两种制备鸡胚成纤维细胞的方法比较

在伪狂犬病活疫苗和法氏囊病毒GT株生产上均需制备鸡胚成纤维细胞.在制备鸡胚成纤维细胞过程中,对用连续消化法与玻璃珠分散法两种方法进行比较,结果表明:用玻璃珠分散法制备细胞,易使死亡细胞数大幅增加,在生产中加大成本,并在旋转培养中,影响活细胞的贴壁及生长;而采用胰酶连续消化法制备的细胞,贴壁较好、成活率高,但比前者工作量大;结合两者优点,找出了制备鸡胚成纤维细胞最佳的方法.     

鸡胚成纤维细胞制备工艺改进试验

在制备鸡胚成纤维细胞过程中,对用连续消化法与玻璃珠分散法两种方法进行比较,结果表明:用玻璃珠分散法制备细胞,易使死亡细胞数大幅增加,在生产中加大成本,并在旋转培养中,影响活细胞的贴壁及生长;而采用胰酶连续消化法制备的细胞,贴壁较好、成活率高,但比前者工作量大;结合两者优点,找出了制备鸡胚成纤维细胞最佳的方法。     

鸡胚成纤维细胞传代的探讨

鸡胚成纤维细胞传代的探讨王建华（江西生物药厂）鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）能否传代这一问题，有的资料说不能传代。为了减少生产用蛋，降低产品的成本，在生产中，对ＣＥＦ能否传代进行了试验性探讨。１材料犊牛血清、７．５％ＮａＨＣＯ３、双抗、０．５％的细胞生长液...     

利用不同方法培养鸡胚成纤维细胞的研究

采用胰酶消化法和组织块培养法培养了大量优质的鸡胚成纤维细胞,并对培养的细胞进行了冻存和复苏,建立了一套较完备、快速的鸡胚胎成纤维细胞的培养模式。并探讨这两种培养方法的优缺点。     

不同制备方法对鸡胚成纤维细胞产量的影响

采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞（CEF）单层，在同等条件下均以成纤维细胞为主，并伴有少量的上皮细胞，仅有全胚法含有极少量的肝细胞；培养时细胞贴壁和生长状况3种方法无明显差异（P＞0.05)；CEF的产量，半胚法明显高于其他2种方法。     

不同方法制备鸡胚成纤维细胞的比较试验

采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞(CEF)单层。结果表明:在同等条件下,均以成纤维细胞为主,并伴有少量的上皮细胞,仅有全胚法含有极少量的肝细胞;培养时细胞贴壁和生长状况无明显差异,其产量稍有差异(全胚法>半胚法>传统法)。     

12种藏药对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响

用MTT法测定了藏菖蒲、红景天、决明子、灵芝盖、灵芝柄、龙胆、天冬、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味珍珠丸、二十五味松石丸等12种藏药对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度和生长的影响.结果显示,各藏药的最大安全质量浓度红景天为31.25 mg/L,天冬、降香、决明子和二十五味松石丸为62.5 mg/L,乳香为125mg/L,二十五味珍珠丸为250 mg/L,藏菖蒲和灵芝柄为1 000 mg/L,龙胆和仁青芒觉为2 500 mg/L,灵芝盖为5 000 mg/L,藏菖蒲为1.954～500 mg/L,天冬为1.954～15.625 mg/L,决明子为1.954～3.907 mg/L,灵芝柄为1.954～7.813 mg/L,仁青芒觉为19.54～1 250 mg/L,龙胆为312.5～625 mg/L,可显著促进细胞生长.     

应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒

用丹麦产ＮＵＮＣ一次性细胞培养瓶,１９９培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,２４ｈ单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,４ｄ后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形     

10种中药成分对鸡胚成纤维细胞生长的影响

将鸡胚成纤维细胞(CEF)分别与当归多糖(CAPS)、黄芪多糖(APS)、板蓝根多糖(IRPS)、淫羊藿多糖(EPS)、蜂胶多糖(PPS)、淫羊藿黄酮(EF)、蜂胶黄酮(PF)、黄芪黄酮(AF)、黄芪皂甙(AS)和人参皂甙(GS)等10种中药成分一起加入到96孔细胞培养板中培养，分别在培养24、36、48、60、72h时用MTT法测定中药成分对CEF增殖的影响。结果表明，所有中药成分均能显著促进CEF增殖，并有一定的量效和时效关系。     

鸭肝炎病毒A66弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养

将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒 ( DH V) A6 6 株接种于鸡胚成纤维细胞 ( CEF)进行细胞培养 ,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查 ,证明了 DHV A6 6 毒株能够在 CEF上增殖。试验还表明 ,犊牛血清对 DH V增殖具有明显的抑制作用。此外 ,还根据细胞培养物病毒滴度测定结果绘制出了病毒在 CEF上的生长曲线。     

鸡全胚成纤维细胞在鸡痘细胞活疫苗生产中的应用

采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样).鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗均可引起鸡胚绒毛尿囊膜水肿、增厚或痘斑,但鸡痘细胞苗产生痘斑数量明显高于鸡痘组织苗.鸡体刺种结果表明,鸡痘细胞苗诱发的免疫反应(发痘)好于鸡痘组织苗;与常规法相比,全胚成纤维单层细胞制备方法可提高鸡胚利用率2倍以上.全胚法也可应用于制备其他鸡成纤维细胞疫苗.     

边鸡生长曲线拟合和比较分析的研究

运用Logistic, Gompertz, Bertallanffy 3种非线性模型分别对边鸡进行曲线拟合和分析。研究结果表明,3种模型均能较好的模拟边鸡生长曲线,拟合度（R2）均高于0.99,其中以Bertallanffy模型的拟合度最高（公、母鸡分别为0.9974和0.9984）。因此,运用3种模型对边鸡进行生长曲线的拟合和比较分析是可行的,为及时了解边鸡的生长发育规律提供了参考。     

绿色荧光蛋白在鸡胚成纤维细胞中的表达

应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-C1转染到培养至第二代的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,同时使用活体DNA染料Hoechst3334(2H342)对CEF细胞核荧光染色,通过荧光倒置显微镜和RT-PCR方法检测GFP的表达产物。在荧光倒置显微镜下可见CEF的胞质和核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质,在H342作用下,细胞核呈现蓝色荧光;转染细胞中转录产物经RT-PCR扩增后,在凝胶上可见与GFP基因片段分子量大小一致的条带。可见,GFP基因可以被转染至CEF中,并在CEF中表达。     

马冈鹅胚胎生长曲线拟合与比较分析

运用Logistic、Gompertz和von Bertalanffy 3种非线性模型分别对马冈鹅的胚重和胚长进行了曲线拟合和分析。结果表明,3种模型均能较好地拟合马冈鹅胚胎的生长曲线,拟合度(R²)均高于0.99,其中以von Bertallanffy模型拟合胚重的效果最好,Gompertz模型拟合胚长的效果最好(拟合度分别为0.995和1.000)。本研究结果为及时了解马冈鹅胚胎时期的生长发育规律提供了参考依据。     

鸡白痢沙门氏菌鸡胚感染模型建立方法的筛选

为筛选出理想的鸡白痢沙门氏菌宿主感染模型的建立方法,本研究通过选择不同接种方式配合不同菌液浓度接种不同胚龄鸡胚建立感染模型,将90枚SPF鸡胚随机分成9组,每组10枚,分别为A、B、C、D、E、F、G、H、I组,A组为空白对照组,其余各组为模型组,模型组分别以气室接种、蛋壳接触接种的方式对不同胚龄（11和14胚龄）SPF鸡胚接种不同浓度（1×10³、3×10³、9×10³、3×10⁵、9×10⁵ CFU/mL）的鸡白痢沙门氏菌C79-3菌株。每天观察情况直至出雏,待雏鸡孵出后按组分笼饲养,每隔12 h观察1次,连续观察7 d,观察各组雏鸡的临床症状、死亡情况,观察期结束对死亡和存活雏鸡进行剖检、组织病理学检查及鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定。结果显示,各模型组均有雏鸡出现明显的鸡白痢病症状并死亡,相较于其他模型组,以11胚龄蛋壳接触感染方式接种9×10⁵ CFU/mL的C79-3菌液的F组和14胚龄气室感染方式接种3×10³ CFU/mL C79-3菌液0.1 mL的H组,鸡胚出壳率较高,可分别达到80%和90%,出壳雏鸡呈现明显鸡白痢病特征,剖检可见肝脏出血、盲肠膨大、卵黄囊吸收不良;组织病理切片可观察到肝脏、盲肠、心脏各有不同程度的损伤,发病率分别100%和88.8%,并且鸡白痢沙门氏菌阳性检出率分别达70%和90%。本研究结果表明,以11胚龄蛋壳接触感染方式接种0.1 mL 9×10⁵ CFU/mL的C79-3菌液和14胚龄以气室感染方式接种0.1 mL 3×10³ CFU/mL的C79-3菌液的两种方法均可用于建立稳定的鸡白痢沙门氏菌宿主感染模型。     

鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域的应用及研究进展

鸡胚因发育过程清楚,长久以来作为基础和应用科学研究领域重要的实验模型,尤其在鸡胚发育早期绒毛尿囊膜阶段,因其血管丰富,是天然的免疫缺陷宿主,是病理学、药理学和肿瘤学等研究领域的理想实验模型。作者简述了发育早期的鸡胚组织结构,并介绍了鸡胚绒毛尿囊膜在肿瘤研究、血管生成、器官移植、烧伤等疾病机理研究中的应用,以及在鸡胚病理模型基础上进行的抗肿瘤药物筛选的应用。重点介绍了鸡胚及禽类细胞系在病毒繁殖和疫苗生产、治疗性蛋白和单抗生产方面的应用研究进展。多种人源病毒、禽源病毒、支原体等可在鸡胚及禽类细胞上增殖,并用于疫苗生产。作者对常用的禽类纤维原细胞和多能干细胞的发展和特点进行了阐述,并总结了商业化的禽类细胞系来源以及部分易感病毒。鸡胚表达系统能够在目的蛋白特定位点产生人源化糖基,减少目的蛋白对人的过敏反应,且禽蛋廉价易得,可作为生产人用单克隆抗体和治疗性蛋白的合适供体。作者介绍了鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域应用的最新进展,并对鸡胚作为动物模型在未来的应用进行了展望。     

The Application and Research Progress of Chicken Embryo and Avian Cell Lines in Biomedicine

Chicken embryo has long been an important experimental model in basic and applied science because of its clear development process,especially in the early development of chicken embryo chorioallantoic membrane stage,due to its abundant blood vessels,it is a natural immunodeficiency host and can be used as an ideal experimental model for pathology,pharmacology and oncology research.The authors briefly described the tissue structure of early stage of chicken embryo,the application of chick embryo chorioallantoic membrane model in tumor,angiogenesis,organ transplantation,burn and other diseases,and the application of anti-cancer drug screening based on the pathological model of chicken embryo.The advances in the application of chicken embryo and avian cell lines in virus reproduction,vaccine production,therapeutic protein production and monoclonal antibody production were reviewed.A variety of human viruses,avian viruses and mycoplasma can proliferate in chicken embryos and avian cell lines and be used in vaccine production.In this paper,the development and characteristics of commonly used avian fibroblasts and pluripotent stem cells were described,and the source of commercial avian cell lines and some susceptible viruses were summarized.Chicken embryo expression system can produce human glycosylates at specific sites of target proteins,reduce the allergic reaction of the target protein to human,and poultry eggs are cheap and easily available,so it can be used as a suitable donor for the production of human monoclonal antibodies and therapeutic proteins.In this paper,the recent progress in the application of chicken embryos and avian cell lines in the field of biomedicine was introduced,and the future application of chicken embryos as animal models was forecasted.     

中药牛皮消多糖体外抗新城疫病毒作用的研究

为探讨牛皮消多糖（CAP）对体外抗新城疫病毒（NDV）能力的影响,本试验用水提醇沉法提取牛皮消多糖,通过苯酚硫酸法和红外光谱对牛皮消多糖进行检测,采用MTT法测定牛皮消多糖对鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度,多糖的安全浓度统一为625 μg/mL,选择安全浓度范围内的（39.06~625 μg/mL）5种浓度的各级多糖,用3种加药方式（先加多糖后接种病毒、先接种病毒后加多糖、多糖和病毒感作后加药）检测牛皮消多糖对NDV的阻断、抑制及直接杀灭作用。结果显示,先接病毒后加多糖组和多糖与病毒感作后加药组CAP₅₀、CAP₃₀、CAP_t、CAP₈₀和CAP₇₀均能显著抑制NDV感染CEF的能力,两组各级多糖抑制率分别为131.23%、110.12%、108.15%、100.24%、93.07%和61.76%、43.73%、44.51%、29.02%、37.45%;先加多糖后接病毒组CAP₅₀、CAP₃₀能显著抑制NDV感染CEF的作用（P<0.05）,阻断作用下对NDV的抑制率可达到15.82%、8.33%,其余各组在安全浓度范围内对NDV无抑制作用。各组中药牛皮消多糖均有较好的抗NDV活性,其中对NDV的抑制作用和直接杀灭作用强于对其阻断作用。CAP₅₀及CAP₃₀的抗NDV活性较强,可作为进一步研究材料并具备一定的研究价值。     

文昌鸡生长曲线拟合的研究

本研究用Logistic、Gompertz和Bertallanffy 3种非线性生长模型对文昌鸡母鸡的生长发育进行拟合.研究结果表明,3种模型均能较好地拟合文昌鸡生长曲线,但是Gompertz模型拟合效果最佳.运用3种模型对文昌鸡进行生长曲线的拟合和分析是可行的,对及时掌握文昌鸡的生长发育规律提供了参考.