表达绿色荧光蛋白重组单核细胞增多性李斯特菌的构建

将编码绿色荧光蛋白(GFP)的基因融合到单核细胞增多性李斯特菌actA基因启动子和信号肽下游,应用同源重组技术构建了含gfp的重组李斯特菌突变株.PCR扩增及其产物的酶切鉴定均证实目的基因gfp融合到李斯特菌基因组中.荧光显微镜下可见重组菌体发绿色荧光.SDS-PAGE电泳和免疫印迹结果显示重组李斯特菌表达的GFP分子量约为28 kD,与预计的分子量大小一致.重组菌对鸡胚和小鼠的毒力以及对体外培养细胞的侵袭力均低于野生型李斯特菌.该重组菌可用于研究李斯特菌的致病机理和食品加工过程中微生物污染控制的指示性细菌.     

表达绿色荧光蛋白的猪胚胎生殖细胞分离

以质粒DNA为增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的载体，对处于快速增殖期的8株猪胚胎生殖(EG)细胞(4—9代)进行转基因试验。用1μg DNA和2μL LipofecTamine 2000转染EG细胞后，共获得4株转染EGFP基因的EG细胞系(EG—EGFP)，可发出强绿色荧光；EG—EGFP细胞连续培养2周以上可分化为多种细胞类型。显微注射EG—EGFP细胞至卵裂期胚胎、桑椹胚卵周隙内或囊胚腔中，共注射135枚胚胎，其中112枚存活并发育至囊胚(83．0％)；86枚嵌合体胚培养后含有荧光细胞，其中57枚囊胚在内细胞团(ICM)上发现有EG—EGFP细胞。     

表达绿色荧光蛋白重组乳酸杆菌的构建及电击转化条件

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组乳酸杆菌．将pGFP2质粒中的绿色荧光蛋白基因切下,克隆进表达载体质粒pThioHisB的NcoⅠ和SacⅠ位点之间,构建成重组表达质粒pThaioGFP,然后转化大肠杆菌B121．从BL21中提取重组质粒,用电击法转化乳酸杆菌Lac1001,当细菌处于D600nm为0．6的生长期时,使用PEB作为电击缓冲液,对100μL体积的细胞悬液在电容25μF,电阻200Ω,电压2．2kV的电击条件进行完整质粒转化可得到较高的转化率．电击转化后Lacl001于LB培养基上呈绿色,在荧光透射仪下观察,整个菌体发绿色荧光．构建的重组乳酸杆菌能够稳定表达绿色荧光蛋白．     

Using of green fluorescent reporter gene (GFP) to monitor the fate of Fusarium moniliforme mycoparasitized by Trichoderma viride

Fusarium moniliforme Sheld.is a rice pathogenic fungus and causes the disease called Bakanae,which has increasingly damaged rice production in the recent years. Trichoderma spp. has been one of the most widely used biological control agent of plant disease. By geneticaly labelling F. moniliforme with the GFP reporter gene, we have studied the antagonistic action of Trichoderma viride against this pathogenic fungus. The binary GFP reporter vector pCHF3-35S∷GFP was constructed, w…