甘蓝型油菜微卫星标记PAGE及银染的高效检测

一方面对甘蓝型油菜微卫星标记（SSR）的小垂直板聚丙烯酰胺变性凝胶电泳体系做了两点优化：①在制胶方面,确定了在不同温度下的最佳催化剂使用量,可保证顺利凝胶和不缩胶,②在保证电泳带型质量的前提下适当提高电泳电压,可缩短电泳时间,提高效率;另一方面对PAGE胶中DNA的银染方法做了简化：省略固定处理,简化为制胶前用乙醇擦净玻璃板、用纯水漂洗胶片后银染及降低染色液的AgNOs浓度,该简化可减少操作步骤,显著提高效率,并可节约药品。     

大豆SSR标记PAGE银染方法的改进

比较改进后的两种最常用的银染方法Bassam和Sanguinetti,建立了一种更加行之有效、简便快捷的应用于大豆SSR标记的PAGE银染检测方法。     

椰子SSR分子标记筛选

[目的]筛选可用的SSR分子标记,加快椰子分子辅助育种进程。[方法]采用改良CTAB法提取椰子基因组DNA,以基因组DNA为模板,对36对SSR引物进行筛选,以条带清晰、多态性丰富为引物筛选原则。[结果]共筛选出7对具有多态性的引物,其中2对多态性较丰富,可用于后续SSR分子标记分析。[结论]该研究为开展椰子种质资源遗传多样性系统分析提供了SSR引物。     

马铃薯DNA提取及SSR标记分析

快速、准确地鉴定马铃薯品种和进行纯度分析,对于马铃薯种子质量标准化、品种审定、假种辨别等均具有重要作用。试验利用SDS提取液提取的马铃薯DNA,质量好、无降解,满足SSR分子标记的要求。利用4对引物(STM001、STM002、STM003、STM004)对黑龙江省7个主栽品种进行SSR标记,共获得144条多态性条带,平均每对引物扩增出36条特异性条带,每个样品平均有20.6条目的条带。4对引物PIC值均在0.8以上,STM001、STM003、STM0043对引物对7个马铃薯品种的区分率为100%,STM002的区分率为85.7%,能区分6个马铃薯品种。相似度分析表明,荷兰15与克新1号品种简单匹配系数最高,为0.788,荷兰15与早大白、早大白与黄麻子间遗传相似程度最低。试验重复性测试结果表明,SSR标记试验重复性好、结果稳定可靠,可以作为马铃薯品种纯度鉴定的方法在实践中应用。     

PAGE凝胶制备方法和银染方法的改进

PAGE凝胶分析技术已广泛运用于小分子量PCR产物的分离,但因操作环节多、耗时长,不利于大规模分子标记分析工作的开展.对PAGE凝胶的制备和银染方法作些改进,省去常规凝胶制备中亲和硅烷/剥离硅烷处理过程,以及常规银染过程中的固定和定影两步骤.与常规方法相比,该方法操作简便、耗时短、带谱的分辨率高,可代替常规方法用于SSR等标记的PCR产物的分离.     

SSR标记小麦抗白粉病基因变性凝胶电泳体系的优化

为寻找适合SSR标记定位小麦抗白粉病基因的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的理想体系。主要研究Arc+Bis占凝胶的质量浓度、Arc/Bis质量比、上样量、电泳电压及染色等因素对变性聚丙烯酰胺凝胶电泳效果的影响。结果表明电泳效果较好的体系为:凝胶中Arc+Bis 60g/L、m(Arc)∶m(Bis)=29∶1、上样量5μL(含φ=20%的6×loading dye)、1 500V恒压、强碱法染色。此变性凝胶电泳体系下得到的图谱较为清晰。     

微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染技术的探讨

采用PCR一非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色检测DNA片段。结果表明,该方法检测DNA具有灵敏度高、背景浅、条带清晰等突出特点。聚丙烯酰胺凝胶电泳后采用银染技术分析,方便快捷,易长期保存,且减小了对人体、环境的毒害作用。     

改良CTAB方法快速提取小麦基因组DNA(英文)

[目的]旨在寻求一种微量、快速提取小麦DNA的方法。[方法]以小麦幼叶为材料,分别用改良CTAB法、改良SDS法和沸水浴法提取小麦叶片总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳法、紫外吸收法和PCR检测DNA完整性和纯度。[结果]改良CTAB法提取的小麦基因组DNA质量和纯度高、无降解,每人每天可以轻松提取200个DNA样品,对转基因植株的PCR检测显示扩增目标条带清晰一致,无假阳性,试验结果理想。改良SDS法所提DNA纯度和浓度虽略不如改良CTAB法,但仍然符合实验要求。沸水浴法提取量少且杂质多,PCR无有效扩增,结果不理想。[结论]改良CTAB法提供了一种简便、快速微量小麦DNA提取方法,适用于PCR和其他分子生物学研究。     

甘蔗AFLP标记和SSR标记的PAGE胶快速银染检测方法

银染方法是一种重要的DNA染色法.其原理是利用银离子和核苷酸结合,在碱性环境下甲醛使银离子还原从而使凝胶中的DNA片段得以显现[1,2].     

藜麦基因组DNA提取方法的比较

为了快速获取高质量的藜麦基因组DNA,采用改良的CTAB法、SDS法和高盐低pH值法等3种方法分别提取藜麦不同组织(叶、茎、根部)的基因组DNA。通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法测定比较所提DNA的质量和产量,同时进行了PCR-SSR、SSCP等分子检测。用不同方法提取藜麦不同组织部位DNA的结果表明:不同提取方法的凝胶检测条带均比较清晰,且无明显降解;改良的CTAB法所提取的DNA产率最高,SDS法其次,而高盐低pH值法最低;不同方法提取的叶片DNA产率均明显高于根部和茎部;改良的CTAB法和高盐低pH值法所提取的DNA质量较好,多酚类化合物和多糖等杂质去除得比较完全。PCR-SSR和SSCP检测结果表明:不同方法和不同组织所提取的DNA均能跑出良好的条带,适合进行后续的分子生物学研究。     

两种聚丙烯酰胺凝胶银染方法的比较

比较了两种聚丙烯酰胺凝胶的DNA染色方法。对小麦SSR扩增产物的染色结果显示,改进的Bassam银染法颜色背景浅,灵敏度较高,能够看到副带染色。改进的Sanguinetti方法对条带的鉴别力稍差,但因省时省力,成本较低可用于大规模引物筛选时的染色。     

盐溶蛋白法与SSR标记品种鉴定技术的比较研究

利用SSR标记法与盐溶蛋白法进行了鉴定玉米品种的对比试验。结果表明:盐溶蛋白法能很好地鉴定出供试的32份自交系和14个杂交种,且具有简单、快速、准确、稳定和低成本的特点;SSR分子标记法筛选了50个引物;用筛选出的多态性好的6个引物组合能鉴定出所有材料,具有独特的优越性,但设备要求高,成本相对较高,普及较困难。因此,在玉米品种鉴定上,应以盐溶蛋白法为主。     

应用盐溶蛋白电泳和SSR分子标记鉴定玉米种子纯度的研究

[目的]建立一种快速、准确、经济的品种鉴定方法,为品种纯度鉴定和新品种保护提供依据。[方法]利用盐溶蛋白PAGE法与SSR分子标记对玉米杂交种先玉335和泽玉11的指纹图谱进行分析。[结果]应用盐溶蛋白PAGE法,可以很好地鉴定玉米种子纯度,可用于大批量检测;选用的10对SSR引物,其中3个多态性好的SSR引物能区分所有材料。[结论]盐溶蛋白PAGE法具有简单、快速、准确、稳定和低成本的特点。在该法为主批量检测种子的基础上,对难以鉴定的品种可采用SSR分子标记法作为辅助手段进行鉴定。     

小麦基因组SSR体系及反应条件优化研究

以小麦叶锈病抗病亲本TcLr45和感病亲本Thatcher为材料,探索影响SSR扩增结果的各因素(模板DNA、dNTP、引物、Taq酶)的最佳用量及不同引物的退火温度。结果表明:dNTP对扩增影响较大,Taq酶浓度在聚丙烯酰胺凝胶电泳检测时表现对扩增有一定影响,每对引物都有其扩增适合的退火温度。确立了适合小麦SSR分子标记研究的优化体系。最终确定总反应体系为25μL,其中模板DNA 20~50 ngd、NTP 240μmol/L、引物各0.2μmol/L、Taq酶1.5 U。     

沉香属植物基因组DNA提取及SSR反应体系的优化

以白木香为材料,研究沉香属植物基因组DNA提取方法 ,并优化SSR-PCR反应体系。通过改良CTAB法提取白木香叶片基因组DNA,经电泳和吸光度检测。优化影响白木香SSR-PCR主要参数,确立适合沉香属植物的SSR-PCR反应体系和扩增条件:在20μL反应体系中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶等5种主要成分的最适浓度分别为2.5 ng/μL、1μmol/L、2 mmol/L、0.2 mmol/L、1.2 U;并用9份沉香属植物DNA样品对SSR-PCR反应体系验证,能扩增清晰条带。SSR优化系统的建立为进一步利用SSR分子标记技术进行白木香种群及不同地区沉香属种群遗传多样性研究提供基础。     

一种从干种子提取DNA用于RAPD 和SSR分析的简便方法

用水稻、玉米、棉花和油菜的干种子作材料进行了分离DNA的试验。试验结果表明,从4种作物的干种子中都能分离到质量较好的DNA,得到的DNA可以用于RAPD和SSR分析。这一方法最显著的特点是充分利用了DNA分离的原理,只保留了细胞裂解、DNA沉淀和溶解等关键步骤,而省略了二些诸如去除蛋白质及有机物的中间步骤,因而具有简便、快速等优点,特别适合于一些需要快速得到研究结果的分析,如种子纯度鉴定、分子标记辅助选择等。     

聚丙烯酰胺电泳条带中微量DNA片段的回收与再扩增方法的改进

【目的】研究聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)条带中微量DNA片段的回收和再扩增.【方法】比较了4种方法溶解聚丙烯酰胺凝胶的效果和回收微量核酸的效率.【结果和结论】Bioteke溶胶/结合液能获得极高的DNA片段回收率,可从仅含1.0~7.5 ng核酸的PAGE胶中有效回收到足量的片段;再扩增的效果与回收效率呈正相关;将液态混合液与杂质分离是成功进行再扩增的关键.本研究构建的一套快速、高效的PAGE多态性条带回收及再扩增的方法为分析生物遗传多样性成因提供了新途径.