栽培大豆品种间RAPD标记的多态性分析及聚类分析

应用从６０００多份大豆种质资源中筛选的２１个抗大豆花叶病毒病的品种或品系及７个感病的品种或品素,选用２０个随机引物,对总ＤＮＡ进行了随机扩增。有１８个引物扩增得得到了稳定的ＲＡＰＤ图谱。ＯＰＨ－０６和ＯＰＨ－１０未能扩增到ＲＡＰＤ产物。     

甘蓝型油菜核不育基因的RAPD标记

用Ｏｐｅｒｏｎ公司ＯＰＡ－０１－ＯＰＪ－２０ ２００个１０碱基对随机序列引物对甘蓝型油菜隐性核不育株涪优Ａ和可育株涪优Ｂ、显性核不育株３７Ａ和可育株３７Ｂ、广恢系ＤＧＣＲ９８－３７５２、ＲＧＣＲ９７－１及Ｆ１材料基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增,共获得１３３４条扩增带,平均每引物扩增带约６．７条扩增带表明甘蓝型油菜存在遗传多样性,引物ＯＰＡ－０５、ＯＰＡ－０９、ＯＰＡ－１２、ＯＰＡ－１３、ＯＰＡ－２０     

RAPD在玉米温敏型核雄性不育研究中的应用

对适用于玉米的ＲＡＰＤ实验体系进行研究,摸索出适用于玉米的ＲＡＰＤ的反应适宜条件闻稳定的玉米ＲＡＰＤ分析体系,应用这一体系对温敏核雄性不育玉米琼４２－Ｑｍｓ及其可育的近等基因系琼４２进行ＲＡＰＤ分析,在３００多个引物中发现１个引物在两种中扩增带型有差异,经重复试验,初步认为此差异与玉米雄性不育基因连锁。     

油梨基因组DNA的提取及RAPD分析

用改进的ＳＤＳ法提取油梨基因组ＤＮＡ,即在细胞核被裂解之前,先去除细胞质中的酚类物质和蛋白质,然后用ＳＤＳ裂解细胞核,异丙醇和乙醇沉淀ＤＮＡ,成功地从油梨叶片中提取和纯化了ＤＮＡ。以１０个油梨品种的基因组ＤＮＡ为模板,４０个随机引物进行ＲＡＰＤ分析,结果表明,大部分引物可以在不同模板上扩增出条带,但仅有７个引物可以同时在１０个品种的油梨ＤＮＡ上扩增出条带;用ＲＡＰＤ结果对１０个油梨品种进行聚类分析,基本符合传统分类观点。     

海南主栽芒果品种基因组DNA的RAPD分析

采用６个随机引物对海南岛主栽的１０个芒果品种进行ＲＡＰＤ研究,共扩增出３２５个ＤＮＡ片段,其中清晰可辨,重复的有２０１条,占６１％;检测出不同品种的ＲＡＰＤ标记,计算了各品种间的相似系数;初步确立了ＲＡＰＤ技术进行芒果ＤＮＡ指纹图谱构建的研究体系。     

苎麻不同基因型亲缘关系的RAPD分析

对苎麻栽培种６个抗旱性较强的基因型及６个抗旱性较弱的基因型,选用２５个随机引物,对总ＤＮＡ进行了随机扩增。有１２个引物扩增得到了稳定的ＲＡＰＤ图谱;扩增出的片段的分子量在０．６Ｋｂ－５．１５Ｋｂ之间;随机引物扩增出的条带数在３－１５条之间,共扩增出９０个条带;采用系统聚类法中的中间距离法,对１２个基因型两两相似系数聚类分析生成树状图谱,将１２个基因型聚成两类三组,直观地揭示了苎麻基因型间亲缘关系。     

吉林省大豆骨干亲本及主推品种DNA指纹图谱的构建

以６４份吉林省大豆骨干亲本及主推品种为试材,利用ＲＡＰＤ分子标记技术,经过１４０个引物的重复筛选,构建了一套完整的ＤＮＡ指纹图谱,其中ＯＰＡ－０４能区分４０份材料,结合引物ＯＰＧ－０７、ＯＰＯ－１１、ＯＰＦ－１４的扩增结果即可完全区分供试６４份材料。聚类分析表明,具有相同骨干亲本的育成品种遗传距离较近,这与以往的农艺性状研究及生理生化研究结论相符。     

美国大豆育种研究新进展

美国大豆育种研究新进展邱丽娟（中国农科院作物品种资源研究所）ＮＥＷＡＤＶＡＮＣＥＳＩＮＴＨＥＳＴＵＤＲＳＯＹＢＥＡＮＢＲＥＥＤＩＮＧＯＦＵ．Ｓ．Ａ．￥ＱｕＬｉｊｕａｎ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｒｏｐＧｅｒｍｐｌａｓｍＲｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ...     

抗真菌蛋白Rs—AFPs基因克隆与序列分析

从开花后５０－９０ｄ的萝卜种子中提取总ＲＮＡ,逆转录合成ｃＤＮＡ第一链,通过ＰＣＲ反应,得到Ｒｓ－ＡＦＰ１和Ｒｓ－ＡＦＰ２基因扩增产物。采用Ｔ－载体克隆技术,将二分别插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ／ＥｃｏＲＶ－Ｔ克隆载体,得到重组质粒ｐＧＲ－１和ｐＧＲ－２用其转化宿主菌Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５α,从阳性菌落制备测序用质粒ＤＮＡ样品,在ＡＢ１３７０Ａ ＤＮＡ测序仪上测序。     

RAPD分子标记在玉米自交系种群关系研究中的应用

通过１７个随机引物的ＰＣＲ扩增结果,得到２４个玉米自交系的ＲＡＰＤ指纹图谱。根据扩增带建立０、１型数据,采用离差平方和法聚类,建立它们的亲缘关系图,根据ＲＡＰＤ标记建立的亲缘关系图与已知系谱的亲缘关系基本一致。     

稻瘟病菌生理小种RAPD分析及其与马唐瘟的差异

氯化卞法微量提取稻瘟病菌７个生理小各和马唐瘟病菌基因组ＤＮＡ，用６０个随机引物进行ＰＣＲ扩增，其中２１个引物的特异性扩增条带，第一引物－菌系组合扩增到３－１９条，平均１０．３条；其中有多态性条速为１－１２条，平均６．１条，多态性为６１．１％。说明稻瘟病菌群体有丰富的ＲＡＰＤ多态性。引物ＯＰＨ１、ＯＰＨ２，ＯＰＨ４，ＯＰＨ１３，ＯＰＨ１４，ＯＰＫ１４等扩增的条带多，多态性丰富，而且可以有效地区分稻瘟     

大豆疫霉菌遗传多样性的RAPD分析

利用随机扩增DNA (RAPD)技术分析了15个大豆疫霉菌( Phytophthora sojae)的遗传多样性,并同其它7 个疫霉种的8个菌株进行了比较。运用筛选出的12个引物共获得152个RAPD标记,其中84. 2%具有多态性。通 过聚类分析结果表明,疫霉属种间的遗传相似系数的变化幅度为0. 533～0. 783,大豆疫霉菌与其它几种疫霉的遗 传距离相对较远,用引物OPB06扩增到P. sojae种特有的一个RAPD标记; P. sojae种内菌株间遗传相似系数的变化 幅度为0. 855～0. 967,亦存在较丰富的遗传多样性,该遗传多样性与菌株毒力之间有一定相关性,而与菌株地理来 源没有相关性。     

1个与卡瓦胡椒特异的SCAR标记的获得

采用6份卡瓦胡椒材料、21份栽培胡椒和野生胡椒材料、1份不同属的草胡椒材料共计28份试验材料,在对它们进行了RAPD研究的基础上,进行了SCAR分子标记研究。设计1对卡瓦胡椒特异SCAR引物P8.1和P8.2,用这对特异引物对本次试验的28份材料进行PCR扩增,结果只有6份卡瓦胡椒材料扩增出了预期大小355bp的特异带,其它材料均无任何扩增。这说明引物P8.1和P8.2为卡瓦胡椒特异SCAR引物,这对卡瓦胡椒种质资源的鉴定有一定帮助。     

大豆抗旱种质资源遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD技术对45个不同抗旱程度的大豆种质进行遗传多样性分析.从115条随机引物筛选出10条重复性好、扩增条带清晰的引物,然后对45个品种基因组DNA进行扩增,结果共扩增出86条片段,其中同源片段17条,占带总数的19.8%,多态性片段69条,占片段总数的80.2%,平均每条引物扩增出多态性片段6.9条,大部分片段介于200～2000 bp之间.利用NTSYS-Pc软件计算品种间遗传相似系数(GS)和遗传距离(GD),45个品种之间的遗传相似系数介于0.3818～0.9038之间.在GD=0.38处,将45份抗旱性不同的大豆品种分成3大类,第一类有40个品种,占品种总数的90%,第二类包含2个品种,分别是低抗旱的6178和不抗旱的大白眉,第三类有3个品种,分别是不抗旱的Fayette、牛毛黄和90～1105.在GD=0.29处,第一大类群又按照抗旱性的高低分别聚成高抗旱、中抗旱、低抗旱、不抗旱等10个亚类群.聚类结果反映出品种间关系与地理起源、表型形态等具有一定的相关性.     

21份不同木质素含量的苎麻的RAPD聚类分析

利用RAPD分析构建了苎麻属植物21份木质素含量不同材料的指纹图谱，从150个随机引物筛选出清晰且多态性高的15个引物，共扩增出85条DNA片段，其中特异性带68条，占80％。同时对退火温度进行了优化，反应条件稳定，重复性好。采用UPGMA法对21个品种扩增的谱带进行遗传聚类分析，在D=0．0760处可分为三类8组，可说明供试品种的亲缘关系。     

汕优63杂合性的RAPD和AFLP分析

 利用57个RAPD引物和15个AFLP引物分析了明恢63与珍汕97A之间1209个位点的杂合性。结果表明,57个RAPD引物能扩增出394条带,平均每个引物扩增6.9条,多态性带129条,汕优63的杂合性为32.74%;15个AFLP引物共扩增出815个位点,平均每个引物扩增54.33条,多态性带289条,汕优63的杂合性为35.46%。1209个位点显示汕优63的杂合性为34.57%。     

Evaluation of genetic diversity in turmeric (Curcuma longa L.) using RAPD and ISSR markers

Turmeric (Curcuma longa L.) is an industrially important plant used for production of curcumin, oleoresin and essential oil. In the present study we examined the genetic diversity among turmeric accessions from 10 different agro-climatic regions comprising 5 cultivars and 55 accessions. Two DNA-based molecular marker techniques, viz., random amplified polymorphism DNA (RAPD) and inter simple sequence repeat (ISSR) were used to assess the genetic diversity in turmeric genotypes. A total of 17 polymorphic primers (11 RAPDs and 6 ISSRs) were used in this study. RAPD analysis of 60 genotypes yielded 94 fragments of which 75 were polymorphic with an average of 6.83 polymorphic fragments per primer. Number of amplified fragments with RAPD primers ranged from 3 to 13 with the size of amplicons ranging from 230 to 3000 bp in size. The polymorphism ranged from 45 to 100 with an average of 91.4%. The 6 ISSR primers produced 66 bands across 60 genotypes of which 52 were polymorphic with an average of 8.6 polymorphic fragments per primer. The number of amplified bands varied from 1 to 14 with size of amplicons ranging from 200 to 2000 bp. The percentage of polymorphism using ISSR primers ranged from 83 to 100 with an average of 95.4%. Nei's dendrogram for 60 samples using both RAPD and ISSR markers demonstrated an extent of 62% correlation between the genetic similarity and geographical location. The result of Nei's genetic diversity (H) generated from the POP gene analysis shows relatively low genetic diversity in turmeric accessions of South eastern ghat (P7), Western undulating zone (P8) with 0.181 and 0.199 value whereas highest genetic diversity (0.257) has been observed in Western central table land (P9). Knowledge on the genetic diversity of turmeric from different agro-climatic regions can be used to future breeding programs for increased curcumin, oleoresin and essential oil production to meet the ever-increasing demand of turmeric for industrial and pharmaceutical uses.     

文心兰品种变异RAPD分子检测技术的建立及应用

通过对DNA提取方法的改良,随机引物的选择、RAPD反应条件的筛选,建立文心兰品种变异RAPD分子标记检测技术。利用该技术对3个母本园品种和1个试管苗品种进行RAPD检测,结果是品种“黄金2号”和“黄金3号”未发现变异;7个引物对品种“新奇士”共扩增出63条清晰带,3个样品带型发生变化,样品变异率为10%;14个引物对“黄金2号”试管苗共扩增出119条清晰带,9个样品带型发生变化,样品变异率为9.4%。结果表明,该技术能有效用于文心兰品种的变异检测。     

RAPD和SSR标记检测海南普通野生稻籼粳分化的比较研究

应用RAPD和SSR分子标记技术分别对来自海南省的51份普通野生稻样品籼梗分化情况进行研究.结果表明,40条RAPD引物中筛选出具有多态性的引物15条,共扩增出具有多态性标记位点96个,占总位点的78.05%,所用引物多态性信息量(PIC)平均值为0.720.28对SSR引物中筛选出条带清晰且多态性高的22对引物,共扩增出188个标记位点,其中172个具有多态性,占总位点的92.10%,SSR引物的PIC平均值为0.794.显然,SSR检测出多态性条带的能力优于RAPD.RAPD和SSR标记的分子聚类获得了趋势相近但不完全相同的聚类树状图.聚类结果表明.2种标记均揭示了海南普通野生稻具有一定程度的籼粳分化.其中偏粳多于偏籼.本研究为进一步明确海南普通野生稻在中国栽培稻起源演化上的地位.并对海南普通野生稻资源的发掘利用提供理论依据.