农杆菌介导法将Bt杀虫蛋白基因导入玉米自交系的研究

利用β-葡萄糖苷酸酶(gus)基因的瞬时表达和稳定表达对农杆菌转化玉米愈伤组织的条件进行优化,通过用带有Bt抗虫基因和bar抗除草剂基因的根癌农杆菌LBA4404(ACT)转化玉米自交系7922、H99和P2的胚性愈伤组织,获得了抗性愈伤组织,并分化出植株,PCR检测初步证明Bt杀虫蛋白基因已整合到玉米再生植株中。     

花粉管通道法在玉米自交系改良中的应用

就几年来花粉管通道法在玉米自交系改良中的应用情况加以概括,提出了导入方法的适宜细则,对后代变异情况加以论述,并对今后该项工作的开展提出几点建议.     

利用花粉管通道法将耐草甘膦基因mG2-epsps 导入玉米自交系的研究初报

构建了含有耐草甘膦基因mG2-epsps的植物表达载体pUmG2,采用花粉管通道法将其导入优良玉米自交系X90中,对Tn代1542株植株进行草甘膦喷洒实验,共得到32株能够耐受0．25％草甘膦药液的抗性植株;对这32株抗性植株的PCR检测结果表明,其中29株为PCR阳性植株,平均转化率为1．88％;Southern杂交和Western杂交检测结果证明mG2-epspps基因已整合至玉米基因组并正确表达。     

利用花粉管通道法将外源DNA导入玉米的研究进展

综述了外源DNA通过花粉管通道导入玉米的研究进展.详细阐述了利用花粉管通道法将外源DNA导入玉米中的转化方式、导入后代的变异以及变异机理;介绍了利用花粉管通道法将外源总DNA和目的基因导入到玉米中的研究现状;提出了利用花粉管通道法导入外源DNA应注意的问题,以及今后的研究方向.     

一种利用花粉管结合农杆菌介导方法将iaaM基因导入玉米自交系的研究

[目的]利用花粉管结合农杆菌介导方法将iaaM基因导入玉米自交系。[方法]利用电击转化法将iaaM基因的表达载体转入农杆菌LBA4404菌株中,通过花粉管通道法将验证正确的菌株直接转化京24玉米自交系,最后通过除草剂筛选及PCR检测得到阳性植株。[结果]试验共得到12株抗性植株,其中10株为阳性植株。[结论]该研究成功建立了一种无需组织培养体系,直接利用花粉管通道进行农杆菌介导的玉米转化方法。     

利用花粉管结合线性DNA的方法将YB2基因导入玉米自交系的研究

[目的]将YB2基因导入玉米自交系。[方法]利用花粉管通道法将含有YB2基因的线性表达盒转入优良玉米自交系京24,对T0代植物喷洒浓度为200 mg/L草铵膦药液进行筛选,并对筛选到的植株进行PCR、RT-PCR检测。[结果]试验共得到19株草铵膦抗性植株;经检测,19株均为Bar阳性植物,其中5株含YB2目的基因,初步证明外源目的基因已整合到玉米基因组中。[结论]该研究为获得抗旱性好、产量高、安全的转基因玉米株系奠定了基础。     

用基因枪法将Bt杀虫基因导入玉米自交系的研究

利用PDSl000／氦气基因枪将人工合成的Bt基因导入玉米自交系340,8902,吉853,Mo17等的愈伤组织,在含有除草剂Basta2～5mg／L的培养基上筛选与分化。经3轮的除草剂筛选获得1840块抗性愈伤组织。再生860个植株。Southern blot分析证明,3个植株中整合有成基因。     

利用花粉管结合线性DNA的方法将YB2基因导入玉米自交系的研究

[目的]将YB2基因导入玉米自交系.[方法]利用花粉管通道法将含有YB2基因的线性表达盒转入优良玉米自交系京24,对T0代植物喷洒浓度为200 mg/L草铵膦药液进行筛选,并对筛选到的植株进行PCR、RT-PCR检测.[结果]试验共得到19株草铵膦抗性植株;经检测,19株均为Bar阳性植物,其中5株含YB2目的基因,初步证明外源目的基因已整合到玉米基因组中.[结论]该研究为获得抗旱性好、产量高、安全的转基因玉米株系奠定了基础.     

花粉管通道法转基因抗虫棉外源基因的整合方式

对花粉管通道法培育的转Bt基因抗虫棉GK19、GK22、1016、1018、1022、1025、GK5、GKsu12和SGK1进行Southern杂交分析。结果表明,目的基因能够完整整合到基因组里,HindⅢ酶切位点有可能发生甲基化或丢失。除1018以外的上述8个抗虫棉的分析结果还表明,载体骨架没有整合到棉花基因组中。     

花粉管通道法导入外源DNA创造燕麦新种质

采用花粉管通道途径将人工提取的不同倍性燕麦以及花生、大豆、小麦等作物DNA导入裸燕麦早熟品种“品二号”，中晚熟品种“冀张莜四号”和晚熟品种“冀张莜五号”，获得了较为广泛的变异，经过逐代选择鉴定，育成了一批裸燕麦新种质，组织化学分析表明，应用同样方法导入的GUS标民基因已在D1代植株中表达。     

农杆菌介导法获得优良玉米自交系转Bt基因植株

用根癌农杆菌介导法将携带有苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因(Bt)和PPT乙酰转移酶基因(bar)的质粒pGBIL04导入优良玉米自交系340和4112经预培养的幼胚初始愈伤组织，抗性植株平均发生频率为11．21％，经PCR、PCR-Southern和Southern blotting检测证明外源基因Bt已稳定整合到13株玉米基因组中，平均转化率为2．35％。降低共培养温度到22℃的转化率最高达4.44％，Basta抗性检测bar基因也同时转移进再生植株中，部分转化植株已经结实。     

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为明确不同玉米骨干自交系的耐碱性级别,从中选出适合创制遗传分析群体的亲本,同时筛选简便高效的玉米耐碱性鉴定方法,以分属不同类群的13份骨干玉米自交系为试材,采用盆栽种植Na2CO3溶液浇灌方法,检测苗期的表型和生理生化指标及全生育期产量,比较苗期表型指标检测法、标准差系数赋予权重法和全生育期产量表现评价法3种方法的综合评价结果.结果表明,综合3种评价方法鉴定结果,P138属于高度耐碱材料,B73和郑58属于耐碱材料,K10、东46、黄早四和齐319属于中度耐碱材料,合344、东156、U8112和龙抗11属于碱敏感材料,吉853和Mo17属于碱高度敏感材料;苗期利用苗情、株高、干重和鲜重变化率4个表型指标评价的结果与全生育期产量鉴定评价结果呈极显著正相关,苗期表型指标评价方法操作简便,试验周期短,是较好的玉米耐碱性鉴定方法.     

玉米自交系SSR标记技术的优化

选用7个玉米自交系为材料,分别研究了PCR反应体系中Mg2+浓度、d NTPs浓度、Taq DNA聚合酶量、引物浓度、模板DNA量,退火温度,PCR产物变性处理及银染方法对玉米自交系SSR标记结果的影响,优化了玉米自交系SSR标记技术。结果表明:优化后的20μL PCR反应体系为1.5 mmol/L Mg2+、0.05 mmol/L d NTPs、0.5 U Taq DNA聚合酶、0.05μmol/L引物、10倍PCR buffer 2.0μL和80 ng模板DNA,最优退火温度为60℃。PCR产物在95℃条件下变性5 min后上样电泳,电泳结束后胶板用蒸馏水快速漂洗,洗后用0.1%的硝酸银溶液银染8 min,再用蒸馏水洗30 s,最后用3%氢氧化钠与1%甲醛显影。     

几个玉米自交系主要农艺性状的配合力

以江苏沿江地区农业科学研究所培育的 3个自交系及其导入热带种质的 3个改良系为被测系 ,以 5个外引系为测验种 ,按NCⅡ设计配制 30个组合 ,分析 10种农艺性状的配合力。结果表明 :自交系“4S”在百粒重和单株产量上的一般配合力较高 ,用其作母本配制的组合具有较好的稳产性 ,“75”和“2 49”在矮化育种上具有较高的利用价值 ;导入热带种质的改良系与对应自交系相比 ,株高、穗位高的一般配合力显著增加 ,穗粗和轴粗的一般配合力亦有增加的趋势 ,其余性状则随自交系遗传背景不同而异 ;多数性状同时受父母本一般配合力和组合特殊配合力的作用 ,因此高产组合的选配必须同时兼顾两种配合力的选择     

Suwan种质玉米自交系的配合力分析

为进一步利用Suwan种质资源,充分发挥其在玉米育种的作用,选用国内6个分属不同优势群的代表自交系为准测验种,采用NCⅡ不完全双列杂交设计,对7个Suwan种质玉米自交系进行配合力分析。结果表明,T32、S273、S48的产量一般配合力较高,利用潜力较大。在42个组合中,T32×丹340、S11×交51、T32×交51、S273×交51、S48×18599、S273×B73、S48×交51、S37×交51、T32×B73的配合力总效应较高,为较强优势组合。Suwan种质玉米自交与Reid种质、旅大红骨、地方种质、Lancaster、PN种质之间有杂种优势。     

28个玉米自交系主要农艺性状耐旱性研究

[目的]对28份主要玉米自交系农艺性状进行耐旱性研究.[方法]在正常灌溉和干旱胁迫处理下,采用α-lattice设计,调查出苗期、散粉期、吐丝期、株高、穗位高、雄穗长、穗长、穗粗、单穗粒数和单株产量等,对各项指标进行评定与筛选,确定耐旱指标,计算耐旱系数,并换算成综合耐旱系数.[结果]可用ASI、株高、穗位高、雄穗长、穗长、穗粗、单穗粒数和单株产量作为耐旱指标对玉米自交系的耐旱性进行评价;株高、穗长和穗粗3个性状的耐旱性与单株产量的耐旱性关系极为密切.[结论]自交系齐319、长3、吉465、英64、888-9和2002F17的综合耐旱性较强,耐旱系数分别为0.89、0.88、0.86、0.86、0.86和0.85;"ASI+综合耐旱系数"法是较为实用的耐旱性评价方法,可在育种实践中加以应用;ASI、株高、穗位高、雄穗长、穗长、穗粗、单穗粒数和单株产量等可作为玉米自交系综合耐旱性评价的主要性状,其中株高、穗长和穗粗3个性状的耐旱性与单株产量的耐旱性关系极为密切,在耐旱育种中具有一定的应用价值.     

利用细胞工程建立的耐低磷玉米自交系与原自交系耐低磷性状的比较

以细胞工程技术获得的耐低磷玉米自交系99043、99038及玉米骨干自交系齐319为材料,利用砂培方法,探讨耐低磷自交系生理特性的差异,初步筛选磷高效育种材料.将自交系99043、99038和齐319播在装有黄砂的塑料盆中进行耐低磷特性的测定.自交系99043与齐319相比表现出明显的耐低磷特性,即叶片出现缺磷症状的时间延迟,发生50%植株死亡所需的时间增长.     

几个玉米改良系应用潜力的评价

采用不完全双列杂交设计,对"吉853"和自选系J1、J2、J3、J4的百粒重、粒重、行数、行粒数、穗粗、穗长几个产量构成性状的一般配合力(GCA)、特殊配合力(SCA)方差及几个主要遗传参数进行分析.结果表明:Jl在粒重、行数、行粒数、穗粗、穗长这几个性状上一般配合力高于"吉853",但是其特殊配合力方差在上述性状中均低于"吉853",且大部分为最低值,在育种中主要利用其一般配合力.J2、J3、J4各性状一般配合力与"吉853"相比表现不突出,但J2大部分性状的特殊配合力方差高于"吉853",在育种中主要利用其特殊配合力.     

外引矮秆玉米自交系配合力及杂种优势分析

以4255、169、4344、44、K10和龙抗11为测验种,对外引的14个矮秆玉米自交系,按NCII设计,对小区产量等性状进行了配合力分析和杂种优势分析。结果表明:矮01、矮1127、490和NY-1是综合表现比较理想的自交系,从其组配的组合中筛选到高产杂交组合的可能性较大,应当充分加以利用;其余各自交系各自有其突出的优良特点,可根据育种要求加以利用。