影响链格孢菌生长及产孢的因子

在实验室研究了影响稗草病原真菌链格孢生长及产孢的因子.链格孢菌可在较宽的温度范围内生长、繁殖;连续黑暗、空气充足条件下有利于产孢;该菌在4种不同的植物产品上培养可产生大量的孢子,最多的无芒稗籽上每克干物质产孢量达3.59×108个,这些培养物在首次产孢收获后均可直接培养作二次产孢利用.固体(菌块)和液体(菌悬液)接种培养物均能成功产孢.但培养量大时液体接种优于固体接种,产孢量与接种菌悬液浓度呈正相关.     

假隔链格孢SF-193的产孢特性及其分生孢子对空心莲子草的致病力

为了探明SF-193的产孢特性,选取了8种产孢培养基,研究分别在自然光、黑光灯和黑暗的条件下对SF-193产孢的影响程度。试验结果表明,在黑光灯连续照射11d后,SF-193在PCA、CA、SNA、Czapek和组织煎汁5种培养基上有少量分生孢子产生,而在其他3种琼脂培养基上不产生分生孢子。PCA培养基中马铃薯与胡萝卜比例为1：5时,SF-193在9d后产孢量最大,10×10倍显微观察约60个孢子/视野;当CA培养基中的胡萝卜含量提高至80%左右时, SF-193在3d后达到最大产孢量,10×10倍显微观察约300个孢子/视野。研究了黑光灯照度与胡萝卜含量对SF-193产孢的影响。结果表明,在黑光灯照度为195～210lx、胡萝卜含量约为0.8g/ml时,SF-193在25℃培养6d后产孢量最大,约为6.5×10^5个孢子/ml。SF-193的分生孢子在田间对空心莲子草的致病力测定结果表明,经孢子浓度10^4个孢子/ml处理后,空心莲子草的病情指数为67.7。     

大批量生产百日草链格孢菌孢子的技术

通过研究光照、菌丝体粉碎、培养基等因素对百日草链格孢菌孢子形成的影响，试图探寻大批量生产该菌孢子的条件和方法。结果显示，低氮培养、近紫外光照射、适当适时的菌丝体粉碎能诱导百日草链格孢菌形成大量的孢子。在上述条件下，应用液体发酵培养菌丝体，结合固体培养诱导孢子，是一种可行的方法。     

链格孢菌毒素对紫茎泽兰叶片光合作用的影响

 本文研究了一个新分离纯化的链格孢菌毒素对恶性杂草紫茎泽兰叶片的致病作用与叶片光合作用抑制的相关性。结果表明:在毒索处理叶片的形态产生明显变化之前,光合放氧速率和表观量子效率均明显降低。进一步的研究表明其作用位点在类囊体膜上,主要抑制了2个光系统的电子传递活性,但对于色素含量、暗反应关键酶则没有显著的影响。     

UV-B辐射增强对链格孢菌(Alternaria alternata)生长、生理及致病力的影响

研究UV-B辐射增强对灯盏花(Erigeron breviscapus)叶斑病致病菌—链格孢菌(Alternaria alternata)的生长、生理及其致病力的影响,并探讨链格孢菌对UV-B辐射的响应机制。结果表明,UV-B辐射增强可延缓链格孢菌的生长,导致菌丝生长率、产孢量、纤维素酶活性及可溶性蛋白含量均显著降低(p0.05),链格孢菌的致病力显著下降(p0.05)。同一UV-B辐射强度下,20～60min的辐射处理对链格孢菌的生长、生理及致病力的影响没有显著性差异(p0.05)。链格孢菌表现出形态学和生理生化方面的UV-B适应机制,来减轻UV-B辐射的损伤。经UV-B辐射处理后的病菌积累较多黑色素,菌落颜色加深,菌丝分布更加致密,菌丝干重显著增加(p0.05);并且,链格孢菌的过氧化氢酶(CAT)活性显著升高(p0.05)。     

蚜虫枝孢菌菌丝体生长及产孢条件的影响因子

蚜虫枝孢菌[Cladosporium aphidis(Thuemen)Clester]寄生蚜虫，对蚜虫田间种群消长具有一定的控制作用[1]；对桃蚜(Myzus persicae)、茄无网蚜(Acrythosiphon solani)和甘蓝蚜(Brevicoryne brassicae)有明显的致病性。关于蚜虫枝孢菌的寄生条件目前尚未见报道，本文就该菌的生长及产孢条件进行室内研究，结果报道如下。     

链格孢菌抗植物病原真菌活性筛选

活性筛选是开发利用微生物资源的第一步,在生物农药、抗菌素及天然药物开发颇为急切的今天,对微生物抑菌活性的研究具有重要的理论和现实意义。本研究以水稻稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）、小麦雪腐病菌（Typhula incarnate）等10种重要植物病原真菌为研究对象,采用滤纸片法对云南西双版纳地区分离得到的20株链格孢菌（Alternariaspp．）进行抗菌活性筛选,获得对10种植物病原菌有广谱抗性的链格孢菌4株,编号分别为SWFC0364,10102,0845,5828,其中菌株0364的抑菌活性最强,对小麦雪腐、梨黑星、三七丝核的抑菌圈直径均达到2cm以上,该研究结果为活性物质的分离奠定了基础。     

狭卵链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对稗草细胞膜脂质过氧化作用的影响

为明确狭卵链格孢菌Alternaria augustiovoide菌株AAEC05-3产生的毒素细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid,TeA)的作用机制,利用离体试验,研究了TeA对稗草叶片细胞膜脂质过氧化的影响。结果显示,低浓度TeA处理对稗草叶片的细胞膜透性和脂质过氧化影响不大;用高浓度TeA处理稗草叶片24 h后,稗草叶片细胞膜透性和脂质过氧化作用显著增强。TeA浓度为100 μmol/L时,稗草叶片相对电导率和丙二醛(MDA)含量分别增加28.21%和63.58%;脂氧合酶(Lox)活性增高61.59%,且不饱和脂肪酸含量显著降低,亚油酸(18∶2)和亚麻酸(18∶3)分别降低19.56%和17.20%,脂肪酸氢过氧化物在叶片中大量积累。表明TeA可以诱导稗草叶片细胞膜的脂质过氧化作用。     

促进镰刀菌产孢的培养基

 镰刀菌是真菌中一个重要的属,其中多种是重要病原,如麦类赤霉病菌,棉枯萎病菌等,但也有一些是有益的,如寄生于昆虫和锈菌及产生植物激素的种。镰刀菌的研究和鉴定主要依据大型分生孢子、小型分生孢子、产孢细胞、厚壁孢子及菌落性状等。镰刀菌在常用的PSA、PDA等基物上,往往气生菌丝茂盛,色泽明显,但不易产生典型的孢子以供鉴定,产孢细胞亦难观察,这是研究中经常遇到的难题,因此作者开展了筛选培养基试验,初步结果简报如下。     

空心莲子草致病菌假隔链格孢菌原生质体的制备与再生

为建立空心莲子草致病菌假隔链格孢菌Nimbya alternantherae的原生质体提取体系,以其强致病性野生型菌株N.alternantherae 11-2为供试菌株,研究了不同菌龄、酶系统、酶解时间及稳渗剂等对假隔链格孢菌原生质体制备及再生的影响,并采用聚乙二醇PEG介导转化法,构建了随机插入突变体库。结果表明,在酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中培养2 d的假隔链格孢菌丝体,以0.7 M山梨醇为稳渗剂,同时使用2%裂解酶、2%崩溃酶和2%蜗牛酶3种酶的混合液,在30 ℃下酶解3 h能获得足量的原生质体,且其再生率也可满足后继转化试验的要求。     

Genetic Analysis of Pathogenicity and Host-specific Toxin Production of Alternaria alternata Tomato Pathotype by Protoplast Fusion

Several pathotypes of Alternaria alternata are known to produce host-specific toxins (HSTs) as agents of pathogenicity or virulence. However, investigations into the genetic controls of HST biosynthesis and pathogenicity of Alternaria pathogens have been limited by the lack of a sexual stage in the life cycle of these pathogens. We report here the development of a protoplast fusion system and its use for genetic analysis of HST production and specific pathogenicity of the tomato pathotype of A. alternata that produces AAL-toxin as a HST. Drug-resistant transformants have been isolated by genetic transformation of nonpathogenic A. alternata (strain O-94) and A. alternata tomato pathotype (strain As-27) with vectors conferring resistance to hygromycin B and geneticin, respectively. Protoplasts of the respective transformants were fused by polyethylene glycol treatment or electrofusion. Fusion products were selected by culturing in the presence of both hygromycin B and geneticin, then confirmed by amplification using a polymerase chain reaction with specific primers to the transforming drug-resistance genes. Stable fusants were purified by successive subcultures on selective medium and single-spore isolation. The resultant stable fusants, probably inter-strain hybrids, had the same pathogenicity and toxin production as the wild-type strain As-27. These results suggest that protoplast fusion has potential applications for genetic analysis of A. alternata pathogens. Received 8 September 2000/ Accepted in revised form 27 October 2000     

Construction and Genetic Analysis of Hybrid Strains between Apple and Tomato Pathotypes of Alternaria alternata by Protoplast Fusion

The genetic controls of host-specific toxin (HST) biosynthesis and the pathogenicity of A. alternata pathogens have been limited by the asexual nature of the life cycle of these fungi. We used a protoplast fusion system for A. alternata to analyze the genetics of HST production and its relation to the specific pathogenicity of these pathogens. Drug-resistant transformants were isolated by genetic transformation, using vectors conferring resistance to hygromycin B and geneticin, for the A. alternata apple pathotype (AM-toxin producer) and A. alternata tomato pathotype (AAL-toxin producer), respectively. Protoplasts of the respective transformants were fused by electrofusion. The majority of resultant stable fusants produced both AM- and AAL-toxins and were pathogenic to susceptible cultivars of both apple and tomato. Pulsed-field gel electrophoresis analysis demonstrated that these fusants (or hybrids) carried small 1.7-and 1.1-Mb chromosomes, characteristic of the parental strains of the apple and tomato pathotypes, respectively. Detection of the AMT gene, involved in AM-toxin biosynthesis, by polymerase chain reaction revealed that all fusants pathogenic to apple maintained this gene. Microfluorimetry analysis using propidium iodide staining suggested that the fusants might be diploid. Received 14 November 2000/ Accepted in revised form 11 December 2000     

引起浙贝母黑斑病的交链格孢单抗及检测试纸条的制备

浙贝母黑斑病是危害浙贝母茎叶的重要真菌性病害之一, 该病侵染叶片产生叶斑?叶枯, 严重时全株枯死?本研究制备了针对浙贝母黑斑病致病菌交链格孢Alternaria alternata的单克隆抗体(单抗), 并开发了胶体碳免疫层析试纸条用于黑斑病早期精准检测?以交链格孢提取液免疫Bal b/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备单抗, 间接ELISA法和Western blot分析单抗的效价?灵敏度?特异性?抗体类型及结合蛋白?以双抗夹心法制备胶体碳免疫层析试纸条?得到3种针对交链格孢的单抗及其杂交瘤细胞株AaA1?AaC2和AaC5?3种单抗对交链格孢均具有高度特异性, 灵敏度为12.21~24.41 ng/mL, 效价≥6.40×105, 抗体类型分别为IgG2a?IgG3和IgG3, 结合蛋白的分子量分别为37?62 kDa和66 kDa?以AaA1为碳标单抗, AaC2为划膜单抗的胶体碳试纸条检测交链格孢的方法快速简便?准确灵敏?经济环保?从田间采样到出结果用时少于15 min, 样品简单研磨后取汁液加入加样孔即完成全部操作, 对交链格孢抗原的检测灵敏度为6.25 μg/mL, 试纸条采用环保材料制备, 单个试纸条的成本约1.7元?     

链格孢引起的病害严重危害农作物生产并危及农产品安全

链格孢属Alternaria Nees真菌是一类在自然环境中广泛分布的真菌,该属的一些种可引起多种重要农作物病害发生,严重危害农作物生产并造成巨大损失。另外,这些链格孢产生的毒素还积聚在农产品中,危及农产品食用安全。为此有必要加强有关链格孢病害的研究和治理。本文介绍了有关链格孢分类研究进展,近些年来链格孢危害农作物的主要种类及危害情况,以及世界范围内链格孢毒素所引发的农产品食用安全问题。在此基础上,也综述了链格孢病害的主要防控策略和治理技术。     

重寄生真菌盾壳霉产生几丁质酶的条件优化

本试验采用摇瓶培养的方法研究了盾壳霉产生胞外几丁质酶的条件。结果表明：培养液组分、通气状况、表面活性剂和草酸等因子对盾壳霉产生几丁质酶均有影响。改良的马铃薯蔗糖培养液（mPSB）较合成培养基SMCS更适宜作为几丁质酶产生的基础培养基,其几丁质酶产量达到616.8U/L;以mPSB为基础培养基,供试的9种碳源和7种氮源中5g/L葡萄糖和1g/L硝酸钾可使几丁质酶的产量分别达到756U/L和672U/L,较适宜几丁质酶的产生;生长曲线试验显示20℃培养15d几丁质酶产量达到高峰。另外,两种供试表面活性剂对几丁质酶的产生均有抑制作用;一定浓度的草酸溶液（0.1-3g/L）有助于盾壳霉几丁质酶的产生。     

高原草地杀蝗菌株嗜烟碱节杆菌Arthrobacter nicotinovorans的分离鉴定及发酵条件优化

从青藏高原采集的土壤中筛选到一株具有杀蝗虫活性的细菌,根据菌株形态和生理生化特征,结合16S rRNA序列分析,鉴定为嗜烟碱节杆菌Arthrobacter nicotinovorans,编号GZ1-6。室内测定了菌株GZ1-6对东亚飞蝗若虫的致病力,结果显示菌株GZ1-6菌悬液对若虫的校正死亡率达到75.56%。测定了碳氮源、温度、初始pH、装液量以及培养时间对菌株GZ1-6生长和杀虫活性的影响,得到菌株GZ1-6分别在以蔗糖和酵母浸膏为碳氮源,pH 7.5、恒温35℃的条件下生长最好,培养2 d,杀蝗活性较优化前提高了7.77%。菌株GZ1-6能够有效侵染东亚飞蝗并将其致死,可作为优良菌株进行杀蝗虫生物农药的进一步研发。     

对斜纹夜蛾高致病性莱氏野村菌Nr19固体培养条件的优化

经前期生物测定,莱氏野村菌Nomuraea rileyi(Nr19)菌株能使斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)幼虫大量感病及死亡,为了提高分生孢子产量,本文采用单因素试验,对影响菌株Nr19生长的固体发酵工艺条件进行了优化。结果表明,大豆与麦麸混合物是菌株Nr19的理想发酵基质,适量麸皮的加入,能有效提高产孢量。培养期间温湿度的分段控制对产孢的影响也较大。优化后的培养条件为:大豆、麸皮混合比例为85:15,液体种子种龄5 d,接种量15.0%,连续光照,期间控制前3 d相对湿度为85%,之后降为60%,而培养温度则采用前2 d与后11 d保持在25℃,中间升温至28℃的分段控温方式培养16 d。此条件下产孢量比优化前提高近2倍,为(6.045±0.061)×10⁹孢子/g,而活孢率可达(93.770±0.278)%,可为后续高侵染力杀虫制剂的研究提供较充足的试验材料。     

一株抗马铃薯坏疽病生防细菌B-401产抑菌物质条件优化及稳定性

以马铃薯坏疽病菌为靶标菌株,采用含药平板法对高寒草地禾草内生细菌B-401产抑菌物质条件及抑菌物质的稳定性进行了研究。结果表明,生防菌株B-401产抑菌物质的最佳培养基配方为牛肉膏8g、酵母浸膏5.0g、葡萄糖10g、水1000mL,最适温度为23.4℃,最适pH值为7,最佳装液量为35.2mL/150mL三角瓶,最佳培养方式为光照条件下振荡培养24h,最适发酵时间为96h,优化验证试验结果表明,其对马铃薯坏疽病菌的EC₅₀＝0.111μL/mL,是优化前EC₅₀＝3.196μL/mL的3.47%。菌株B-401所产抑菌物质在25~90℃具有较好稳定性,抑菌活性均大于75%,在100℃及以上高温处理后抑菌物质活性降低;对酸碱性和紫外照射稳定,相对活性分别在77.45%和98%以上;对金属离子Na⁺、Mg²⁺和Mn²⁺稳定,相对活性达99%以上,而对Ag⁺、Cu²⁺、Zn²⁺和Fe³⁺较不稳定。     

枯草芽胞杆菌M29产抑菌物质培养条件的优化及抑菌物质组成初探

前期研究发现枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis M29对黄瓜枯萎病具有较好的防治效果,然而其抑菌物质组成和抑菌机制尚不清楚。本文首先确定了菌株M29产抑菌物质的抑菌效果最强时的培养条件,进一步结合热处理、酶处理、基因检测和质谱检测初步分析此抑菌物质的组成。结果表明,以Landy培养基为基础、初始pH为7、培养温度在30℃、培养36～48 h时,菌株M29产生的抑菌物质的抑菌效果最好。菌株M29抑菌物质粗提液的抑菌活性具有热稳定性和酶稳定性。此外,在菌株M29的基因组DNA中扩增出合成fengycin的调控基因fenB,结合质谱检测到Fengycin B的分子量,推测菌株M29分泌物中可能存在脂肽抗生素Fengycin B。因此,枯草芽胞杆菌M29可能通过分泌脂肽抗生素来抑制病原菌生长,通过优化培养条件可以显著提高该菌的抑菌能力,本研究不仅有助于更深入地理解菌株M29的抑菌机制,同时也将为该菌在未来的实际应用提供理论指导。