大豆不同器官中的RNA的提取分析

从植物组织中提取高质量的RNA是进行基因克隆和基因表达分析的基础.同种植物不同器官的组织由于组成成分的差别,其RNA的提取有不同的难点.本文分别采用异硫氰酸胍法、改进的异硫氰酸胍法提取了大豆的根、茎、叶、胚芽等不同器官的RNA,结果发现异硫氰酸胍法适合根和茎的RNA提取,改进的异硫氰酸胍法不仅适合根与茎的RNA提取,还适于胚芽RNA的提取.而两种方法对从叶中提取RNA则均不是很理想.     

一种从花生种子中提取RNA的改进方法

花生种子中富含蛋白质、多糖和酚类化合物,从而增加了从中提取RNA的难度。作者通过实验对几种方法做了比较,并对其中的异硫氰酸胍方法稍做改变,结果得到的RNA产率较高,质量好,符合分子生物学实验要求。     

一种适用于油菜、大豆、花生、芝麻四种油料作物种子的RNA提取方法

本研究在商业化RNA提取试剂盒的基础上,通过以下3方面的改进使之成功应用于油菜、花生、芝麻和大豆的各个时期的种子RNA提取。1）增加抗氧化剂巯基乙醇和PVP;2）根据不同作物的油脂含量调整氯仿的比例;3）改进RNA沉淀方法。与常规的CTAB、TRIZOL及文献报道的RNA提取方法比较结果显示,本方法提取的RNA在完整性、得率及质量上都优于上述方法,并成功应用于后期荧光定量表达分析。FAD2基因在四种作物种子不同发育时期的差异表达结果进一步证明了此方法的有效性。     

CTAB法提取花生总DNA在SSR和SRAP中的扩增效果

本试验采用相对简单快捷的CTAB法提取花生总DNA,并应用于SSR和SRAP扩增分析,结果表明,所提取花生DNA中RNA含量高,但完全可以满足SSR标记和SRAP标记分析要求.     

花生种子霉捂后诱发茎腐病的研究

花生茎腐病,是我国北方花生产区的一种重要病害,调查证明花生种由于收刨、晾晒不及时或贮藏保管不当,造成霉捂,是诱发花生茎腐病发病的主导因素,因此,群众有“种子捂了死到老”的说法。霉捂的花生种为什么能加重茎腐病的发生,其发病机理尚不清楚.为此,我们对花生种霉捂后诱发花生茎腐病的机制作了进一步的研究,现将结果报导如下:一、材料和方法(一)霉捂花生种带菌量的测定1、材料:供试品种,两年均用伏花生.1977年,试验用霉捂花生系临沭县夏庄公社农技站提供,对照种(不霉捂,下     

条锈菌诱导下的小麦叶片总RNA提取方法的比较及LD-PCR扩增

为寻找一种既能提取到高质量高产量小麦RNA、又能提取到高质量条锈菌RNA的方法,利用Trizol法、Licl法、SDS法和Bizol法分别从条锈菌诱导的小麦叶片中提取了总RNA,并对Trizol法和Bizol法提取的RNA进行了长距离PCR(LD-PCR)扩增.结果表明,Trizol法、Licl法、SDS法和Bizol法提取的RNA产量(μg/100 mg鲜重叶片)分别为4.72、1.15、1.56、10.43 μg/100 mg,Trizol法和Bizol法提取的RNA产量明显高于Licl法和SDS法.Trizol法提取的RNA合成的cDNA片段大小主要集中在0.25～2.0 kb范围内,而Bizol法提取的RNA合成的cDNA片段大小主要集中在0.5～5.0 kb范围内,Bizol法提取的RNA反转录合成的cDNA质量好于Trizol法.Bizol法同样能提取到高质量的条锈菌RNA,而且提取RNA的成本较低.综合各种因素,Bizol法是条锈菌诱导下的小麦叶片总RNA提取的较理想方法.     

一种快速大量提取禾谷类作物幼苗期总RNA的方法

为探索一种快速、大量提取禾谷类作物总RNA的方法,利用改良的热酚法提取禾谷类作物(玉米、水稻和小麦)幼苗期不同组织的总RNA,该方法在2.5 mL的离心管中进行,在提取缓冲液中增加了巯基乙醇,对传统的操作步骤进行了优化.提取的RNA质量较高,纯度检测表明RNA样品OD260/OD280在1.8～2.1之间,含量约为10 μg/μL.RT-PCR和Northern杂交结果表明RNA可以满足进一步分子操作的需要.     

橡胶树胶乳RNA简易提取和保存方法的比较探索

针对巴西橡胶树胶乳RNA的提取方法存在操作复杂、步骤多、时间长、保存条件要求苛刻等问题以及橡胶树胶乳远距离、长时间采样的诸多不便等问题，介绍一种具有操作简单、实验时间短、步骤少等优点的简易巴西橡胶树胶乳RNA提取方法和一种适于长时间保存胶乳的方法。该方法仅仅以DEPC水为提取液，提取的RNA浓度可以达到为0.722 μg/mL，纯度OD260/OD280在2.0～2.2之间，总RNA提取量为36.1 μg/mL，可以满足后续分子生物学实验RT-PCR和RACE的要求；对在冰上保存1～10 d的胶乳提取RNA，浓度在0.502～0.722 μg/mL之间，OD260/OD280在1.8～2.4之间，总RNA的提取量在20.8～35.44 μg/mL之间。     

三裂叶蟛蜞菊对花生化感作用的生理生化机理

三裂叶蟛蜞菊(WedeliatrilobataL.)是华南地区的重要杂草和园林绿化植物。本文研究了三裂叶蟛蜞菊水提液对花生种子萌发和幼苗生长过程中一些生理过程的影响。结果表明,三裂叶蟛蜞菊各器官水提液浸种显著降低了萌发花生种子过氧化物酶活性和脂肪酶活性,提高了质膜透性,进而使萌发花生种子的活力和呼吸速率显著降低。其中三裂叶蟛蜞菊根、茎、叶和全植株水提液使萌发花生种子过氧化物酶活性分别降低了32.80%、39.48%、32.37%和34.40%,使脂肪酶活性分别降低了21.19%、26.69%、24.15%和22.88%。在花生植株幼苗生长过程中,喷淋三裂叶蟛蜞菊各器官水提液极显著地降低了花生根系干物重、单株根瘤数、叶片叶绿素含量、净光合速率和单株干物重;其中三裂叶蟛蜞菊叶水提液分别使花生叶片叶绿素含量、净光合速率和单株干物重降低31.95%、32.65%和37.93%。喷淋三裂叶蟛蜞菊各器官水提液还极显著地抑制了花生氮素代谢中两种关键酶—硝酸还原酶和谷氨酰胺合成酶的活性,使叶片全氮含量有所下降。三裂叶蟛蜞菊各部分水提液对萌发花生种子化感作用的大小顺序是:茎>叶>全株>根系;而对花生幼苗,化感作用的大小顺序则是:叶>茎>全株>根系。     

提取高质量茶树总RNA的方法研究

由于茶树富含多糖、多酚，从茶苗组织中尤其是从茶苗的根中提取高质量的RNA较为困难，试用了多种方法都未能获得高质量的RNA。借鉴多年生的草本植物RNA提取方法——cTAB法，并在此基础上进行改进，首次提取了茶苗嫩根中的总RNA。电泳检测显示，该方法提取的总RNA28S和18S条带清晰且28S较18S条带亮，紫外光谱分析显示A260/A280的比值为1．93。用于RT—PCR反应，成功克隆了492bp的谷氨酰胺合成酶基因片段，说明该方法提取的RNA纯度和完整性好。