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棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨 总被引:1,自引:0,他引:1
针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。 相似文献
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适用于多重荧光SSR检测的玉米基因组DNA提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
通过比较植物DNA提取试剂盒法、SDS法、磁珠法和质粒DNA小提试剂盒法提取玉米叶片全基因组DNA的质量,确定最适用于多重荧光SSR检测的方法。结果表明,4种方法获得全基因组DNA的ODA260/ODA280平均值分别为1.92、2.16、2.22和2.00;DNA浓度平均值分别为19.16、2 050.58、69.12、53.56 ng/μL。比较发现,SDS法和植物DNA提取试剂盒法因为提取DNA杂质多和提取成本高,均不适用于多重SSR-PCR大量样本的检测;质粒DNA小提试剂盒法和磁珠法提取的全基因组DNA都适用于多重SSR-PCR检测,分别适合人工操作和机械自动化提取。 相似文献
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以白木香为材料,研究沉香属植物基因组DNA提取方法,并优化SSR-PCR反应体系。通过改良CTAB法提取白木香叶片基因组DNA,经电泳和吸光度检测。优化影响白木香SSR-PCR主要参数,确立适合沉香属植物的SSR-PCR反应体系和扩增条件:在20 μL反应体系中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶等5种主要成分的最适浓度分别为2.5 ng/μL、1 μmol/L、2 mmol/L、0.2 mmol/L、1.2 U;并用9份沉香属植物DNA样品对SSR-PCR反应体系验证,能扩增清晰 相似文献
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以大麻的幼嫩叶片和风干叶片为材料,分别采用优化的SDS法、CTAB法、高盐低pH法和碱裂解法这4种不同方法提取基因组DNA,并比较提取质量和效率.结果表明,采用4种提取方法,大麻干样叶和鲜样叶均可获得清晰DNA目的条带,鲜样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为:SDS法>CTAB法>高盐低pH法>碱裂解法,干样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为:高盐低pH法>SDS法>CTAB法>碱裂解法,优化的SDS法适用于大麻鲜样叶基因组DNA提取,而大麻干样叶基因组DNA的提取选用优化的高盐低pH法最适宜. 相似文献
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棉花基因组大,重复序列含量高,在荧光原位杂交研究中,需要利用基因组封阻DNA降低背景信号。本试验以棉花基因组DNA为材料,通过煮沸法和超声波法进行处理,探讨棉花基因组封阻DNA的制备方法。结果表明,DNA样品沸水浴70 min和80 min时,DNA片段长度主要集中在200~800 bp,可以满足封阻DNA的要求;超声波打断法处理影响参数较多,在总超声波处理时间10 min、间隔时间20 s、功率25%的条件下,超声时间60 s时,DNA片段大小主要集中于400 bp以下,基本可以满足长度要求。综合比较2种棉花封阻DNA制备方法,煮沸法要比超声波破打断易于控制,更适合于实验室常规采用。 相似文献
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利用SSR标记检测棉铃种仁DNA鉴定杂交种纯度 总被引:2,自引:1,他引:1
利用棉铃种皮DNA和种仁DNA的差异,通过Simple sequence repeats (SSR)分子鉴定技术在棉花制种后期快速检测制种质量。筛选杂交种亲本间的多态性SSR引物,应用多态性引物鉴定棉铃种仁的指纹图谱,指纹图谱与种皮一致,表明该棉铃为自交铃;种仁图谱为共显性谱带,则该棉铃为杂交铃,计算杂交铃的比例得出杂交种的制种纯度。F2的图谱分离验证了遗传的分离规律,F2的个体间具有不同的指纹图谱,育种过程中的杂交后代的分子检测能加速育种进程。 相似文献
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为了快速获得较高质量的DNA用于SSR分析,并建立一套稳定的SSR反应体系,以小麦单粒干种子为材料,比较了CTAB法和SDS法获得的DNA条带清晰度和RNA残留带的清晰度;同时,研究了模板DNA浓度、引物浓度、dNTPs浓度以及Taq酶用量对SSR结果的影响。结果表明,CTAB法微量提取小麦干种子DNA可获得理想的扩增结果;SSR的最佳反应体系是:模板DNA浓度为4.0~4.8ng·μL-1,Taq酶用量为1U,引物浓度为50~200nmol·L-1,dNTPs浓度为50~500μmol·L-1。 相似文献
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SSR分子标记技术在杂交棉纯度鉴定中的应用 总被引:2,自引:0,他引:2
利用SSR(Simple sequence repeats)分子标记技术,对湖北惠民农业科技有限公司的3个品种的棉花杂种F1共计31份田间材料进行分子标记纯度鉴定。通过田间纯度鉴定与SSR分子标记纯度鉴定对比,运用相关分析和回归分析的统计方法,研究SSR分子标记纯度鉴定在杂交棉花制种中的可行性。结果表明,相关分析得出SSR分子标记鉴定纯度和田间鉴定纯度具有很强的相关性,相关系数在0.7以上;回归分析得出SSR分子标记鉴定纯度与田间鉴定纯度呈现极显著正相关,SSR分子标记鉴定纯度能够准确预测田间纯度。因此,SSR分子标记纯度鉴定能够应用于棉花杂交制种。 相似文献
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为了优化小麦高通量TILLING突变体扫描所需基因组DNA提取的方法,对利用SDS法、改良SDS法、CTAB法、改良CTAB法、AxyPrep DNA提取试剂盒、Qiagen DNeasy Plant Mini Kit试剂盒以及再生Qiagen硅胶柱方法提取的小麦基因组DNA进行了系统比较。结果表明,尽管7种方法所提取DNA的纯度及琼脂糖凝胶电泳检测结果均良好,但再生Qiagen硅胶柱方法、CTAB法和改良SDS法的DNA浓度显著高于其他方法。根据小麦细胞分裂素氧化酶基因1(TaCKX1)的DNA序列设计引物,以新鲜DNA样品用于PCR扩增大于1 000bp的片段时,后4种方法扩增效果优于前3种方法;DNA在-20℃下保存100d后重新进行PCR扩增时,则只有Qiagen试剂盒和再生Qiagen硅胶柱2种方法提取的DNA能扩增出大于1 000bp的片段。采用本实验室与新西兰坎特伯雷大学合作建立的再生硅胶柱与自配提取液提取小麦基因组DNA,既保证了DNA的高质量,又降低了使用试剂盒的成本,为小麦TILLING库的构建及其他相关试验提供了一种经济有效的DNA提取方法。 相似文献
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棉花是常异花授粉植物,获得真实的杂种是开展杂交育种及其他遗传学研究的重要基础。本研究从80对SSR(Simple sequence repeat)分子标记中筛选到了11对多态性高、扩增稳定、条带清晰的引物,对30个棉花种间远缘杂交组合后代进行真、假杂种鉴定。结果表明,通过SSR分子鉴定共有22个杂交组合获得了真杂种,且不同杂交组合间真杂种的比例不同,且并通过田间形态学的确认鉴定结果。SSR分子标记可以简单、快速、准确地对棉花杂交后代进行真、假杂种鉴定,对棉花杂交育种及分子遗传学研究具有实际应用价值。 相似文献
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不同方法从大豆不同组织中提取基因组DNA效果的比较 总被引:11,自引:0,他引:11
从大豆组织中获得高质量和足够产量的基因组DNA,是进行大豆分子生物学研究的基础.为进行大豆基因组的PCR,RAPD,SSR等分子生物学研究,分别以大豆种子和其叶片为实验材料,采用改良的SDS法和CTAB法对大豆基因组DNA进行了提取.对DNA的提取效果,采用紫外分光光度检测、琼脂糖凝胶电泳分析及DNA的限制性内切酶图谱分析进行了综合比较.结果表明,在以叶片为材料时,SDS法和CTAB法的大豆基因组DNA的提取效果差别不大,SDS法稍好于CTAB法.在以大豆种子为材料时,SDS法的提取效果明显优于CTAB法,SDS法可从大豆种子中提取到能够充分满足各种分子操作的高质量和数量的大豆基因组DNA. 相似文献