.1 kD和19.1 kD。     

紫花芸豆胰蛋白酶抑制剂的分离和纯化

[目的]从紫花芸豆中分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[方法]以紫花芸豆为材料,采用脱脂、酸抽提、热变性、硫酸铵分级沉淀及离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,分离纯化胰蛋白酶抑制剂。[结果]胰蛋白酶抑制剂经PAGE和IEF电泳显示单一条带。凝胶过滤法测定其表观分子量约为59kD。SDS电泳结果显示它有3个亚基,分子量分别为34、16、15kD。等电聚焦法测定其等电点为5．25。动力学的方法检测PVTT与胰蛋白酶发生不可逆抑制作用。[结论]离子交换层析和凝胶过滤层析法能快速地分离纯化紫花芸豆中的胰蛋白酶抑制剂。     

人参水溶性蛋白的纯化工艺研究

为研究人参中几种水溶性蛋白的提取纯化工艺,采用中性缓冲液抽提和硫酸铵分级沉淀法提取人参总蛋白,应用超滤、亲和层析、离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析等方法进行分离、纯化,得到5种水溶性人参蛋白。经SDS-PAGE电泳和高效凝胶过滤色谱分析,其分子量分别为65.8,65.5,24.7,15.1,7.6 kD。研究结果表明,本试验所确定的人参水溶性蛋白纯化工艺路线简便、可行。     

皱皮木瓜超氧化物歧化酶分离纯化研究

[目的]探讨皱皮木瓜超氧化物歧化酶（SOD）分离纯化工艺。[方法]以重庆綦江皱皮木瓜为试验材料,采用硫酸铵分级沉淀、Se-vage法除杂蛋白、丙酮再次沉淀脱色除杂和Sephadex G-100凝胶层析,分离纯化皱皮木瓜SOD。采用Folin-酚法测定蛋白质含量,用改良的邻苯三酚自氧化法测定酶活性。[结果]皱皮木瓜SOD在层析过程中得到较好的分离纯化。其纯化倍数是178.72倍,回收率是4.94%,比活力是303.82 U/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定结果表明,电泳图为一条谱带,表明分离纯化到达电泳纯的样品。[结论]采用该分离纯化工艺得到比活力较高,达到电泳纯的皱皮木瓜SOD样品。     

冬小麦中玉米赤霉烯酮结合蛋白的分离纯化

玉米赤霉烯酮是植物体内源产生的一类小分子生理活性物质，已证明它与冬性植物的春化作用密切相关。本研究应用亲和层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对春化的冬小麦幼苗中的玉米赤霉烯酮结合蛋白进行了分离纯化。供试材料为冬小冬品种燕大1817，种子萌发后在4℃一春化4周，提取幼苗的水溶性总蛋白进行亲和层析。层析基质为琼脂糖凝胶Sepharose4B，配体为玉米赤霉烯酮多聚赖氨酸复合物。总蛋白溶液先经过Sepharose4B结合后，再与连有配体的亲和胶进行反应，然后洗去非结合蛋白；改变洗脱条件，进一步洗涤得到的为玉米赤霉烯酮结合蛋白（ZBP）溶液。研究结果表明，在春化的冬小麦幼苗中存在两种玉米赤霉烯酮结合蛋白，它们的分子量分别为25.4kD和22.9kD。     

Paenibacillus polymyxa CP7菌抗革兰氏阴性菌活性组分的分离和结构分析

 【目的】分离和纯化Paenibacillus polymyxa CP7菌抗革兰氏阴性菌的活性组分,并鉴定其结构。【方法】采用固相萃取柱分离、阳离子交换层析、凝胶过滤层析和HPLC层析等技术对活性组分进行分离纯化,通过紫外-可见光谱、圆二色光谱、红外光谱和MALDI-TOF-TOF-MS质谱对所分离组分进行结构鉴定。【结果】从CP7菌发酵液中分离获得抗革兰氏阴性菌的B、C1和C2组分,分子量分别为1 155、1 169和1 191 D。并确定了C1组分的分子式为C53H100O13N16,结构由6个L-α,β-二氨基丁酸（DAB）、2个苏氨酸和2个亮氨酸组成,与多粘菌素E1的结构相同。【结论】从CP7菌发酵液中分离获得了3种抗革兰氏阴性菌的小分子多肽。经测试确认C1组分为多粘菌素类E1。推测B组分也是多粘菌素类的1个成员,而C2组分则可能是多粘菌素家族中的一个新成员。     

不同磁珠对过敏原蛋白纯化效果的比较研究

本文以南美白对虾的主要过敏原为纯化对象,选用2种商业磁珠构建免疫磁珠,利用免疫磁分离技术纯化过敏原,采用SDS-PAGE、Western blot、蛋白定量对纯化产物进行鉴定,探讨了不同免疫磁珠对过敏原的纯化效果。结果表明,磁珠A的抗体偶联量明显高于磁珠B。此外,免疫磁珠A对抗原的结合率和洗脱率分别为免疫磁珠B的1.5、1.8倍;免疫磁珠A对过敏原捕获率为47.9%,而免疫磁珠B仅为17.6%。对比两种磁珠的理化及其结构特点,发现粒径大、分散性差的磁珠在偶联过程会发生聚集,降低抗体偶联效率,从而影响纯化效果。结果显示,分散性好、抗体偶联率高的磁珠更适宜蛋白质的分离纯化。本研究为以后过敏原的纯化提供了一定的理论基础与实验依据。     

干酪乳杆菌胞外多糖的分离纯化及结构分析

[目的]分离纯化干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）胞外多糖,并对其进行初步分析。[方法]使用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱将干酪乳杆菌LC2W产粗多糖分级纯化,并对所得单一组分进行Sepharose CL-6B和高效液相分析。[结果]分离纯化干酪乳杆菌胞外多糖得到3个组分：G1、G2、G3,分别为粗多糖质量的21.33%、33.53%、29.67%,总回收率为84.53%。G1、G2为中性多糖,Sepha-rose CL-6B和高效液相分析表明,其都是均一组分,平均分子量分别为6.65×105、1.01×104Da。[结论]为今后更深入研究乳酸菌产胞外多糖的结构和生物活性等提供参考。     

奶牛温氏附红细胞体抗原特性研究

研究目的为制备E.wenyoni特异性诊断抗原及研制高效附红细胞体疫苗提供基础进行试验;方法从自然感染温氏附红细胞体(E.wenyoni)的牛血液中纯化附红细胞体后,采用SDS-PAGE和免疫印迹技术分析E.wenyoni抗原蛋白组分;结果SDS-PAGE结果显示,E.wenyoni全蛋白分子量范围为24kD￣150kD,主要的9种蛋白质分子量分别为141.34kD,107.27kD,86.03kD,68.05kD,56.21kD,44.30kD,32.99kD,28.89kD,24.59kD;免疫印迹筛选出3特异性蛋白质,分子量分别为147.31kD,49.03kD,35.72kD;结论E.wenyoni主要由九种类抗原蛋白组成,3种特异性蛋白质,可作为E.weny-oni特异性诊断抗原及附红细胞体疫苗的保护性抗原。     

Responsiveness of maize hybrids and their parental forms to nitrogen fertilizer

In this work, the responsiveness to nitrogen fertilizer of two mid-ripening maize hybrids (FAO 350) and their parental forms—Mashuk 350 MV (AB (A × B) × C) and Mashuk 355 MV (DE (D × E) × C)—was analyzed. In order to understand the genetic determination of the responsiveness characteristic to fertilizer, a genealogical approach was applied. This approach included the genotype similarity hypothesis: if the hybrid and parental components in its pedigree have the same level of trait manifestation. The estimation of the effectiveness of nitrogen fertilizer was carried out based on such economically valuable traits as yield of green mass and grain yield. It was shown that the increase in the yield of green mass and grain of hybrids and selfpollinated maize lines from fertilizer mainly dependent on weather conditions during vegetation. However, differences between hybrids and their original forms on responsiveness to nitrogen were detected. The highest increase in the yield of green mass and grain provided by nitrogen fertilizer was detected for the three-way cross maize hybrid Mashuk 355 MV and its parental forms. On average in 2012–2015, the green mass increase for the hybrid Mashuk 355 MV accounted for 13%, its parental form (DE) was 16%, and parental forms of hybrid DE (D and E) were 18 and 14%, respectively. The green mass increase for the hybrid Mashuk 350 MV accounted for 10%, the parental form (AB) was 12%, and its basic lines were A 11% and B 12%. The grain yield increase from the nitrogen for original forms of three-way cross Mashuk 355 MV (DE, D, E) was 10%, which was significantly higher than the increases in parental forms of the hybrid Mashuk 350 MV (AB (3%), A (0.3%), B (3%). The study of the reaction of mid-ripening maize hybrids to nitrogen fertilizer revealed that the efficient use of nitrogen by a hybrid depends on the responsiveness of its parental components.     

广西玉米品种萌芽期生理生化特性及其抗旱性综合评价

【目的】依据生理生化指标评价广西玉米品种萌芽期抗旱性,为广西抗旱玉米品种筛选和培育提供参考。【方法】利用20% PEG-6000溶液模拟干旱胁迫,对14个广西玉米品种进行萌芽期抗旱性试验,测定对照（蒸馏水）和干旱胁迫下各玉米品种胚芽的叶绿素、可溶性糖和丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）活性,探究干旱胁迫对玉米萌芽特性的影响,并采用隶属函数法综合评价各参试玉米品种萌芽期的抗旱性。【结果】与对照相比,干旱胁迫下各参试玉米品种的生长发育均受到明显抑制,表现出种子萌发困难,胚芽生长缓慢,但不同品种受到的影响存在差别。方差分析结果表明,各生理生化指标在品种间和处理间的差异均达极显著水平（P<0.01）。与对照相比,干旱胁迫下各玉米品种的叶绿素和可溶性糖含量减少,SOD、POD和CAT活性降低,MDA含量增加。隶属函数法评价中指标权重系数最大为MDA含量,达46.96%,其次为SOD活性,为21.77%。各品种隶属函数法D值在0.176~0.795,其中兆玉215和桂单162的D值大于0.7,属于强抗旱品种;桂单6205、桂单666和兆玉200的D值在0.5~0.7,属于抗旱品种;桂单660、桂单658、桂单673、桂单6209、桂单203和桂单6203的D值在0.4~0.5,属于中抗旱品种;桂单669、桂单671和桂单668的D值小于0.4,属于弱抗旱品种。【结论】叶绿素、可溶性糖和MDA含量及SOD、POD和CAT活性均可作为玉米萌芽期抗旱性评价指标,其中以MDA含量和SOD活性为主要评价指标。14个玉米品种中,兆玉215、桂单162、桂单6205、桂单666和兆玉200的抗旱性相对较强。     

等电聚焦分析兔出血症病毒多肽

人工感染ＮＪ株ＲＨＤＶ病毒死兔肝经低温反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒。纯化病毒经尿素－聚丙烯酰胺圆盘等电聚聚焦,考马斯亮蓝染色紫外扫描显示８条多肽,其等电点及相对百分含量分别为Ａ：６．３,１８,５１％;Ｂ＝６．７,１１．２２％;Ｃ：７．４％;Ｄ：７．７,８．５３％;Ｅ：８．１,７,２７％Ｆ：８．７,１２．４４％Ｇ：９．０。１６,１８％,Ｈ：９．５,２２．２     

离子交换层析法纯化羊血SOD及其稳定性研究

以羊血为原料,通过热处理、透析、离子交换层析等方法获得SOD提取物,测定其酶活力和蛋白质含量,并从温度、pH稳定性和外源试剂耐受性等几个方面对SOD稳定性进行了研究.结果表明:经过离子交换层析后,SOD的比活力达到5289.1U·mg-1,回收率为60%,纯化倍数为25.3倍;在40～60℃保温30min,SOD酶活力基本不变;pH6～9范围内SOD的稳定性较好;SOD对2mmol·L-1H2O2和尿素较敏感,2mmol·L-1SDS对SOD没有明显的抑制作用.     

小麦籽粒超氧化物歧化酶（SOD）活性全基因组关联分析

【目的】小麦籽粒超氧化物歧化酶活性对小麦面粉色泽和营养品质具有重要影响,挖掘与小麦籽粒超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性显著关联位点及候选基因,为揭示小麦籽粒SOD活性的遗传机理和小麦面粉色泽的遗传改良奠定基础。【方法】采用氮蓝四唑（nitro-blue tetrazolium,NBT）光化还原法对3个环境下种植的212份普通小麦品种（系）进行SOD活性检测,结合90K SNP芯片的16 705个高质量SNP标记对小麦籽粒SOD活性进行全基因组关联分析（genome-wide association study,GWAS）,并对稳定遗传的显著关联位点进行候选基因的挖掘。【结果】不同环境下,各小麦品种（系）间的SOD活性表现出丰富的表型变异,变异系数为4.34%—5.23%,相关系数介于0.60—0.90（P<0.001）。多态性信息含量（polymorphic information content,PIC）为0.24—0.29。全基因组连锁不平衡（linkage disequilibrium,LD）衰减距离为7 Mb。群体结构分析表明,供试材料可分为3个亚群。GWAS分析结果显示,共检测到29个与SOD活性显著关联位点（P≤0.001）,分布在1A、1B、2A、2B、2D、3B、3D、4B、4D、5A、5B、5D、6A、6B、6D和7B染色体上,单个位点可解释5.47%—32.43%的表型变异,其中14个位点在2个及以上环境下均被检测到。9个显著关联位点在3个环境下被同时检测到,分布于1B、2B、4B、5A、5B、6B和6D染色体,贡献率为6.21%—16.62%。对稳定遗传的显著关联位点进行候选基因的挖掘,共挖掘TraesCS2B01G567600、TraesCS3D01G069900、TraesCS3D01G070200、TraesCS5B01G525700、TraesCS5B01G373700、TraesCS6A01G021400和TraesCS6D01G431500等7个SOD基因和TraesCS5A01G263500、TraesCS6B01G707800等2个与SOD活性相关的候选基因,候选基因的功能主要与抑制细胞活性氧积累及参与抗氧化剂再生过程有关。【结论】检测到与小麦籽粒SOD活性显著关联的29个SNP位点,共筛选出7个SOD基因和2个与SOD活性有关的候选基因。     

绿盲蝽超气门蛋白ALUSP的克隆、原核表达及纯化

【目的】克隆绿盲蝽超气门蛋白基因（ALUSP）,获得原核表达的重组蛋白,为ALUSP的功能研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽蜕皮及变态发育的机制提供理论依据。【方法】根据已知昆虫的USP基因序列设计简并引物,获得ALUSP的保守序列;再通过设计特异性引物,利用RACE方法,分别克隆ALUSP 5′及3′段序列,然后通过拼接获得ALUSP全长序列;应用生物信息学方法,对ALUSP基因序列特征及其所编码蛋白的特性进行分析,建立系统进化树;将含有ALUSP的T载体经EcoR I及Xho I双酶切,构建ALUSP原核表达载体pEGX6P1-ALUSP,将该表达载体分别在15、25、30和37℃条件下进行诱导表达,再通过GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析后获得ALUSP功能区纯化蛋白。【结果】ALUSP开放阅读框长1 005 bp,编码334个氨基酸,预测分子量56.63 kD,理论等电点8.42;序列特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有超气门蛋白的典型特征,由A/B域（249 bp）、C域（198 bp）、D域（69 bp）和E域（489 bp）组成,其中C域高度保守,包含2个锌脂结构并含有1个P-盒和1个D-盒,且含有由8个氨基酸构成的核定位信号,D域含有1个识别DNA元件的T-盒,E域含有1个由8个α螺旋和1个β折叠形成袋状结构;氨基酸比对结果表明,ALUSP的氨基酸序列与稻绿蝽USP序列一致性最高（57.82%）,与其他昆虫的USP序列一致性较低,如膜翅目的Melipona scutellaris（46.05%）、Scaptotrigona depilis（45.94%）;系统进化树分析结果显示,半翅目与膜翅目、直翅目等昆虫的USP较为分化,位于不同分支,ALUSP与稻绿蝽USP进化关系最近,可能来源于共同的祖先。EcoR I和Xho I双酶切的重组克隆载体可成功亚克隆到pEGX-6P-1载体上,命名为pEGX6P1-ALUSP;经37℃、1.0 mmol•L-1的IPTG诱导的pEGX6P1-ALUSP重组质粒可特异性表达1个约65 kD的蛋白,并且该重组ALUSP蛋白主要以包涵体形式存在;收集含有目的基因的菌株进行GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析,最后进行复性和纯化后在65 kD附近仅出现1条清晰的特异性条带,表明已得到纯化的靶蛋白。【结论】克隆了ALUSP全长,其具有昆虫超气门蛋白的典型特征,并获得了原核表达的重组蛋白。     

介导玉米DNA的水稻高秆变异株AFLP分析

用AFLP分子标记技术,对花粉管介导玉米总DNA获得的2个高秆水稻变异植株C(HN28)和D(HN31)进行分析,揭示水稻变异植株和亲本间在DNA水平的差异,为进一步研究变异机制提供数据。首先对64对AFLP选扩引物进行筛选,优选出11对选扩引物,它们均能够在2个变异植株中扩增出较多清晰的DNA差异带。对变异植株和对照中的DNA图谱进行分析,结果显示,变异植株C、D、受体水稻B与阳性对照玉米A之间的DNA图谱相似率分别为38.30%、38.58%和32.99%,水稻变异植株C、D和受体水稻B的DNA图谱相似率分别为90.04%和85.84%,说明变异植株与受体水稻基因组DNA存在显著差异,变异植株与阳性对照玉米基因组DNA相似率明显高于受体水稻。变异植株C检测到12条与对照玉米一致的目的带,变异植株D检测到11条与对照玉米一致的目的带。说明变异植株C、D基因组中可能存在有玉米DNA片段,变异性状的差异可能是介导玉米DNA引起。     

高效液相色谱法测定白牦牛乳B族维生素的方法研究

以ODS-C18(5μm,4.6 mm×150 mm)为色谱柱,庚烷磺酸钠离子对试剂(PIC-B7)和甲醇为流动相并采用梯度洗脱,在流速为1 mL·min-1、柱温为30℃条件下,用波长为275 nm的紫外检测器进行高效液相色谱法(HPLC)检测和分析白牦牛乳中B族维生素的含量.结果表明:白牦牛乳中维生素B3的含量最高...     

普乐宝在玉米中残留试验研究

介绍普乐宝在玉米中的残留量分析方法及残留试验结果.样品用石油醚-丙酮提取,提取液经氧化铝层析柱净化,再用气相色谱电子捕获检测器测定.该方法的添加回收率为84.6%～95.9%,最小检出量为8.2×10-12g,在样品中的最低检出浓度为0.001mg/kg.普乐宝在玉米和土壤中的半衰期分别为18～20 d、4～7 d.在玉米播后苗前,分别用2个施药浓度处理1次,玉米中未检出农药(残留量低于0.001mg/kg).