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应用多重聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形体的研究 总被引:9,自引:2,他引:9
根据鸡毒霉形体(MG)、滑液霉形体(MS)的基因文库,设计并合成了分别与MG、MS某段基因序列互补的两对引物,用这两对引物进行多重聚合酶链反应同时检测MG与MS。当样品中同时含有MG和MS的目的模板DNA时,同时得到2条大小与试验设计相符的732bp(MG)和207bp(MS)的PCR扩增带;而对其它8种禽病病原的扩增均为阴性,敏感性测定结果表明,多重PCR技术最低能同时检出100fg的MG、MS 相似文献
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PCR检测鸡毒霉形体和鸡滑液囊霉形体的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据禽霉形体16S rRNA的基因序列设计,合成了1对引物,用这对引物对鸡霉素形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)和鸡滑液囊霉形体(Mycoplasma synoviae,MS)菌株DNA进行PCR扩增,得到了与预期大小相一致的580bp的PCR产物,而这对引物对其他畜病病原DNA或RNA模板的扩增结果为阴性,PCR方法对MG和MS的最小检出量分别为2pg和3pg,应用已建立的PCR方法检测MG人工感染样品和临床样品,从人工感染样品中均检测到MG,临床样品的MG阳性检出率为10.25%,高于常规分离培养的阳性检出率。 相似文献
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应用聚合酶链反应检测鸡毒霉形体和滑液霉形形体的研究 总被引:11,自引:8,他引:11
利用鸡毒霉形体与滑液霉形体基因一定区域互补的序列,合成能分别对MG和MS目的基因的2对引物。和这2对引物对10个国际标准的MG与MS菌株DNA模板进行PCR扩增,结果均得到与预期大小相一 的约732bp(MG)和207bp(MS)的PCR产物。 相似文献
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应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测鸡毒霉形体和滑液霉形体抗体的研究 总被引:7,自引:1,他引:6
用 ELISA 检测鸡毒霉形体和滑液霉形体抗体,试验结果表明:用滑液霉形体抗原对人工感染的31份滑液霉形体阳性血清进行 ELISA 检测,结果全为阳性反应,用鸡毒霉形体抗原对18份鸡毒霉形体阳性血清进行 ELISA 检测也全为阳性反应;滑液霉形体和鸡毒霉形体两种抗原对20份鸡毒霉形体和滑液霉形体阴性血清的 ELISA 检测结果皆为阴性反应。符合率为100%。用鸡毒霉形体抗原对野外收集的60份鸡血清进行了检测,33份呈阳性反应,占55%;27份为阴性反应,占45%,用滑液霉形体抗原对63份鸡血清进行检测,37份呈阳性反应,占59%;26份为阴性反应,占41%。用7份人工感染的滑液霉形体阳性血清进行ELISA 与血凝抑制试验的比较结果表明:ELISA 的灵敏度比血凝抑制试验的高4—16倍。在本试验中,用霉形体的菌体抗原和用 SDS 溶解菌体后提纯的膜抗原均得到了相同的结果,本报告主要是报道菌体抗原的结果。作者同时用此法对鸡毒霉形体和滑液霉形体单克隆抗体进行检测筛选,同样取得了令人满意的结果。不足的是,在进行 ELISA 检测时,鸡毒霉形体和滑液霉形体之间存在有交叉反应。 相似文献
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鸡源霉形体的分离和鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
对乌鲁木齐市2个大型鸡场鸡毒霉形体(Mycoplasma gallisepticum,MG)、滑液囊霉形体(M.synoviae,MS)感染情况用血清平板凝集试验(SPA)进行了血清抽样调查。结果表明,凝集抗体的阳性率分别为66.92%和35.90%,其中商品鸡场MG和MS的阳性率分别为82.50%和52.50%。从凝似MG、MS感染鸡的气管、肺、气囊、鼻裂和跗关节腔分离到19株分离物。经初步鉴定,分离物均为霉形体属成员。用生化和血清学及其他生物学方法,对这些分离物进行了鉴定。结果6株为MG,3株为MS,其余10株也属于霉形体。 相似文献
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聚合酶链反应检测鉴别鸡毒霉形体强毒株和弱毒疫苗株的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据鸡毒霉形体(MG)强毒株和弱毒疫苗株基因组结构特点,分别设计合成2对引物XZ1、XZ2和XZ45、XZ16,建立了可检测MG强、弱毒株的PCR方法。以引物XZ1、XZ2对MG强毒株和弱毒株进行的PCR,均可扩增出732bp的特异性片段;而以另1对引物XZ45、XZ46对MG弱毒株进行PCR,可扩增出524bp的特异性片段,但对鸡毒霉形体标准强毒株和野毒株的PCR,则扩增不出任何条带。特异性试验表明,这2对引物对其他种类鸡毒霉形体及其他对照禽病病原核酸模板的扩增均为阴性。敏感性试验结果显示,2对引物PCR均能检出100fg的MGDNA。研究结果表明,通过上述2对引物的2次PCR扩增,在数小时内即可鉴别出MG毒株是强毒株还是弱毒疫苗株。 相似文献
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1 材料和方法霉形体培养物和PCR试样的制备:本实验使用了Miowae的14个株及16个其他品种的禽霉形体。除滑液囊霉形体用含12%猪血清、00125%烟胺腺嘌呤二核苷酸及0.01259%盐酸半胱氨酸的霉形体肉汤培养基培养外,其他霉形体均用含12%马血清和12%新鲜酵母提取物的PPLO肉汤培养基培养。 相似文献
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多重聚合酶链反应快速检测鉴别鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
根据鸡毒支原体强毒株和弱毒疫苗株基因组的结构特点,设计合成了二对引物XZ1,XZ2和XZ45、XZ46,建立了一种同时检测鉴别MG野毒株和弱毒疫苗株的多重PCR技术。试验结果表明,用这两对引物对MG强毒株和弱毒疫苗侏进行多重PCR,强毒株只扩增出732bp一条带,而弱毒疫苗株则可同时扩增出732bp、524bp二条带,而对其他种类鸡支原体和其它禽病病原的扩增不出现任何条带,结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该多重PCR最低能检出1Pg的MG强毒株和弱毒疫苗株的DNA模板。 相似文献
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聚合酶链反应检测绵羊肺炎霉形体的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
参照基因库中已发表的绵羊肺炎霉形体Y98株的16SrDNA序列,设计合成了1对引物,建立了聚合酶链反应(PCR)检测绵羊肺炎霉形体的方法。结果显示,所建立的PCR能特异扩增绵羊肺炎霉形体的DNA,而对照的菌株均为阴性;其敏感性可达1Pg。经对绵羊肺炎霉形体分离株HD-1的扩增产物进行测序,并与绵羊肺炎霉形体标准株Y98的16SrDNA序列进行比较,发现有6个碱基的差异。 相似文献
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应用多重聚合酶链式反应检测鸡毒支原体、鸡滑液囊支原体和禽衣阿华支原体的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据鸡毒支原体 (MG)、禽衣阿华支原体 (MI)、鸡滑液囊支原体 (MS)的基因文库 ,设计了 3对分别与MG、MI、MS某段基因序列互补的引物。用这 3对引物对同一样品中的MG、MI、MSDNA模板进行多重聚合酶链式反应 (PCR)扩增 ,结果均同时得到了 3条特异性的大小与实验设计相符的 732bp (MG)、 2 99bp (MI)、 2 0 7bp (MS)多重的PCR扩增带 ,而对其他 6种禽病病原的PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果能同时检出 1pg的MG、MI和MSDNA模板 相似文献
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近年来,从家禽分离出许多种霉形体,大体上可以分为病原性的和非病原性的两类。已经确认为病原性的有3种:引起鸡慢性呼吸道病和火鸡副鼻窦炎的禽败血霉形体,引起鸡和火鸡关节滑膜炎的滑液霉形体。 相似文献