苦马豆素抗血清治疗家兔小花棘豆中毒

通过检测苦马豆素（swainsonine,SW）抗血清治疗小花棘豆中毒家兔血清免疫和生化指标变化,评价SW抗血清对家兔小花棘豆中毒的治疗效果。将18只家兔随机分为对照组（6只）、攻毒组（6只）和攻毒治疗组（6只）,攻毒试验兔按干重拌料饲喂10g／（kg·d）小花棘豆草粉,攻毒组试验兔出现死亡时（第70天）停止攻毒。攻毒第21天,攻毒治疗组试验兔注射SW抗血清,每只兔每天0．5mL,连续注射4d。以攻毒试验开始进行首次采血,试验开始后每7d采血1次,进行血清免疫和生化指标测定。结果显示,攻毒第7天时攻毒家兔血清AKP活性和SW含量显著高于对照家兔（P〈0．05）;第14天时攻毒家兔血清AST和LDH活性显著高于对照家兔（P〈0．05）,血清AMA活性和E-玫瑰花环率均显著低于对照家兔（P〈0．05）;第21天时攻毒家兔血清BUN、CRE和GLU含量显著高于对照家兔（P〈0．05）。攻毒治疗组家免注射SW抗血清后血清AKP、LDH、AST、ALT活性及BuN、CRE、GLU、SW含量较攻毒家兔显著下降,AMA活性和E～玫瑰花环率显著上升。结果表明,SW抗血清可有效治疗家兔小花棘豆中毒。     

变异黄芪中苦马豆素的分离与鉴定

目的：研究变异黄芪的生物碱成分。方法：变异黄芪经甲醇热回流提取，回收甲醇至浸膏。浸膏用1mol／l盐酸研溶至生物碱沉淀反应为阴性，过滤，所得滤液氯仿萃取除去色素等杂质，然后用氢氧化钠碱化调pH为9～11，依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。采用薄层层析技术分析各部分生物碱成分。正丁醇部分经硅胶柱层析进行分离，纯化。所得化合物通过熔点和波谱技术(IR、MS、^1HNMR、^13CNMR)鉴定其化学结构。结果：从正丁醇部分分离、纯化得到一种白色针状晶体25．3mg，结构鉴定为苦马豆素。计算变异黄芪中苦马豆素的提取率为0．0013%。     

小花棘豆产苦马豆素内生真菌的筛选与鉴定

通过对小花棘豆内生真菌的分离纯化,筛选产苦马豆素内生真菌,探讨小花棘豆内生真菌与其毒性成分苦马豆素的相互关系。本研究对采自内蒙古西部草地的6份小花棘豆样品进行内生真菌分离纯化,采用薄层色谱和气相色谱技术对内生真菌发酵液进行苦马豆素定性、定量检测,筛选产苦马豆素内生真菌;结合形态学和分子生物学方法进行内生真菌种属鉴定。从小花棘豆样品中分离得到6株内生真菌。经筛选,其中有2株产苦马豆素,编号为XJ-J-I和XJ-H-1,其发酵液中苦马豆素产量分别为4.209 2mg.L-1和16.733 8mg.L-1。鉴定结果表明,这2株内生真菌虽然形态学存在差异,但基因型相同,同属镰刀属内生真菌—层出镰刀菌(Fusarium prolifera-tum)。小花棘豆中存在产苦马豆素内生真菌。     

内蒙古不同小花棘豆种群苦马豆素及其内生真菌关系的分析

小花棘豆是广泛分布于内蒙古草原和荒漠区的一种有毒植物,其主要毒性成分为有毒生物碱——苦马豆素（swainsonine,SW）,牲畜采食后可引起中毒,甚至死亡,给当地畜牧业造成重大经济损失。本研究旨在探究内蒙古不同小花棘豆种群植株苦马豆素及其与内生真菌关系。采集内蒙古8个样地120株小花棘豆,利用萃取、离心、离子交换层析法提取和纯化植物单株和菌丝体的SW,用气相色谱-质谱联用法（GC-MS）检测SW水平,取茎和叶外植体分离培养内生真菌,提取植物和真菌的总DNA,扩增真菌特异序列,利用内生真菌微生物学特征和DNA序列比对进行鉴定。结果显示：8个种群共111株小花棘豆检测出SW,最高水平为369.05 μg·g^-1,平均水平32.78 μg·g^-1,从38株小花棘豆分离培养出内生真菌,纯培养下菌丝体呈松散白色绒毛状,菌落圆形、隆起、边缘整齐、辐射状生长,颜色逐渐呈现灰色、深灰色或褐色至深褐色,内生真菌均测出SW,其水平为0.83~2 573.24 μg·g^-1,经微生物学研究及5.8S rDNA/ITS序列比对分析,在属水平上鉴定该内生真菌为Alternaria。有Alternaria内生真菌的小花棘豆植株含SW,无该内生真菌的植株不含SW,培养的Alternaria内生真菌合成了SW。     

甘肃棘豆中苦马豆素的分离与鉴定

4.5kg甘肃棘豆用 2 0mL/L稀乙酸和氯仿的混合溶液 (5∶4)浸提 48h,过滤 ,分层。取酸水层用氯仿萃取 ,弃去氯仿层以除杂质 ,然后酸水层用氢氧化钠调pH为 9～1 1 ,依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇部分经硅胶柱层析 ,氯仿∶甲醇∶氨水∶水 (70∶2 6∶1 0∶1 0 )液洗脱分离、纯化得到一白色针状结晶体 ,TLC鉴定分析初步确定为苦马豆素 ,提取率为3 .2 0 μg/g。正丁醇部分苦马豆素含量气相色谱测定为 1 3 .1 4 8%± 0 .852 % ,折算全草苦马豆素含量为 0 .0 69%。     

冰川棘豆生物碱分析及苦马豆素的分离、鉴定

冰川棘豆干粉,经甲醇提取,盐酸酸化,酸水液用氯仿萃取数次,NaOH调pH至9～10,依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取.称重表明生物碱多集中在正丁醇组分,且以大极性生物碱为主.薄层层析检查结果显示,氯仿组分有10种生物碱,乙酸乙酯组分有7种生物碱,正丁醇组分有5种生物碱.将正丁醇组分经硅胶柱层析,乙酸乙酯一甲醇系统梯度洗脱,每30～50 mL收集1份,薄层层析监测,同类合并.Ehrlich＇s试剂显色明显段油浴升华,得到白色针状结晶,与苦马豆素标准样品进行薄层层析对照,其斑点形状、颜色相同,Rf值相近.通过熔点和IR、MS、^1HNMR、^13CNMR等鉴定其化学结构,为苦马豆素.     

苦马豆素人工抗原免疫对饲喂小花棘豆家兔血清免疫和生化指标的影响

用小花棘豆饲喂经苦马豆素人工抗原免疫接种过的家兔,通过检测家兔的血清学和免疫学指标,探讨苦马豆素人工抗原免疫接种对动物机体的保护作用.将30只家兔随机分为免疫对照组、免疫攻毒组、攻毒对照组和正常对照组,免疫组家兔接种苦马豆素人工抗原,攻毒组家兔按干重拌料饲喂10 g/(kg·d)小花棘豆草粉,检测血清抗体效价、相关生化指标和苦马豆素含量的变化以及E玫瑰花环率的变化.结果表明,免疫组家兔均有抗苦马豆素抗体产生,免疫攻毒组家兔较攻毒对照组家兔血清酶活性异常变化延缓,苦马豆素含量降低,E-玫瑰花环率升高.说明苦马豆素人工抗原能够有效预防小花棘豆对家兔造成的损伤,有一定的利用前景.     

小花棘豆与玉米混贮微生物特性及脱除苦马豆素乳酸菌的筛选

旨在探讨小花棘豆与玉米按不同比例混贮对微生物特性及乳酸菌多样性影响,挖掘具有脱除苦马豆素活性的乳酸菌,为小花棘豆青贮饲料的开发利用提供理论参考。以小花棘豆和全株玉米为原料,按不同比例10:0(T₁)、9:1(T₂)、8:2(T₃)7:3(T₄)、6:4(T₅)、5:5(T₆)、4:6(T₇)、0:10(T₈)混合青贮,室温发酵60 d,检测青贮前、后微生物种类、数量变化,鉴定分离出的乳酸菌,并测定其对苦马豆素的脱除率。试验结果:1)原料中乳酸菌数量随着玉米混入量的增加逐渐升高,青贮饲料各处理间乳酸菌数量无显著差异;原料中的肠细菌各处理间无显著差异,经过青贮发酵后肠细菌均未检测到;好氧细菌数量在原料和青贮饲料中均随着玉米比例的增加逐渐减少;酵母菌数量在各处理间均无显著差异;原料中的霉菌数量随着玉米混入比例增加逐渐增加,而青贮饲料中的霉菌数量均在检出线以下。2)从小花棘豆与玉米混贮的原料中共分离得到乳酸菌菌株4株,经鉴定属于Lactococcus lactis subsp. hordniae、Lactococcus lactis subsp. lactis和Lactococcus taiwanensis 3种;从青贮饲料中分离出乳酸菌菌株9株,经鉴定属于Lactobacillus plantarum subsp. plantarum、Lactobacillus brevis、Lactobacillus pentosus和Lactobacillus amylovorus 4种,当玉米混入比例升高时,原料中乳酸菌多样性有所增加,而青贮饲料中乳酸菌多样性有所下降。3)不同乳酸菌菌株对苦马豆素的脱除率均高于85%,其中菌株JD6E、JD4D、JD10D、JD2E和JD1F对苦马豆素的脱除率高达100%。经过热处理后,菌株JD10D和JD2E对苦马豆素的脱除率分别为100%和97.76%,而其他菌株对苦马豆素的脱除率下降31.76%~100%,其中菌株JD6D和JD1E经过热处理后对苦马豆素的脱除率分别下降到2.17%和0。结果表明,小花棘豆与玉米混贮可以增加青贮原料中乳酸菌的数量及多样性,降低青贮饲料和原料中好氧细菌的数量,有助于提高青贮成功率;乳酸菌对苦马豆素具有良好的脱除效果,菌株JD10D和JD2E对苦马豆素的吸附脱除作用最强,而菌株JD6D和JD1E对苦马豆素的降解作用最强,均可用作小花棘豆青贮脱除苦马豆素的发酵菌株。     

苦马豆素的来源及分离方法进展

苦马豆素(SW)是疯草的主要毒性成分,研究表明它具有明显的抗肿瘤活性。目前,SW作为一种崭新的抗癌药物倍受关注其实验室分离技术已取得很大进展,并已通过索氏抽提、柱层析、离子交换层析、高效液相色谱、萃取等方法分别从苦马豆属、棘豆属、黄芪属的多种植物及豆类丝核菌中分离出了SW。文章对SW来源和的分离进行了综述。     

变异黄芪毒性成分苦马豆素的分离与鉴定

采用植物化学成分系统研究的方法,从变异黄芪醇提总浸膏中分段萃取得到石油醚提取部分、氯仿提取部分、乙酸乙酯提取部分和正丁醇提取部分.正丁醇提取部分经聚酰胺柱和硅胶柱色谱分离、薄层层析检测和升华技术分离纯化出一种白色针状结晶,通过熔点测定和IR、MS、1HNMR、13CNMR波谱分析鉴定为苦马豆素.通过与同类植物的比较分析,证明苦马豆素就是变异黄芪的主要有毒成分.     

小花棘豆毒性的危害与利用

小花棘豆Oxytropis glabra是内蒙古主要的疯草植物之一,所含有毒成分苦马豆素可抑制动物细胞内的甘露糖苷酶,引起牲畜慢性中毒。概述小花棘豆的生物学特性和牲畜小花棘豆中毒的机理及其危害,分析与牲畜中毒相关的生态和环境因素,指出中毒发病与采食量、饲养管理和草原生态状况有关;评论了通过化学脱毒、抗毒疫苗和药物研制、生态治理等措施对小花棘豆进行利用,对于苦马豆素的抗肿瘤应用也进行了回顾。     

黄花棘豆不同生长时期苦马豆素含量的分析

采用气相色谱法对黄花棘豆(Oxytropis ochrocephala)不同生育期的根、茎、叶、花、果实及地上部分全草中主要有毒成分苦马豆素的含量进行检测,分析苦马豆素的变化规律,调查并计算单位面积黄花棘豆地上全草中苦马豆素的产量。结果表明,黄花棘豆果实中苦马豆素含量最高,达到107.787 mg·kg-1;地上部分全草中苦马豆素含量在结果期最高,达到48.19 mg·kg-1。从4个生长时期黄花棘豆不同部位苦马豆素含量平均值来看,果实＞花＞叶＞茎＞根;从地上部分全草中苦马豆素含量来看,结实期＞盛花期＞枯萎期＞孕蕾期,样地中黄花棘豆地上部分全草苦马豆素产量也符合此规律。     

南疆地区小花棘豆的营养成分分析

对新疆南疆地区小花棘豆Oxytropis glabra风干样的常规营养成分、主要矿物质元素及氨基酸含量进行测定,结果表明:小花棘豆干物质含量为94.49%、粗蛋白含量为14.97%、粗脂肪含量为3.11%、总能值为14 234 J/g、粗灰分含量为9.32%、中性洗涤纤维为36.70%、酸性洗涤纤维为28.06%、木质素为3.98%、纤维素为24.06%、钙0.98%、磷0.15%。小花棘豆中含有常见的17种氨基酸,其中包括9种必需氨基酸,氨基酸总量(占干质量)为13.42%,必需氨基酸总量为12.68%;微量元素含量与紫花苜蓿Medicago sativa的含量接近,是潜在的牧草资源。     

昆仑山小花棘豆生物碱提取及其对小鼠毒性试验

为进一步研究小花棘豆有毒成分提取方法及毒性作用,将昆仑山小花棘豆全草粉用不同浓度乙醇提取,以提取温度、超声时间和料液比等因素进行正交试验,考察对小花棘豆活性成分提取率的影响,并通过毒性试验对小花棘豆生物碱毒性进行评价。结果表明,提取温度、超声时间、料液比对小花棘豆生物碱提取率影响不显著。小花棘豆生物碱是其主要毒性成分,按1∶10浓度注射小花棘豆生物碱约3 mL可致小鼠死亡。     

小花棘豆对小白鼠的毒性试验

将60只昆明系小白鼠随机分为5个剂量的小花棘豆试验组(A、B、C、D、E组小花棘豆剂量分别为日粮的60%、40%、20%、10%、5%)和1个对照组(F组),进行为期60d的小花棘豆毒性试验。结果表明,在小白鼠日粮中添加20%小花棘豆,在60d试验期内未出现小白鼠死亡;添加40%小花棘豆,第57天出现死亡;添加60%小花棘豆,第45天出现死亡。随着小花棘豆在日粮中含量的增加,小白鼠的增重幅度明显减慢,其中A、B、C组小白鼠的试验终体重与对照组差异极显著(P<0.01),D组与对照组差异显著(P<0.05),E组与对照组无显著性差异。各剂量组小白鼠与对照组小白鼠相比,心脏、脾脏、脑和肺脏的脏器系数变化不大;肝脏系数和肾脏系数随着小花棘豆剂量的增加而增大,日粮中小花棘豆含量越高,小白鼠肝、肾肿大越严重,A、B、C组与对照组相比较差异极显著(P<0.01),表明日粮中小花棘豆剂量达到20%时,就会对肝、肾脏造成损伤。     

小花棘豆营养物质及能量分配对海拔高度的响应

测定了不同海拔高度下小花棘豆含水量,N、P、K等营养元素含量以及能量等指标,分析了不同海拔高度对小花棘豆植株各部分营养物质与能量分配的影响,研究了海拔高度对小花棘豆营养物质分配及生殖分配的作用规律。结果表明：N、P、K等元素随海拔高度的增加表现出逐渐增加的趋势,3种营养元素分别在海拔为2 400m,2 600m和2 400m时达到最高值;能量在根中表现为2 600m时最高,达26.01%,茎和叶中的变化在2 500m和2 600m较高,花中的能量分配在2 400m时最高,为27.00%。小花棘豆花和叶N、P、K的比例占总比较大,花在生长过程中消耗的能量也最多,说明N、P、K等营养元素和能量对其生长发育起到了重要的作用。