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光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
采用光敏生物素标记A群轮状病毒(GARV)全基因组RNA,制备了GARV群特异核酸探针,该探针与样品进行打点杂交,经亲和素-碱性磷酸酶(AV-AP)系统显色,可检出100pg病毒RNA序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异,灵敏,稳定的特点,可用于GARV的检测和进行基因相关性研究。 相似文献
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采用光敏生物素标记A群轮状病毒(GARV)全基因组RNA,制备了GARV群特异核酸探针,该探针与样品进行打点杂交,经亲和素-碱性磷酸酶(AV-AP)系统显色,可检出100pg病毒RNA序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点,可用于GARV的检测和进行基因相关性研究。 相似文献
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本研究以质粒pGEM-7Zf(+)为载体,对我国北方和南方疫区伊氏锥虫动基体株的kDNA小环进行了克隆,并以其中之pTK011-C1为探针对不同地理区的动基体株和无动基体株的不同DNA进行杂交。结果表明,我国北、南两大疫区动基体株的kDNA小环大小均约为1kb且均属A型。pTK011-C1只与动基体株的kDNA及tDNA杂交,不与其nDNA杂交,也不与无动基体株的任何DNA及黄牛白细胞DNA杂交。 相似文献
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本研究以质粒pGEM-7Zf(+)为载体,对我国北方和南方疫区伊氏锥虫动基体株的kDNA小环进行了克隆,并以其中之pTK011-C_1为探针对不同地理区的动基体株和无动基体株的不同DNA进行杂交,结果表明,我国北、南两大疫区动基体株的kDNA小环大小均约为1kb,且均属A型,pTK011·C_1只与动基体株的kDNA及tDNA杂交,不与其nDNA杂交,也不与无动基体株的任何DNA及黄牛白细胞DNA杂交。说明具有特异性,可以用于诊断。tDNA的杂交信号与kDNA相当,诊断中可以代替kNDA作为检测对象。 相似文献
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本文分别用鼠抗TNF单克隆抗体T_5和E_6,通过ELISA对伊氏锥虫阳性血清中TNF进行了检测。在受检的164份血清中,T_5检测出现28份阳性血清。E_6检测出现22份阳性血清。两种单抗检测后均为阳性反应的有21份血清,其阳性检出率为12.80%。阳性血清中TNF的含量平均为180ng/ml,范围在0.36ng/ml—1600ng/ml之间。结果首次证实伊氏锥虫感染时TNF的存在,对进一步研究伊氏锥虫的免疫及免疫病理具有重要意义。 相似文献
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利用液氮(-196℃)冷冻保存牛精子成功以后,近年来国内外在家畜的胚胎,人的红细胞、血小板、骨髓、眼角膜、皮肤组织以及含边虫的红细胞、含焦虫的红细胞,含牛环形泰勒焦虫裂殖体的淋巴细胞均获得冷冻成功。又如 相似文献
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作者采含伊氏锥虫量达1.5~3×10~7/ml的大白鼠心血,以4:1添加2%柠檬酸钠生理盐水抗凝,再以1:1冷冻保护剂(20%甘油阿氏液;8%二甲亚砜阿氏 相似文献
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在构建的小肠结肠耶氏菌毒性质粒DNA基因文库pYB1~8与pYP1~6的基础上,筛选出了pYB7和pYP6克隆株.用限制性内切酶Bam HI消化pYB7,Pst消化pYP6,可分离出3.8kb和6.4kb的插入性DNA片段.以这两个基因片段为目的基因,用生物素化dUTP和光敏生物素标记,获得了生物素标记的基因探针.该探针能检出10pg以上的强毒小肠结肠耶氏菌DNA,不与无毒小肠结肠耶氏菌及大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等18种对照菌反应,具有高度的特异性和敏感性.pYB7与pYP6探针对不同血清型及来源的小肠结肠耶氏菌检测,其结果与自凝性试验、依钙试验等结果相符;对小肠结肠耶氏菌强毒株与无毒株检定的准确率为100%. 相似文献
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应用PCR扩增检测伊氏锥虫的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本文建立了伊氏锥虫DNA的PCR扩增技术,并用于分裂工锥虫的检测,经PCR增后的DNA片断分子量约为237bp,可以检测到0.1pg总DNA或1条虫体,可以诊断小鼠的早期感染(第一天)和重复感染,还可以用来考核抗锥虫药物疗效,该项技术对锥虫具有特异性,且灵敏性和准确性都很高。 相似文献
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从马立克氏病病毒(MDV)GA株Bam HI基因文库中选取L片段,用光敏生物素标记该片段,制备了MDV光敏生物素核酸探针。其检测灵敏度达Pg水平,保存期至少4个月。对细胞培养物中病毒核酸的检测结果表明,探针只与血清Ⅰ型MDV DNA发生分子杂交,而不与血清Ⅱ型(SB-1)和血清Ⅲ型(HVT)MDV DNA发生反应。分别以京-1株(血清Ⅰ型)和Fc126株(血清Ⅲ型)接种1日龄雏鸡,于14日龄和30日龄采用斑点杂交法检测羽髓提取的病毒DNA,结果京-1株均为阳性,Fc126株均为阴性,表明该探针可以用于MDV强毒株和HVT疫苗毒株的区别诊断。采用斑点杂交法检测实验感染MDV GA株的鸡全部为阳性(16/16),检出率为100%;而用琼脂免疫扩散试验的检出率为87.5%(14/10)。试验表明,所制备的MDV光敏生物素核酸探针具有特异性强、灵敏度高、无放射性污染等优点。为MDV强毒株的临床检测及MDV分子生物学研究提供了一种重要手段。 相似文献
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从马立克氏病病毒(MDV)GA株BamHI基因文库中选取L片段,用光敏生物素标记该片段,制备了MDV光敏生物素核酸探针,其检测灵敏度pg水平,保存期至少4个月,对细胞培养物中病毒核酸的检测结果表明,探针只与血清Ⅰ型MDV DNA发生分子杂交,而不与血清Ⅱ型(SB-1和血清Ⅲ型(HVT(MDV DNA发生反应,分别以京-1株(血清Ⅰ型)和Fc126株(血清Ⅲ型)按种1日龄急诊鸡,于14日龄和30日龄采用斑点杂交法检测须提取的病毒DNA,结果京-1株均为阳性,Fc126株均为阴性,表明该探针可以用于MDV强毒株和HVT疫苗毒株的区别诊断,采用斑点发校法检测实验感染MDV GA株的鸡全部为阳性(16/16),检出率为100%,而用琼脂免疫扩散试验的检出率为87.5%(14/16)。结果表明,所制备的MDV光敏生物素核酸探针具有特异性强、灵敏度高、无放射性污染等优点,为MDV强毒株的临床检测及MDV分子生物学研究提供了一种重要手段。 相似文献
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