化学发光酶免疫法检测盐酸克伦特罗残留

优化了化学发光酶免疫法(chemiluminescent enzyme immunoassay,CLEIA)检测盐酸克伦特罗(clenbuterol)的方法.论文对检测方法的反应时间、温度、缓冲体系的pH值、离子强度、Tween-20的浓度等参数进行了优化,该方法的线性检测范围可达到0.04～42.5 μg·L-4,IC50值为1.46 μg·L-1,理论检测限为0.0014 μg·L-1.批内批间变异系数均小于10%,回收率在95%～110%之间,同时有较高的特异性.优化后的检测方法完全符合盐酸克伦特罗残留检测的要求.     

化学发光免疫分析与酶联免疫分析法检测水产品药物残留的比较研究

对检测水产品中呋喃唑酮代谢物( AOZ)和氯霉素( CAP)药物残留的两种方法---化学发光免疫分析( CLEIA)和酶联免疫分析( ELISA)法进行了比较研究。结果表明：两种药物残留检测中, CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两种免疫分析法的添加回收率均具有很好的相关性;用CLEIA法检测AOZ的检出限为0.01μg/kg,线性范围为0.01~2.56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.025~6.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.10~1.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.05~4.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数( RSD)为5.5%~11.3%,批间RSD为12.3%~20.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%~11.1%,批间RSD为15.6%~18.3%。研究表明,用CLEIA法检测水产品药物残留较ELISA法检出限低、线性范围宽,虽然检出CAP和AOZ的变异系数均高于ELISA法,但仍符合《兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案参考评判标准》的规定。     

化学发光免疫分析与酶联免疫分析法检测水产品药物残留的比较研究

对检测水产品中呋喃唑酮代谢物(AOZ)和氯霉素(CAP)药物残留的两种方法——化学发光免疫分析(CLEIA)和酶联免疫分析(ELISA)法进行了比较研究。结果表明:两种药物残留检测中,CLEIA分析方法的线性范围和检出限均优于ELISA法,且两种免疫分析法的添加回收率均具有很好的相关性;用CLEIA法检测AOZ的检出限为0.01μg/kg,线性范围为0.01².56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.0252.56μg/kg,检测CAP的检出限为0.016μg/kg,线性范围为0.025⁶.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.106.400μg/kg;用ELISA法检测AOZ的检出限为0.1μg/kg,线性范围为0.10¹.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.051.62μg/kg,检测CAP的检出限为0.05μg/kg,线性范围为0.05⁴.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数(RSD)为5.5%4.05μg/kg;用CLEIA法检测CAP的批内变异系数(RSD)为5.5%¹1.3%,批间RSD为12.3%11.3%,批间RSD为12.3%²0.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%20.9%,检测AOZ的批内RSD为6.6%¹1.1%,批间RSD为15.6%11.1%,批间RSD为15.6%¹8.3%。研究表明,用CLEIA法检测水产品药物残留较ELISA法检出限低、线性范围宽,虽然检出CAP和AOZ的变异系数均高于ELISA法,但仍符合《兽药残留酶联免疫试剂(盒)备案参考评判标准》的规定。     

糙米、土壤和田水中三唑磷残留的化学发光酶免疫分析方法

建立三唑磷间接竞争化学发光酶免疫法(indirect competitive chemiluminescent enzyme immunoassay,icCLEIA).以鲁米诺和过氧化氢作为化学发光底物,通过对工作浓度、化学发光增敏液、反应缓冲液、有机助溶剂与浓度等条件的优化,确立方法的最佳工作条件.该方法对三唑磷检测线性范围为0.097~12.5ng/mL,IC50为1.23ng/mL,检出限可达0.14ng/mL.将优化的方法应用到稻田水样、土样、糙米样品中三唑磷残留检测,样品的添加回收率为67%~113%,变异系数为0.08%~24.53%.研究表明该方法可用于上述样品中三唑磷残留的快速检测,并可为三唑磷化学发光试剂盒的开发应用提供依据.     

酶联免疫技术在快速检测牛肉、蜂蜜中氯霉素残留的应用

采用酶联免疫试剂盒及绘制以氯霉素浓度为半对数坐标的标准曲线图对牛肉和蜂蜜中的氯霉素残留量进行测定,变异系数为3.1%~8.6%,精确度比较高,重复性比较好;加标回收率牛肉分别为60%、90%,蜂蜜分别为87%、90%。     

酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量

[目的]探索水产品中氯霉素残留量的快速检测方法。[方法]采用酶联免疫法(ELISA)测定鱼、虾类水产品中氯霉素的残留量。[结果]检测的20个水产品中有1个阳性样品,其他样品均为阴性。ELISA方法的检出限为0.01μg/kg,平均回收率为76.1%~90.7%,相对标准偏差(RSD)≤3.21%,在0.025~1.600 ng/ml范围内有良好的线性关系,相关系数为0.997 5。[结论]该检测方法灵敏度、准确度和精密度均符合残留分析质量控制的要求,适用于大批量水产品中氯霉素残留的快速检测。     

磁性化学发光酶免疫法检测猪肉中的磺胺类药物

以磁性微球为固定相,建立了检测猪肉中的磺胺类药物含量的化学发光酶免疫法。此方法为在微孔中加入羊抗兔磁性微球、样品、抗体和酶标抗原反应30min后,清洗磁珠,加入发光液10min后分析测定。通过酶标抗原量、抗体量和反应模式的优化,成功建立了一种高灵敏度的检测猪肉中磺胺类药物的磁性化学发光方法。该方法的检出限为0.26μg/kg,回收率81.21%~97.82%之间,相对标准偏差小于9.48%。     

酶联免疫吸附试剂盒与免疫金标快速检测试纸检测氯霉素的比较

应用英国RANDOX的ELISA试剂盒和免疫金标试纸同时检测10份虾样,阳性率均为10%,两种方法都具有微量、特异、准确的优点。前者需要有酶标仪等仪器,试验时间长、成本高,但能用准确的数字表达抗体水平;后者不需要特殊仪器设备,试验时间短、成本低,适用于企业自检和大批量样品筛选。     

应用酶联免疫技术检测蜂蜜中氯霉素残留

积极应对各国技术壁垒 ,探索用酶联免疫技术 ( Elisa) ,检测陕西省出口蜂蜜中氯霉素( Chloramphenicol— CAP)残留含量 ,以推动蜂蜜的出口     

用酶联免疫法测定虾蟹中残留的氯霉素

采用酶联免疫法测定了南美白对虾Penaeus vannam ei和中华绒螯蟹Eriocheir sinensis中残留的氯霉素。比较了用不同方法处理样品对检测结果的影响,通过对检测范围、精密度、回收率等项目的测定,验证了该方法的可靠性。结果表明:氯霉素标准液为50⁴050 ng/L时,具有良好的线性关系;板间变异系数小于16.4%,样品测定的变异系数为9.4%4050 ng/L时,具有良好的线性关系;板间变异系数小于16.4%,样品测定的变异系数为9.4%¹3.8%;用乙腈水溶液方法提取的回收率(84%13.8%;用乙腈水溶液方法提取的回收率(84%¹16%)比用乙酸乙酯提取的回收率(62%116%)比用乙酸乙酯提取的回收率(62%⁹2%)高。     

猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎双重一步法RT-PCR诊断试剂盒的研制

根据GenBank中的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF7N基因、猪乙型脑炎病毒（JEV）NS1基因序列,设计了2对引物,通过反应条件的优化,成功研制了检测PRRSV和JEV的双重一步法RT-PCR诊断试剂盒,扩增产物分别为245、504 bp。敏感性、 特异性结果显示,该RT-PCR诊断试剂盒对2种病毒的最低核酸检测量分别为PRRSV0.2ng/L、JEV 0.4ng/L,而对猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒的扩增结果均为阴性。对52份疑似病猪样品的检测结果表明,该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒检测结果与单一PCR检测结果完全符合。结果表明该双重一步法RT-PCR诊断试剂盒具有很好的特异性和敏感性,可用于临床猪繁殖与呼吸综合征和猪乙型脑炎的检测。     

猪脑心肌炎病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用

【目的】实现快速、准确地对猪脑心肌炎进行临床诊断和病原学检测。【方法】根据GenBank中已发表的猪脑心肌炎病毒（EMCV）3D基因序列设计合成1对特异性引物,优化反应条件,建立了EMCV一步法RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。【结果】一步法RT-PCR可以从EMCVB JC3株中扩增出与试验设计相符的286bp特异性片段,而对猪口蹄疫病毒（FMDV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、BHK-21正常细胞的扩增结果均为阴性;对EMCVBJC3株细胞毒的敏感度达到2TCID50;对10份EMCVB JC3株细胞毒进行重复性检测,结果均一致;对207份临床疑似发病猪的病料进行检测,其阳性检出率为9.18%。【结论】所建立的EMCV一步法RT-PCR检测方法具有特异、灵敏、高效、快速等特点,可用于EMCV的临床检测及流行病学调查。     

一步法TaqMan~探针实时荧光定量RT-PCR快速检测PRRSV的建立及初步应用

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的序列,设计了1对特异性引物和1条TaqMan探针,建立了一步法检测PRRSV的荧光定量RT-PCR方法。结果表明,建立的方法具有较高的特异性,与PCV,JEV,SFV,PRV,PPV无交叉反应;可以检测到10个拷贝数的模板RNA或1个TCID50的PRRSV,比常规RT-PCR方法的灵敏度高10倍;对同一样品进行4次重复试验,变异系数(CV)<1%,具有较好的重复性。应用建立的荧光定量RT-PCR和常规RT-PCR对72份PRRS疑似病例肺组织进行平行检测,结果荧光定量RT-PCR检出40份阳性,高于常规RT-PCR方法(28份阳性)。建立的荧光定量RT-PCR方法特异性好、灵敏度高,而且快速简便,可用于PRRSV的实验室快速诊断和流行病学调查。     

抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及金标试纸检测方法的建立

以BSA-CAP-HS免疫Balb／C小鼠,用细胞融合技术筛选抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞,体内诱生腹水法制备cAP mAb,并鉴定其免疫学特性;依据胶体金免疫层析试验(GICA)原理,以CAP mAb 为金标抗体,研制CAP残留快速检测金标试纸(CAP-Strip),并对其性能进行测定。结果表明,筛选出了3株杂交瘤细胞,其中最好的4F9-B2株间接ELISA效价细胞培养上清为1:1 280,腹水为1:640 000,亲和常数(Ku)为 1．84×1010 L/mol,对CAP的半数抑制浓度(IC50)为0．88μg/L,与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其他酰胺醇类和抗菌素类药物无交叉反应;CAP-Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit拟合曲线,目测检测限为0．5μg/L;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100％;可见CAP-Strip具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于CAP残留的快速检测,具有较高的推广应用价值。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡肉中氯霉素类药物 及其代谢物残留方法的建立

建立了鸡肌肉中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及氟苯尼考胺残留检测的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析方法。样品在碱性条件下用乙酸乙酯提取后,再用正己烷去除脂肪,MCX小柱净化,洗脱液经浓缩,0.22μm滤膜过滤后,用高效液相色谱-串联质谱测定。采用电喷雾电离正负离子切换,多反应监测(MRM)模式测定。4种药物在2～100 ng·mL-1的系列浓度范围内均呈良好线性关系,相关系数r均大于0.990。样品中氯霉素的检测限为0.1μg.kg-1,定量限为0.3μg.kg-1;氟苯尼考的检测限为0.2μg.kg-1,定量限为0.5μg.kg-1;甲砜霉素和氟苯尼考胺的检测限为1.0μg.kg-1,定量限为3.0μg.kg-1。4种药物在0.2～2.0μg.kg-1的添加浓度范围内,平均回收率为79.3%～97.3%,相对标准偏差(RSD)均小于20%。满足了鸡肉中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留的确证分析,同时对其主要代谢产物氟苯尼考胺进行了痕量监测。     

新型基质固相萃取重金属离子分析及残留关联性

化学改性壳聚糖结合特征膨润土制备新型吸附基质功能材料,设计并制作接续式萃取柱管,进而填料制备新型基质固相萃取柱 正交试验分析山核桃Carya cathayensis叶中重金属离子作为前期指示物,考察新型基质固相萃取柱对山核桃叶中重金属离子的提取效能及与果实中重金属离子残留量的关联性.结果表明:新型基质固相萃取柱能较好提取山核桃叶中重金属离子,提取效能为原子吸收分光光度法(AAS)所验证.正交实验获得了新型基质固相萃取柱分离镍离子(Ni2+),铜离子(Cu2+)的最佳条件,实验数据显示山核桃叶与果实中2种重金属离子具有一定相关性,山核桃叶与果实中的镍离子(Ni2+),铜离子(Cu2+)分别为经典方法测试的91.1％和77.8％,89.1％和76.9％.提出前期指示物预测、监控山核桃中重金属离子含量为有效方法.所得结果可为固相萃取技术、重金属离子残留关联性相关研究提供有益参考.     

一种定量检测拟除虫菊酯类农药降解酶降解效果的方法

建立了一种定量检测拟除虫菊酯类农药降解酶降解效果的方法。研究了在37℃拟除虫菊酯类农药降解酶对菊酯类农药的降解效果,用石油醚提取降解后的残留农药,并采用气相色谱法测定了其浓度,计算降解率。检测结果表明,样液浓度在0.05～0.60mg/L范围内时,校准曲线相关系数为0.9987～0.9999,回收率为93.3%～113.8%,相对标准偏差为0.50%～3.9%,检出限为0.0007～0.003mg/L。此方法灵敏度高,适用于不同菊酯类农药降解酶酶液的检测,从而为拟除虫菊酯类降解酶的研究和评价提供科学依据。     

H5亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测技术的建立

【目的】建立一种适用于H5亚型禽流感病毒（AIV）的逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）可视化快速检测技术,为控制疫情扩散、减少经济损失争取了时间。【方法】根据GenBank中H5亚型AIV血凝素（HA）基因序列,设计一套针对HA基因6个区域的4条特异性引物,在反应之前向反应液中加入荧光试剂（Calcein／MnCl2混合液）,然后对反应条件和体系进行优化。【结果】优化的RT-LAMP技术操作简便迅速,常规水浴锅中50min可完成,能特异性地检测出H5亚型AIV,但对其他HA亚型AIV、禽呼吸道病原体无交叉扩增反应,灵敏度是常规RT-PCR的10倍;反应结束后无需打开反应管盖,即可根据反应液的颜色变化对结果进行判定。【结论】建立的H5亚型AIVRT-LAMP可视化检测技术具有简便、快速、特异等特点,可在设备有限的基层兽医站及养殖场对H5亚型AIV进行快速初步诊断。     

二类水体悬浮泥沙遥感反演算法综述

鉴于二类水体本身光学性质的复杂性及其与人类生产活动的密切关系,利用遥感数据监测二类水体水质受到了国内外学者的普遍关注,成为海洋学领域的热点问题。悬浮泥沙含量是表征水质优劣的一个重要参数,众多研究致力于建立悬浮泥沙反演模型的研究,定量反演二类水体悬浮泥沙浓度。该文总结了近年来二类水体悬浮泥沙遥感反演算法的研究进展。悬浮泥沙定量反演模型大致可分为以下三类：1）利用水体光学特性和水体组分之间关系建立的经验模型;2）综合经验模型和物理模型构建的半分析模型;3）基于辐射传输模型和生物光学模型建立的物理模型。针对目前反演算法存在的主要问题,提出未来的研究需加强反射率光谱曲线研究、开发高光谱遥感数据以及综合多源数据信息等方面的内容。