兰花基因组DNA多态性RAPD分析

利用随机扩增多态DNA技术(RAPD)对兰属的3个品种春兰、春剑、蕙兰进行了分析与研究,建立了它们之间的DNA指纹图谱,找到了参试样品的特征谱带,并探讨它们之间的亲缘关系.结果从20条BA系列引物中筛选出能稳定扩增的10个引物,且对3个品种的植株进行扩增,共扩增出257条,其中243条具有多态性,分析结果表明春剑与春兰的相似系数较之与蕙兰的相似系数要高.     

湖南主要柑橘资源的RAPD分析

应用RAPD分子标记技术分析了湖南省主要柑橘资源的亲缘关系,结果表明:用宜昌橙和香抽DNA作为模板,从120条引物中筛选到37条较适合RAPD分析的随机引物;用筛选出的37条引物对23份柑橘材料进行RAPD分析.其中12条引物扩增效果理想,共得到扩增位点82个,多态位点61个,多态性比例达74.4%,对23个试材的区分率达100%;对RAPD分析结果进行聚类分析,23份材料归并成六类.聚类结果与试材形态特征和生物学特性分类效果较一致,说明了RAPD分析的可靠性.     

贵州野生春兰遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD标记对贵州及周边分布的野生春兰遗传多样性进行分析.结果表明:筛选的48个引物共扩增了324条600～2 000 bp带,其中201条(62.0%)显示多态性,RAPD标记可以有效地用于春兰野生资源遗传多样性评价;原产于贵州不同居群问样品的遗传差异性较大,多态性百分率为36.8%(荔波样品)～69.8%(黎平样品),高于60%的样品占全部贵州样品的1/3,分布于全省5个地州市;聚类分析显示,样品的聚类具有很强的地域性,特别是贵州样品表现更为明显,来自川西的样品和黔北、黔东北的样品具有很高的同源性.     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化.结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA.电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足RAPD等分子标记分析的需要.同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰RAPD分子标记的最佳反应体系,即20μL反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol/LdNTPs,2.25mmol/LMg2 ,1.0μmol/L引物,1.5ng/μL模板DNA.     

小香羊群体遗传结构的RAPD分析

用扩增猪基因组筛选得到的40条多态引物对12份小香羊DNA样品进行RAPD分析,结果有21条引物扩增出多态性谱带.用Nei公式计算群体内的遗传相似性指数,平均为0.9592±0.0082.结果表明,小香羊品种的遗传基础较单一,遗传多样性贫乏.     

甜瓜随机引物扩增多态性标记分析

本试验用RAPD标记分析了甜瓜种质资源的多态性.结果表明,扩增多态性条带数较多的引物BA1291,BA0290,BA0037,BA1244和BA2061,其区分率分别为59.3%,46.3%,44.4%,46.3%和50%.这5条引物将有助于甜瓜种质资源的高效鉴定;14条引物显示了54份甜瓜的遗传距离在0.03~0.53,为杂种优势挖掘和利用提供了分子依据,并将54份甜瓜分为2大类:I类包括3份厚皮甜瓜和1份野生甜瓜;II类,可以再分为2个亚类分别为:II-1,包括12份薄皮甜瓜和1份印度野生甜瓜;II-2,包括37份厚皮甜瓜类型.     

绣线菊属植物的DNA提取和RAPD引物筛选

以10种绣线菊属植物资源为材料,分别用SDS法、高盐低pH法及改良的CTAB法对幼嫩叶片进行DNA提取并进检测比较,利用经过检测的模板对RAPD引物进行筛选。结果表明：采用改良的CTAB法提取的DNA可以用于RAPD分析。对200条10碱基的RAPD引物进行了初筛和复筛,筛出了30条扩增多态性强、稳定性好的引物,作为全部基因组的扩增引物。     

AFLP分子标记技术在名贵春兰鉴别中的应用

从基因水平建立名贵春兰品种的鉴定方法,突破以往只能用传统方法鉴定名贵春兰品种的局限性;利用AFLP分子标记技术对18种主要名贵春兰品种进行了DNA指纹图谱分析,结果筛选出16对引物,这16对引物在18个名贵春兰品种中共扩增出345条带(平均每对引物扩增21.56条带),其中有多态性带169条(平均每对引物扩增多态性带10.56条),多态性比例为48.99%;通过这些多态性条带的不同组合,可明确将供试的18个名贵春兰品种加以区分,并作为18个名贵春兰品种鉴定的依据。     

樟科16个树种木材的RAPD与ISSR分子鉴别

采用随机扩增多态性(RAPD)和简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)技术鉴别樟科Lauraceae16个树种。用改良十六烷基三甲基溴化铵-十二烷基硫酸钠(CTAB-SDS)法提取樟科16个树种192株(12株·种-1)木质部基因组DNA,用RAPD与ISSR技术对它们进行聚合酶链式反应(PCR)扩增。共筛选出8条RAPD引物与6条ISSR引物,8条RAPD引物共扩增出165条大小为100~2 000 bp的条带,其中多态性条带为153条,多态率为92.7%;6条ISSR引物共扩增出96条大小为100~2 000 bp的条带,其中多态性条带为86条,多态率为89.6%。通过1~2个引物扩增的多态性条带就可鉴别与区分参试的16个树种,为树种鉴定提供技术支持。     

石斛种质资源遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD技术对10种石斛种质资源的遗传多样性及亲缘关系进行了分析。从100条10bp的RAPD引物中筛选获得17条多态性引物,对石斛属的10个种的基因组DNA进行扩增。共获得200条多态性带,平均每个引物产生11.8个多态性条带。材料间遗传相似系数变化范围为0.356～0.676。根据RAPD标记的结果,采用UPGMA法进行聚类分析,将石斛属的10个种区分开来,划分为4类。结果表明:RAPD标记技术较好地从分子水平上揭示石斛种质资源的遗传背景、亲缘关系。