羊体外胚胎高效生产技术研究现状

体外胚胎生产技术作为胚胎工程技术的基础,在提高繁殖潜力、加速良种繁育等多方面具有重要意义,包括卵母细胞采集、体外成熟、体外受精、体外胚胎培养等技术。文章主要介绍羊体外胚胎高效生产技术研究现状,分析卵母细胞体外成熟、体外受精、体外胚胎培养影响因素,并提出了羊卵泡的预测标记、卵母细胞新型质检手段、模拟羊体内环境的培养体系,以期为羊卵母细胞体外培养技术的研究及在胚胎高效生产中的应用提供参考。     

细胞因子与激素对山羊胚胎体外生产的影响

随着商业性胚胎移植技术的推广应用和动物胚胎工程技术的深入研究,对胚胎和卵母细胞的需求量日益增加,单靠超排技术获得的胚胎或卵母细胞已远远不能满足科研和生产的需要,因而推动了卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精（IVF）及体外胚胎生产（IVP）等胚胎工程技术的发展。牛体外受精技术日趋成熟,体外胚胎生产已经开始走向生产应用,但山羊体外胚胎的生产效率远落后于牛,且质量不稳定。优化培养条件是提高山羊胚胎生产效率和胚胎质量的关键。文献报道,将胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、白血病抑制因子（LIF）、干细胞因子（SCF）用于绵羊、小鼠等动物的细胞培养研究取得了较理想的效果,但未见将3种成分用于山羊的报道。     

羊卵母细胞核成熟抑制剂及其作用效果的研究进展

羊卵母细胞的体外成熟培养技术(IVM)是体外受精技术和胚胎工程的基础环节.卵母细胞体外成熟培养是指离体条件下的卵母细胞由未成熟状态发育为成熟状态.一般认为,可以把卵母细胞生发泡破裂(GVBD)作为向成熟方向发育的标志.GVBD的主要特征是染色质高度凝集,核仁消失及核膜破裂等[1].GVBD一旦发生,卵母细胞就将向着MⅠ发育并最终发育到MⅡ期、排出第一极体而达到成熟状态[2-3].IVM后卵母细胞可受精分裂成胚胎并移植获得妊娠.卵母细胞成熟优劣对随后受精、胚胎卵裂、囊胚形成均具有重要的影响,是制约体外生产囊胚率和胚胎移植受胎率的关键.生产中可通过卵巢卵母细胞体外培养成熟结合体外受精、胚胎移植等技术,得到大量廉价优质胚胎,为解决胚胎供需不足开辟了一条新的途径.     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

小尾寒羊腔前卵泡体外生长发育的研究

近20年来,胚胎移植、体外受精、核移植、转基因等胚胎工程技术在理论和生产应用上已取得了很大进展.然而,所有这些技术是建立在具有完全发育能力的卵母细胞的基础之上的.大量卵母细胞的体外成熟培养是这些技术的限速步骤之一.目前采用的有腔卵泡卵母细胞的体外成熟和超数排卵,不能提供充足的卵母细胞以支撑胚胎工程技术的进一步发展.此外,卵巢中的卵母细胞绝大多数以无腔的形式存在于卵巢皮质内,有腔卵泡所占比例不到1%,屠宰场屠宰羊只后的卵巢内含有大量的腔前卵泡.如果建立腔前卵泡的体外培养体系,获得大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞,一方面将会最大限度地挖掘保存卵巢上遗传资源;另一方面将极大的促进胚胎工程技术的研究与应用,还有利于研究卵泡和卵母细胞的生长和发育规律.     

影响卵母细胞体外成熟的因素

卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞，同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞体外成熟的影响因素做了简要的论述，主要介绍了卵母细胞来源、其培养系统、激素和生长因子等因素对卵母细胞体外成熟的影响。     

哺乳动物体外受精技术研究进展

随着哺乳动物胚胎工程技术的深入研究及转基因技术、核移植技术、胚胎干细胞技术的建立,对卵母细胞和胚胎的需求量日益增加。因此,建立完全的体外条件下快速生产大量优廉的卵母细胞和胚胎的技术十分必要。体外受精技术是继人工授精、胚胎移植技术之后,哺乳动物繁殖领域的第三次     

卵泡发育和卵母细胞成熟

本文简要叙述了卵泡发生的生理过程。着重讨论了卵泡发生期间的内分泌调节及影响卵母细胞成熟因素的研究现状。随着动物胚胎工程技术的发展，对胚胎的需求日益增多。充分利用卵母细胞的体外成熟和体外受精技术，可提供大量的优质胚胎。卵母细胞体外成熟的历史已有三十余年，并已在小鼠（１９６５）、大鼠（１９７４）、仓鼠（１９９３）、兔（１９８７）、猪（１９８６）、山羊（１９８４）、绵羊（１９７８）、牛（１９６５）、恒河     

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状

猪卵泡卵母细胞体外成熟研究现状孟庆刚李光鹏曹允考（东北农业大学动物科学系１５００３０）１引言随着哺乳动物胚胎工程技术的发展，人们对猪卵母细胞体外成熟的研究也取得了很大的进展。关于猪卵母细胞体外成熟的理论和培养技术也日渐成熟。相信随此项技术的发展，人们...     

哺乳动物小腔卵泡的体外发育

随着胚胎工程技术和辅助生殖技术的发展,对胚胎数量、质量要求都在增加。超数排卵、卵母细胞体外成熟等增加了卵母细胞利用率,但卵巢内大腔卵泡非常有限。因此小腔卵泡作为一种巨大的卵母细胞来源越来越受到众多学者关注。研究小腔卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精发育机制,有利于提高小腔卵泡卵母细胞的发育力。     

卵母细胞成熟及其成熟调控因子

卵母细胞成熟过程是个复杂的减数分裂过程,许多因子参与这个过程的调控.为了探讨哺乳动物卵母细胞体外成熟的机理,指导家畜体外胚胎生产,本文就卵母细胞体外成熟培养(in vitro maturation IVM)及影响因子等方面进行综述.认为在卵母细胞体外成熟过程中,仍需对胞质成熟、基因调控及影响因子等方面进行深入研究.     

微流体技术在家畜体外胚胎生产中的应用进展

体外胚胎生产技术是提高良种家畜繁殖效率的关键核心技术之一。然而，由于体内、外环境差异造成的卵母细胞成熟质量差、体外胚胎发育率低等问题严重制约了该技术的产业化应用。微流体技术是利用尺寸为几十到几百微米的微通道精确控制和操纵亚微米结构流体的科学与技术，由于其具有样品消耗少、分析速度快、高通量和高集成化等特点，正广泛应用于化学、医学、生命科学等领域。在家畜体外胚胎生产若干技术环节中，微流体技术显示出巨大的应用前景。本文综述了微流体技术在卵母细胞选择培养、精子分选、体外受精、体外胚胎培养以及配子和胚胎超低温冷冻保存中的应用进展，为提升家畜体外胚胎生产效率提供新思路。     

山羊卵母细胞体外培养体系及冻存后体外培养的研究

随着哺乳动物胚胎工程技术的深入研究和商业化胚胎移植技术的快速发展,对卵母细胞的需求量急剧增加。而冷冻的卵母细胞可为胚胎工程技术研究提供方便、丰富的材料来源。试验以屠宰场云岭黑山羊卵巢卵母细胞为实验材料,研究冷冻后的山羊卵母细胞体外培养体系。结果表明,采用传统成熟培养液（OM＋10%FBS）与在其中添加1%ITS（OM＋10%FBS＋1%ITS）对卵母细胞培养成熟率无显著差异（71.6%vs 76.2%）,而孤雌激活的卵裂率差异显著（60.5%vs 71.5%）。用优化的卵母细胞成熟体系培养解冻后的GV期COCs,成熟率31.5%;用添加有ITS和EGF的胚胎培养液培养解冻后GV和MII期孤雌激活的卵母细胞,其卵裂率分别为35.6%、58.4%,差异极显著（P〈0.01）。     

小型猪克隆胚胎体外培养阶段的优化

本试验从卵母细胞卵丘多少和初次卵裂时间早晚2个方面进行研究,旨在改善小型猪克隆方案的体外培养环节,提高克隆效率。将卵母细胞按卵丘多少分成3组,比较卵母细胞的成熟效果,取成熟效果好的卵母细胞进行后续试验;PA和SCNT试验均按初次卵裂时间早晚分成3组,在体外培养条件下,比较胚胎的卵裂率和囊胚率。结果表明,卵丘多的卵母细胞体外成熟39～40 h和卵丘少的卵母细胞体外成熟41～42 h,比不区分卵丘多少的卵母细胞体外成熟39～42 h的成熟效果要好;初次卵裂时间发生在26 h以前的胚胎比26 h之后的胚胎在数量和质量上都明显优越,前者胚胎的卵裂率和囊胚率显著高于后者,此结果在孤雌激活(parthenogenetic,PA)胚胎和体细胞核移植(somatic cell nucleartransfer,SCNT)胚胎的体外试验中均得到验证。本研究完善了小型猪克隆方案的体外培养环节,为器官异种移植提供相关技术参考。     

雪龙黑牛试管胚胎产业化生产培养方法的建立

为充分利用雪龙兼松屠宰场废弃的优秀母牛卵巢,加速雪龙黑牛培育进程,满足高档牛肉市场需求,本文对胚胎生产体外受精3个关键技术环节进行了试验研究,共做了15批次试验,包括卵母细胞体外成熟培养的试验研究,卵母细胞体外受精试验研究以及受精卵体外培养试验研究。结果显示,卵母细胞的成熟率达98.6%,卵裂率为86.5%,囊胚发育率为36.8%。初步建立了一整套雪龙黑牛试管胚胎产业化生产培养方法和技术。     

OPU卵母细胞体外成熟体系的优化研究进展

近年来，体外胚胎生产(in vitro embryo production, IVP)技术取得了很大进步，尤其是卵母细胞活体采卵(ovum pick-up, OPU)技术得到广泛应用。OPU是20世纪90年代发展起来的一项新型的能获得优秀种母牛卵母细胞的技术，该技术在动物胚胎生产和发育机理研究及人类辅助生育技术临床实践中有着广阔的应用前景。可以提高种母畜和珍贵野生动物的资源保护效率，提高优良母畜的遗传潜力，为奶牛生物技术发展提供必要的支撑技术。卵母细胞的质量是IVP系统取得成功的关键，卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation, IVM)是成功受精和胚胎发育必不可少的步骤。卵母细胞IVM完成了卵母细胞的细胞质和核成熟，准备了发育至胚胎基因组激活所必需的所有必要成分。但体外成熟的卵母细胞发育能力低于体内成熟卵母细胞，卵母细胞减数分裂和细胞核质成熟不同步，氧化应激损伤等对卵母细胞成功受精和胚胎发育非常重要，因此，需要进一步提高卵母细胞体外成熟能力，以改善牛体外胚胎生产系统。本文从卵母细胞体外成熟面临的核质成熟不同步，氧化应激等问题进行概述，同时，叙述C型钠肽、褪黑素、FLI...     

青春期前山羊卵母细胞体外生产胚胎的研究进展

青春期前卵母细胞的来源广泛,作为体外胚胎生产的试验材料,国外这方面的研究报道较多。作者就青春期前山羊卵母细胞体外成熟、成熟后细胞质中细胞器的变化情况、体外受精技术和胚胎体外培养等方面研究情况作一综述,供研究者参考。     

诱导猪卵母细胞体外成熟因素的研究进展

<正>卵母细胞的体外成熟(in vitro maturation,IVM)是指在体外人工设定的条件下,卵母细胞经过一系列的生长发育最终形成具有受精能力的成熟卵母细胞的过程。哺乳动物卵母细胞的体外成熟培养是胚胎体外生产的基础环节。1卵巢获取通常卵巢从屠宰场获取,用含双抗的磷酸盐缓冲液(PBS)或生理盐水在尽可能短的时间内运回实验室。卵巢的保存温度及贮存时间影响卵母细胞的体外成熟。E.M.Walters等[1]研究了不同保存温度及不同贮存时间对猪卵母细胞体外成熟的影响,结果发     

高效肉羊体外胚胎生产技术的研究

本文阐述了高效肉羊体外胚胎生产技术的意义、存在的问题和研究内容。介绍了卵母细胞的获取方法、卵母细胞的体外成熟、精子的体外获能和受精、胚胎的体外培养、胚胎移植。     

共培养体系对哺乳动物卵母细胞体外成熟影响的研究进展

卵母细胞体外成熟是进行体外胚胎生产的关键环节,但目前哺乳动物卵母细胞体外成熟培养存在成熟率低、受精率低和胚胎质量差等问题。卵母细胞体外成熟培养体系是制约卵母细胞体外成熟效果的重要因素,共培养体系可提高哺乳动物卵母细胞体外成熟效率。本文主要从卵母细胞成熟与卵泡细胞共培养、与裸卵共培养和与间充质干细胞共培养3个方面综述共培养体系对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响,为共培养体系应用于卵母细胞体外成熟提供理论依据和研究借鉴。