一株分离的鹅副粘病毒的毒力、致病性和传播方式的研究

采用血清学、生物学方法,从一群病死鹅中分离到1株鹅副粘病毒(GPMV)。血清学鉴定表明该分离病毒为禽副粘病毒-I型(PMV-I);毒力测定显示分离病毒GPMV毒力与鸡F48E9毒株的毒力相似;F基因裂解位点序列的分析表明该分离病毒GPMV融合蛋白F裂解位点氨基酸序列为112K-R-Q-K-R-F117。分离病毒GP-MV攻击不同新城疫(ND)抗体水平的雏鸡、蛋鸡和鹅,结果显示分离病毒GPMV与鸡ND强毒株的致病性相似,既可引起鸡、鹅典型的ND,也可引起非典型的ND,其发病率、死亡率、临床症状和病理变化与鸡、鹅本身的免疫状况有关。经不同途经感染试验表明,分离病毒GPMV可通过呼吸道、消化道和直接接触等方式传播给鸡。     

鹅副粘病毒的分子鉴定

对自患病鹅群分离的一株鹅副粘病毒(GPV)YG97株经,红细胞凝集(HA)和红细胞凝集抑制(HI)试验证明与新城疫病毒(NDV)存在着极大的相关性.应用RT-PCR技术对F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定,并与多株已报道的NDV相应片段进行序列比较,经遗传进化树分析后,初步判定其为禽副粘病毒-Ⅰ型,属基因Ⅶ型NDV.     

鹅副粘病毒人工感染鹅、鸡、鸭试验

用江西农大预防兽医学实验室分离的一株鹅副粘病毒(JXG1)的F4代鸡胚尿囊液人工感染鹅、鸭、鸡试验.结果表明:该毒株对鹅、鸡具有较强致病性,40日龄鹅感染后发病率100%,死亡率50%～80%;25日龄雏鸡感染后的发病率和死亡率达100%;人工感染致死鹅、鸡的眼观病理变化与自然发病鹅的病变基本一致;鸭人工感染后仅表现一过性拉白色稀粪;鹅、鸡、鸭感染后均能产生相应抗体.     

鹅副粘病毒毒力特性的研究

新城疫病毒毒力的判定标准是根据国际上规定的３项指标,即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间（ＭＤＴ）,１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）等加以评价。将分离到的１１株鹅副粘病毒中选取了其中３株,即ＨＧ９７Ｃ５,ＹＧ９７Ｆ１１,ＹＧ９８．２Ｃ４,按照新城疫病毒毒力判定的标准方法进行了一系列致病性试验。结果为：３株鹅副粘病毒的ＭＤＴ分别为５６．７、５２．０、５     

鹅副粘病毒毒力特性的研究

新城疫病毒毒力的判定标准是根据国际上规定的 3项指标 ,即最小致死量致死鸡胚平均死亡时间 ( MDT)、 1日龄雏鸡脑内接种致病指数 ( ICPI)和 6周龄非免疫雏鸡静脉接种致病指数 ( IVPI)等加以评价。将分离到的 1 1株鹅副粘病毒中选取了其中 3株 ,即 HG97C5 、YG97F1 1 、YG98- 2 C4,按照新城疫病毒毒力判定的标准方法进行了一系列致病性试验。结果为 :3株鹅副粘病毒的 MDT分别为 56.7、52 .0、53 .2 ,ICPI分别为 1 .64、1 .69、1 .70 ,IVPI分别为 2 .62、2 .60、2 .60 ,表明这 3株鹅副粘病毒均具有与新城疫病毒速发型相类似的毒力。同时将鹅胚和鹅按照研究新城疫病毒毒力的方法进行了相应的毒力试验。结果为 :上述 3株鹅副粘病毒最小致死量致死 1 3日龄鹅胚的平均死亡时间分别为 68.8、67.4、70 .2 ,1日龄雏鹅脑内接种致病指数分别为 1 .52、1 .64、1 .66,6周龄非免疫雏鹅静脉接种致病指数分别为 1 .2 6、1 .65、1 .68。目前虽然没有鹅副粘病毒毒力判定标准 ,但从其对鸡和鹅的致病性检测结果表明这 3株鹅副粘病毒对鸡和鹅均属于强毒力的毒株     

鹅副粘病毒上海株的分子鉴定

对新近分离的鹅副粘病毒SF02株采用RT－PCR方法，扩增部分F基因进行测序，其裂解位点的序列为112R－Q－K－R－L^117，与新城疫病毒强毒株的特征相符，通过对其F基因与我国大陆新城疫强毒F48E9株，疫苗毒Lasota株比较，发现该毒株的F基因已发生了较大的变异，而与1999年在我国台湾省流行的新城疫病毒基因Ⅶ型有很高的同源性。     

鹅副粘病毒HN蛋白的原核表达与免疫学鉴定

以GenBank登录的鹅源副粘病毒GPMV ZJI株基因组全序列为模板,在HN基因开放阅读框上下游设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增得到HN基因,将目的基因克隆至pET32a表达载体上,转化至BL21中,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表达。由结果可知,通过RT-PCR法扩增出HN基因,大小与预期一致。SDS-PAGE和Western-blot均得到预期条带,说明pET32a表达载体在BL21中成功表达了HN蛋白,为后续相关免疫学研究奠定基础。     

鹅副粘病毒HZ株HN蛋白基因的克隆及鉴定

以鹅副粘病毒HZ株的基因组RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增出HN基因片段,然后将其克隆到pUCm-T载体中.经转化、筛选、酶切和PCR鉴定后,初步获得含鹅副粘病毒HN基因的阳性克隆,并进行序列测定验证.结果表明,该基因由1 716个核苷酸组成,共编码571个氨基酸.与GenBank下载的11株参考毒株的HN基因作同源性比较,发现HZ株与ZJ1、GY97等毒株的核苷酸同源性高达97%以上,而与Lasota、F48E9等经典NDV株的同源性在80%～83%之间.说明HZ株与经典NDV株的亲缘关系较远,而与江苏近年来分离的鹅源副粘病毒株的亲缘关系非常近;本试验克隆到的是完整的鹅副粘病毒HN基因.     

鹅副粘病毒病的研究

用ＳＰＦ鸡胚分别从扬州市不同患病鹅群的病鹅肝、脾等病料中分离到５株病毒。鸡胚分离的病毒株均具有凝集鸡红细胞,ＨＡ为２＾７－１４,并被康复血清所抑制。毒价ＥＬＤ５０为１０＾１１,２４,人工感染易感鹅引起发病死亡,与自然病例的症状和病变相同,并能在鹅群中流行传播。３株鸡胚绒尿液毒作负染电镜观察,病毒颗粒均呈大小不一、形态不正、表面有密集纤突结构,病毒内部由囊膜包裹着的螺旋对称的核衣壳,大小平均直径为１     

一株鹅副粘病毒分离株的增殖最佳条件及其致病性研究

为了探讨鹅副粘病毒在鸡胚中增殖的最佳条件及其致病性,将不同血凝滴度的鹅副粘病毒分别接种于9～11日龄鸡胚尿囊腔,收获孵化36、48、60、72和84 h的鸡胚尿囊液,测定血凝滴度。结果表明将血凝价为1∶64的鹅副粘病毒稀释50倍后,接种9日龄鸡胚,37℃培养48～72 h获得的尿囊液血凝价可达1∶256～1∶512,平均尿囊液量可达9.4 mL/胚。动物试验表明增殖获得的鸡胚尿囊液具有较强的致病性,将该尿囊液接种10日龄鸡胚和颈部皮下注射21日龄非免疫雏鹅,结果接种后鸡胚于30～48 h全部死亡。雏鹅平均死亡时间为62.6 h。特征性剖检病变为脾脏肿大,有灰白色坏死点;胰脏出血,有灰白色坏死点;肠道出血,溃疡;病料分离培养的病毒液HA价高达28,能凝集鸡红细胞,并出现解凝现象。     

鸡新城疫卵黄抗体的制备及对鹅疑似副粘病毒病治疗效果的研究

鸡新城疫由于其流行范围广,危害大,而备受关注。目前,对于散发新城疫多采用卵黄抗体治疗。本文阐述了鸡新城疫卵黄抗体制备工艺,并对制备出的卵黄抗体在鹅疑似副粘病毒病治疗的效果进行研究。     

鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析

1材料与方法 1．1病毒来源鹅副粘病毒分离株GX1株由广西壮族自治区动物疫病预防控制中心实验室分离保存。 1．2试剂及仪器各种PCR反应试剂、PMD-18T载体、胶回收试剂盒、限制性内切酶等均购自宝生物工程（大连）公司。仪器：恒温孵化箱、PCR反应仪、超速离心机、移液器等。     

鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析

[目的]克隆鹅副粘病毒GX1株HN基因与F基因,并进行序列分析。[方法]根据Genbank已发表的鹅副粘病毒GPV-SF02株基因组核苷酸序列设计2对引物,对从广西发病鹅分离到的鹅副粘病毒毒GX1株的HN和F基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。[结果]该株副粘病毒株的HN基因和F基因核苷酸序列全长分别为1 716和1 662 bp,与GPV-SF02株的同源性均在97.3%左右,与LaSota株、F48E9株、JS株的同源性为80.3%~97.5%,与M iyadera株的同源性仅84.8%。[结论]分离株GX1株与禽Ⅰ型副粘病毒(A PMV-1)强毒株特征相符,属于A PMV-1基因Ⅶ型。     

固始鹅蛋物理性状分析

[目的]了解固始鹅蛋物理特性,为固始鹅种蛋选择提供参考。[方法]采集固始鹅种蛋56枚,测定蛋重、蛋比重、蛋形指数、蛋各组成部分比例、蛋壳厚度、蛋白高度、蛋黄色泽,计算哈氏单位和血肉斑率。[结果]固始鹅蛋平均重159.1 g,变异较大;蛋比重1.119,为较高水平;蛋形指数1.49,较为理想;蛋壳厚度0.514 mm;哈氏单位107.77,蛋白、蛋黄、蛋壳比例分别为49.56%、38.12%和12.32%;血肉斑率3.57%,为较低水平;蛋黄颜色罗氏比色仅为4.52,为淡黄色,需要通过饲料来改进。[结论]固始鹅蛋比重较大,蛋壳厚度适中,蛋壳品质较好,但蛋黄颜色较浅,建议对产蛋种鹅改用以玉米为主的全价配合饲料,以提高饲料转化率,改善蛋黄色泽。     

四川白鹅与莱茵鹅遗传多态性的比较

选用10个微卫星标记检测四川白鹅、莱茵鹅的遗传多样性。结果表明,10个微卫星座位共检出55个等位基因,基因频率分布在0.0000~0.6667,平均每对引物可检测5.5个等位基因;四川白鹅和莱茵鹅的平均杂合度分别为0.6561,0.7010,平均多态信息含量为0.6146,0.6522,表明2个鹅群体遗传变异大。根据基因频率推断,引物CKW10,CKW14,CKW18,CKW21,TTUCG5可作为鹅产蛋、产肉性能的辅助选择标记。     

江苏中部地区鹅副粘病毒的分离与鉴定

[目的]调查江苏省泰州市某鹅场鹅大批死亡的原因。[方法]通过流行病学调查、临床诊断、病理变化、动物回归感染试验、血清学检查等对江苏省泰州市某鹅场发生的疑似鹅副黏病毒病的病料进行病原分离与鉴定。[结果]该病毒能使SPF鸡胚以及10日龄鹅和鸡全部死亡,能凝集鸡红细胞并能被NDV标准阳性血清所抑制,不能被禽流感病毒标准阳性血清所抑制。发病死亡与人工感染死亡的临诊症状和病理变化基本一致。经电镜观察发现该病毒颗粒呈圆形,直径在150 nm左右,有囊膜及纤突。该分离毒株经灭活后免疫鹅群,取到良好的防治效果。[结论]该病毒为禽Ⅰ型副黏病毒,属副黏病毒科副黏病毒属。     

鸡抗鸭副黏病毒病高免卵黄抗体的研制

为了寻找有效的防治鸭副黏病毒病的途径。分离出1株鸭副黏病毒,经鉴定并命名为鸭PMV DY-1株,并以此毒株作为免疫毒株,应用非鸡新城疫免疫健康鸡群作为免疫蛋源,制备鸡抗鸭副黏病毒病高免卵黄抗体,经实验室检测和临床试验应用。结果表明,研究获得的高免卵黄抗体应用效果良好,安全、高效,是目前紧急预防治疗鸭副黏病毒病较有效、较经济的方法之一。     

鸽瘟油乳剂灭活疫苗的研制

[目的]为了有效控制鸽瘟的发生。[方法]利用分离到的鸽I型副粘病毒研制了油乳剂灭活疫苗。[结果]该疫苗使用安全,无不良反应;疫苗注射后1周就可检测到HI抗体,3周后HI抗体水平达到高峰,并可持续6个月;从免疫保护试验看,免疫后14 d,用强毒攻击,保护率达100%,而对照组,10只鸽全部死亡。[结论]应用鸽瘟油乳剂灭活疫苗能有效预防鸽瘟,且比使用鸡新城疫疫苗效果更好。     

猪副粘病毒感染的初步诊断和病毒分离

在临床症状复杂的不同猪群中 ,分离出 4株副粘病毒。该病毒能凝集鸡红细胞 ,其血凝性能被鸡新城疫标准血清抑制。病毒能在鸡胚中生长繁殖。电镜观察不是冠状病毒而是副粘病毒。该病毒能引起猪的腹泻、呼吸急促、繁殖障碍、神经症状和体温升高等临床症状。