重组鸭β-防御素-2对多重耐药性大肠杆菌攻毒雏鸡的治疗效果研究

试验旨在研究重组鸭β-防御素-2(DAvBD2)对多重耐药性大肠杆菌攻毒雏鸡的治疗效果。经测定多重耐药性大肠杆菌对15日龄黄羽肉鸡的最小致死量为4×10~8cfu/m L。将100只15日龄黄羽肉鸡随机分为5组,每组20只。A组作为健康对照组,不攻毒,也不用给药;B组作为攻毒对照组,多重耐药性大肠杆菌攻毒,但不给药;C、D、E三组为治疗组,多重耐药性大肠杆菌攻毒2 h后,分别肌内注射200、250、300μg的重组DAvBD2,连用3 d。结果显示:最小致死量多重耐药性大肠杆菌攻毒后,B组死亡率是100%;C组死亡率70%、存活率30%、治愈率为20%;D组死亡率10%、存活率90%、治愈率70%;E组死亡率为0、存活率100%、治愈率80%。电镜观察发现,多重耐药性大肠杆菌经重组DAvBD2作用后,大肠杆菌细胞外膜外翻、凹凸不平、起泡,甚至出现孔洞,导致菌体内容物外泄。表明重组DAvBD2对感染多重耐药性大肠杆菌的雏鸡有较好的治疗效果,在临床治疗有很好的应用价值。     

白头翁颗粒对鸡大肠杆菌病的疗效评价

为评价白头翁颗粒对鸡大肠杆菌病的疗效,将试验鸡随机分为7个处理组,以健康雏鸡为空白对照,硫酸新霉素和白头翁汤为对照药物,对鸡大肠杆菌病进行预防和治疗试验。统计各处理组对人工感染鸡大肠杆菌病的保护率、发病率和治愈率、有效率及测定相对增重率、脏器指数。结果显示,白头翁颗粒中剂量组(150 mg/只)对鸡大肠杆菌病的预防效果优于硫酸新霉素,但差异不显著(P0.05)。白头翁颗粒高剂量组(600 mg/只)治愈率和有效率分别为71.43%和85.71%,治疗效果与硫酸新霉素相近(P0.05)。白头翁颗粒高剂量组和硫酸新霉素组的相对增重率、脏器指数均优于感染对照组。说明白头翁颗粒对鸡大肠杆菌病具有良好的预防和治疗效果,可缓解大肠杆菌引起的典型病理症状,降低雏鸡心脏和肝脏的受损。     

乳酸菌发酵物与中药配伍对预防鸡大肠杆菌病协同作用的研究

试验旨在考察乳酸菌发酵物与中药(TCM)配伍后对预防鸡大肠杆菌病中药药效的影响。试验采用对鸡大肠杆菌病有效的中药组方与乳酸菌发酵物配伍组成中药乳酸菌复合物(CTCML)。以胸肌注射0.2 mL (9×10⁸ CFU/mL)大肠杆菌培养液的方法建立雏鸡大肠杆菌病人工感染模型。将144只8日龄雏鸡平均分为9个组,其中3个组为CTCML高、中、低剂量组,在雏鸡感染前按0.6、0.4、0.2 g/d剂量将药物颗粒混入日粮中给予,在雏鸡感染后按0.3、0.2、0.1 mL/d剂量将药物提取液混入饮水中给予,同时设置3个与CTCML剂量相同的TCM高、中、低剂量组及药物(盐酸环丙沙星)对照组、感染对照组和健康对照组。结果显示,CTCML高、中、低剂量组雏鸡存活率分别为75.00%、75.00%和93.75%,TCM高、中、低剂量组雏鸡存活率分别为68.75%、68.75%和75.00%,药物对照组为75.00%,感染对照组为56.25%,健康对照组为100.00%。CTCML低剂量组与CTCML高、中剂量组及TCM高、中、低剂量组、药物对照组、感染对照组相比均差异显著(P<0.05),CTCML高、中剂量组及TCM高、中、低剂量组、药物对照组彼此间差异均不显著(P>0.05)。所有感染组中,CTCML低剂量组对雏鸡增重影响最小,增重率较健康对照组低29.93%;其次是CTCML中剂量组,增重率较健康对照组低36.95%;其余各感染组较健康对照组降低42.49%~51.07%。结果表明,中药对人工感染大肠杆菌的雏鸡具有保护作用,乳酸菌对中药具有明显的协同作用。     

复方盐酸小檗碱可溶性粉剂对雏鸡大肠杆菌病的临床疗效

为了探讨复方盐酸小檗碱对雏鸡大肠杆菌病的临床疗效,本试验选用240只2周龄海兰褐商品代公鸡,随机分为6组,每组40只,第1组为健康对照组;.第2组为感染对照组;第3~5组分别为复方盐酸小檗碱高、中、低剂量组;第6组为诺氟沙星对照组。试验结果表明:复方盐酸小檗碱可溶性粉剂对雏鸡大肠杆菌感染治疗效果明显,治愈率为75.0%~92.5%,推荐剂量为1.5g/kg。     

香莲芪中药制剂抗鸡体内大肠杆菌的试验研究

为观察香莲芪中药制剂抗鸡体内大肠杆菌的效果,将16日龄雏鸡用O2型大肠杆菌攻毒并开展预防和治疗试验。预防试验是用16日龄雏鸡O2型大肠杆菌攻毒同时口服香莲芪中药制剂0.5m L、1.0m L及2.0m L,1次/天,连用10d,测定发病率、死亡率和保护率;治疗试验是先用O2型大肠杆菌攻毒并建立疾病模型后口服上述药物,2次/天,连用10d;以乳酸环丙沙星作为阳性对照,测定治愈率、有效率和死亡率。预防试验结果表明,香莲芪中药制剂组试验动物死亡率均极显著低于感染对照组(P﹤0.01);中、高剂量组对试验动物的保护率超过86%;在18日龄时,给药组试验动物发病率均极显著低于感染对照组(P﹤0.01)。治疗试验结果表明:香莲芪中药制剂试验组感染雏鸡死亡率显著低于乳酸环丙沙星阳性对照组(P﹤0.05);中、高剂量组治愈率显著高于阳性对照组(P﹤0.05或P﹤0.01),高剂量组有效率显著高于阳性对照组(P﹤0.05)。由此表明,香莲芪中药制剂能够有效预防和治疗鸡大肠杆菌病。     

碱偏离型恩诺沙星注射液的临床应用研究

为了研究碱偏离型恩诺沙星注射液对人工感染大肠杆菌O78雏鸡的治疗作用,本试验以8日龄的雏鸡为试验动物,腹腔注射一定剂量的O78菌悬液,建立雏鸡大肠杆菌人工感染模型,然后给予不同剂量碱偏离型恩诺沙星注射液对其进行治疗试验。结果显示,给予1.75mg/kg碱偏离型恩诺沙星注射液进行预防给药,其增重率显著升高,增重率和有效率分别为102.45%和100%;给予1.75mg/kg碱偏离型恩诺沙星注射液进行治疗给药,雏鸡增重率、治愈率和有效率分别为93.34%、70%和83%,试验证明,碱偏离型恩诺沙星注射液能有效防治人工感染雏鸡大肠杆菌病,为兽医临床应用碱偏离型恩诺沙星注射液治疗雏鸡大肠杆菌病提供了理论依据。     

加味珠蓼散对鸡大肠杆菌腹泻的防治作用研究

为了探索加味珠蓼散对鸡腹泻的防治作用,以便为加味珠蓼散的临床应用提供试验依据,将100羽2日龄海兰蛋鸡随机分成5组,每组20羽,进行治疗试验。各组蛋鸡适应性饲养3d后,均用O2型大肠杆菌腹腔注射致泻,出现腹泻症状后,取泻粪检测病原,A、B、C组分别用治疗低(0.05 mL/羽)、中(0.1 mL/羽)、高(0.2 mL/羽)剂量加味珠蓼散灌服治疗,D组用对照药物氟苯尼考组(1.5 mg/羽)灌服治疗、E组不治疗作为空白对照,记录各组雏鸡的腹泻情况,计算有效率和治愈率。另取2日龄海兰蛋鸡50羽,随机分成5组,每组10羽,进行预防试验。各组蛋鸡适应性饲养3d后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别用预防低(0.025mL/羽)、中(0.05mL/羽)、高(0.1mL/羽)剂量加味珠蓼散灌服,1次/d,连续灌服7d,Ⅳ组用对照药物氟苯尼考组(0.75mg/羽)灌服,1次/d,连续灌服7d,Ⅴ组不给药作为空白对照,各组雏鸡均用O2型大肠杆菌腹腔注射致泻,观察并记录各组的发病、死亡及恢复情况。结果显示:治疗试验中,各剂量的加味珠蓼散和对照药物均对大肠杆菌腹泻具有治疗作用,且有效率和治愈率均表现为:C组B组D组A组,而E组腹泻无明显改善;预防试验中,O2型大肠杆菌腹腔注射24h后,Ⅰ～Ⅴ组的保护率分别为40%、60%、100%、40%和0%。研究表明:加味珠蓼散对雏鸡大肠杆菌腹泻具有较好的预防和治疗作用,高、中剂量时优于氟苯尼考。     

四味穿心莲散水煎剂防治禽致病性大肠杆菌病疗效研究

为考察四味穿心莲散水煎剂（DSCS）对禽致病性大肠杆菌（APEC）的抗菌活性，本试验用微孔-平板法测定最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）；用10日龄雏鸡制备APEC感染模型，随机分为5组，每组20只，设DSCS高、中、低三个剂量组，氟苯尼考阳性对照组和感染组，另设一组健康对照组，口服给药，连用5 d，观察疗效。结果显示：DSCS对APEC的MIC为7.82 mg/mL,MBC为31.25 mg/mL;DSCS组对APEC病的治愈率为50%～82%，与氟苯尼考组相当，DSCS高剂量组有效率显著高于氟苯尼考组（P <0.05）。由此表明，四味穿心莲散水煎剂能够有效治疗APEC病。     

中药制剂对人工感染鸡大肠杆菌病疗效的研究

为了考察中药制剂对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗效果。以大肠杆菌标准菌株O_(78)、O_1、O_2三种混合大肠杆菌菌液肌肉注射感染15日龄海蓝褐蛋公鸡,之后口服不同剂量的中药制剂与氟苯尼考粉,观察试验鸡的临床症状、病理变化、病变发生率等,最终统计出试验鸡的死亡率和治愈率。采用Duncan法多重比较,结果各试验组鸡只死亡率均与感染对照组差异显著(P0.05),而试验组之间差异不显著(P0.05),中药高剂量组对感染鸡只治愈率与感染对照组鸡只自愈率差异显著(P0.05),且近似于氟苯尼考粉组。因此,中药制剂可以作为有效控制和治疗鸡大肠杆菌病的途径之一。     

沙拉沙星对雏鸡大肠杆菌病的疗效研究

本文研究了国产新兽药沙拉沙星对人工感染大肠菌病的疗效。治疗试验用雏鸡240只,随机分为沙拉沙星三个不同剂量组、环丙沙星对照组、阳性对照组和阴性对照组,每组雏鸡40只。当感染鸡出现典型症状时,沙拉沙星三个剂量组、环丙沙星组分别按0.4％、0.2％、0.1％和50 mg·L~(-1)混饮药物,场连续5天。结果表明:沙拉沙星三个剂量组、环丙沙星组对雏鸡大肠杆菌的治愈率分别为95％、87.5％、80％、85％。表明沙拉沙星确为治疗鸡大肠杆菌的理想药物。     

外排泵抑制剂小肽1号对抗菌药抗菌活性的影响

为了观察外排泵抑制剂小肽1号对抗菌药抗菌活性的影响,本试验采用标准微量稀释法,测定了6类8种抗菌药单用和与小肽1号联用对12株临床分离鸡大肠杆菌的MIC值。结果表明,12株鸡大肠杆菌中有9株为产超广谱酶的多重耐药菌株,小肽1号（1∶2）使恩诺沙星等8种药物的抗菌活性多数增强2倍,使氟苯尼考对A8、A15的抗菌活性增强了4倍,小肽1号（1∶2或1∶4）使恩诺沙星、甲替沙星、环丙沙星的抗菌活性增强2倍,使左旋氧氟沙星对A13的抗菌活性增强4倍。以上结果表明,细菌外排泵抑制剂-小肽1号对大多数药物的抗菌活性有一定的增强作用,产酶多重耐药的鸡大肠杆菌至少同时存在产ESBLs、外排泵两种耐药机制。     

CecA-Mag及其突变体在Pichia pastoris中的表达及抗菌活性试验

参考相关天蚕素类抗菌肽的作用机制及抗菌肽结构与功能关系的假说,设计了杂合肽CecA-mag的3个突变体并利用重组聚合酶链式反应定点诱变技术,使突变体得以合成,利用琼脂孔扩散法检测CecA-mag和其突变体对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等临床分离菌株的抑菌效价.结果显示,3个突变体的抑菌活性比CecA-mag分别提高了1....     

合生素和抗菌肽对肉仔鸡大肠杆菌病的防制效果及免疫调节作用

试验旨在研究添加自制合生素和新型抗菌肽对肉仔鸡生长性能的影响,以及攻毒后对其免疫功能的调节作用。选取健康的1日龄科宝Ross 308肉仔鸡100只,随机分为4组。自制合生素组（S组）饲喂基础日粮+0.3%合生素;抗菌肽组（AP组）饲喂基础日粮+0.5%抗菌肽;抗菌肽+合生素组（SAP组）饲喂基础日粮+0.3%合生素+0.5%抗菌肽;对照组（C组）饲喂基础日粮。试验期间测定各组肉鸡生长性能;在试验第14天,同时每组随机选取10只肉仔鸡进行大肠杆菌O78攻毒（对照组攻毒后设为攻菌模型组（M组））,观察记录24 h各组鸡的发病和死亡情况,并测定肉仔鸡的免疫功能。结果显示,与对照组相比,S组和AP组料重比和平均日采食量显著降低（P<0.05）,SAP组的法氏囊指数在攻毒前显著升高（P<0.05）,其他各组无显著差异（P>0.05）;攻毒后,S组及AP组的胸腺指数、脾脏指数及法氏囊指数均显著高于对照组（P<0.05）,SAP组的脾脏指数、法氏囊指数均显著高于对照组（P<0.05）,胸腺指数与对照组间无显著差异（P>0.05）。攻毒后S组中IgA、sIgA和IL-10与M组无显著差异（P>0.05）,而IL-6极显著降低（P<0.01）;AP组中IgA和IL-6均极显著降低（P<0.01）,sIgA和IL-10显著或极显著升高（P<0.05;P<0.01）;SAP组的变化趋势与AP组相同。综上所述,日粮中分别添加合生素和抗菌肽可以提高肉仔鸡的饲料转化率;攻菌后,合生素和抗菌肽以及两者联合使用均可以提高肉仔鸡免疫功能。     

Effect of Synbiotic and Antibacterial Peptide on Colibacillosis and Immune Regulation in Broiler Chickens

This experiment was to study the effect of synbiotic and antibacterial peptide on growth performance,and the immune regulation of broiler chickens after the E.coli O78 attack. Totally 100 broilers of health 1-day-old Ross 308 were randomly divided into four treatment groups:Synbiotic group (group S) was fed with basal diet+0.3% synbiotic;Antibacterial peptides group (group AP) was fed with basal diet+0.5% antibacterial peptide; Antibacterial peptide+synbiotic group (group SAP) was fed with basal diet+0.3% synbiotic+0.5% antibacterial peptide;Control group (group C) was fed with basal diet,and the growth performance were determined. At the 14th day,10 chickens from each group were randomly selected for muscle injection with E.coli O78 (the attacked control group was named as model group (group M)),and after 24 h,the morbidity,mortality and immune function of chickens in each group were determined. The results showed that compared with control group,the F/G and ADF of groups S and AP were significantly decreased (P<0.05).Before E.coli O78 attack,the bursa index of group SAP was significantly higher than control group (P<0.05),and other groups had no significant difference (P>0.05);While after the E.coli O78 attack,the thymus,spleen and bursa indexes of groups S and AP were significantly higher than control group (P<0.05),the spleen and bursa indexes of group SAP were significantly higher than control group (P<0.05),and the thymus index showed no significant difference (P>0.05).Compared with the group M,the IgA,sIgA and IL-10 of group S showed no significant difference (P>0.05),while the IL-6 levels decreased extremely significantly (P<0.01);The IgA and IL-6 of group AP were extremely significantly decreased (P<0.01),meanwhile the sIgA and IL-10 were significantly or extremely significantly higher (P<0.05;P<0.01); The changed trend of SAP group was the same as the group AP.In conclusion,the synbiotic and antibacterial peptide could improve the feed conversion rate of chickens and they were used alone or combination all could improved chicken immune function after the bacteria attack.     

Identification and immunogenicity of an immunodominant mimotope of Avibacterium paragallinarum from a phage display peptide library

Avibacterium paragallinarum is the causative agent of infectious coryza. The protective antigens of this important pathogen have not yet been clearly identified. In this paper, we applied phage display technique to screen the immunodominant mimotopes of a serovar A strain of A. paragallinarum by using a random 12-peptide library, and evaluated the immunogenicity in chickens of the selected mimotope. Polyclonal antibody directed against A. paragallinarum strain 0083 (serovar A) was used as the target antibody and phage clones binding to this target were screened from the 12-mer random peptide library. More than 50% of the phage clones selected in the third round carried the consensus peptide motif sequence A-DP(M)L. The phage clones containing the peptide motif reacted with the target antibody and this interaction could be blocked, in a dose-dependent manner, by A. paragallinarum. One of the peptide sequences, YGLLAVDPLFKP, was selected and the corresponding oligonucleotide sequence was synthesized and then inserted into the expression vector pFliTrx. The recombinant plasmid was transferred into an expression host Escherichia coli GI826 by electroporation, resulting in a recombinant E. coli expressing the peptide on the bacterial surface. Intramuscular injection of the epitope-expressing recombinant bacteria into chickens induced a specific serological response to serovar A. A. paragallinarum. The chickens given the recombinant E. coli showed significant protection against challenge with A. paragallinarum 0083. These results indicated a potential for the use of the mimotope in the development of molecular vaccines for infectious coryza.     

柞蚕抗菌肽D基因在酵母中表达的研究

柞蚕抗菌肽具有广谱杀菌功能，人工合成抗菌肽Ｄ基因（１２２ｂｐ）与含α－因子及前导肽序列的穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２重组，克隆于酵母ＡＢ１０３。在缺亮氨酸的ＹＥ培养基中筛选Ｌｅｕ＋阳性的转化子。转化子菌株培养扩增后提取重组质粒与抗菌肽基因片段探针作点杂交为阳性，电泳后插入含抗菌肽Ｄ基因１２８ｂｐ的区带。在转基因酵母的发酵液中分离上清液，浓缩，对抗菌肽敏感的指示菌Ｅ．ｃｏｌｉＫ１２Ｄ３１有明显抑菌效应。证实人工合成柞蚕抗菌肽Ｄ基因在酵母中表达。     

重组鲢鱼抗菌肽parasinⅠ原核表达、纯化与抗菌活性

本文旨在构建抗菌肽parasinⅠ大肠杆菌重组表达载体,表达人工重组parasinⅠ,并检测其抑菌活性。根据parasinⅠ的成熟肽序列和大肠杆菌密码子偏好性,人工合成1段57 bp的基因编码cDNA,通过PCR技术构建大肠杆菌重组表达质粒pET32-ParaⅠ,并在parasinⅠ基因5’-端引入Xa因子酶切位点。重组载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株后,在不同温度(37和20℃)条件下对阳性转化子进行异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果表明:IPTG成功诱导了1个21 ku的融合蛋白表达,重组蛋白占菌体总蛋白质的45%～50%。在低温条件下产生的融合蛋白主要以可溶性形式存在。可溶性重组蛋白经亲和层析纯化后,用Χa因子进行酶切,酶切产物经琼脂孔扩散法抑菌活性检测,结果显示其对金黄色葡萄球菌有一定抑制作用。本试验实现了parasinⅠ的重组表达,表达产物经Χa因子酶切后具抑菌活性。     

家蚕抗菌肽Cecropin-XJ的原核优化表达及活性检测

Cecropin-XJ是一种从家蚕幼虫体内分离纯化的具有很强热稳定性、酸碱适应性和广谱抗菌性的新型家蚕抗菌肽。以融合不同标签的表达载体构建pET28a-Cecropin-XJ、pET30a-Cecropin-XJ、pET32a-Cecropin-XJ、pMAL-p2X-Cecropin-XJ重组质粒,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,并优化诱导时间、诱导温度、诱导剂IPTG浓度等条件,通过对目的蛋白表达的检测分析,选择、建立Cecropin-XJ在大肠杆菌中高效、可溶性表达的技术体系。试验结果表明:采用构建的重组原核表达载体pET32a-Cecropin-XJ在IPTG终浓度为0.8 mmol/L、培养温度为37℃的条件下诱导5 h,目的蛋白的表达量可达10 mg/L,重组蛋白主要以可溶性表达产物形式存在,可溶性蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,经金属螯合层析进一步纯化后的Cecropin-XJ融合蛋白纯度可达90%以上。体外抑菌试验显示Cecropin-XJ融合蛋白对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌活性。     

黄芩抗鸡大肠杆菌作用的研究

通过体外试验和体内试验两种方法研究了黄芩抗鸡大肠杆菌的作用。结果表明，黄芩水煎液对鸡大肠杆菌的最小体外抑菌浓度为2．5g／mL；当药物浓度为5g／mL时可使7日龄雏鸡获得90％以上的攻毒保护；药物浓度为10g／mL时可使100％雏鸡获得攻毒保护，说明黄芩可以对抗鸡大肠杆菌，用于防治鸡的大肠杆菌病。     

抗菌肽Cecropin AD在毕赤酵母中的组成型表达及中试发酵研究

构建表达抗菌肽Cecropin AD蛋白的真核重组表达质粒pGAPZα-A-CAD,并转化酵母菌Pichia pastoris X-33,Zeocin抗性筛选阳性重组子,通过PCR鉴定、Tricine-SDS-PAGE分析和琼脂孔穴扩散法筛选获得抗菌肽CAD组成型表达菌株,并采用pH-溶氧监控策略进行工程菌Pichia pastoris X-33/pGAPZα-A-CAD的50 L中试发酵研究。结果表明,本实验成功实现了抗菌肽CAD在毕赤酵母Pichiapastoris X-33中的组成型表达pGAPZα-A,Tricine-SDS-PAGE分析显示在4.0 kDa处有明显的目的条带,工程菌经50 L发酵罐培养48 h后收获的上清液,100℃热处理10 min后,对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922等均有明显的抑杀作用。抗菌肽的组成型表达方法在本研究中得到了成功应用,中试研究为以后的规模化生产和应用奠定了基础。