不同培养条件下两株溶磷真菌溶磷能力的比较

【目的】探讨无机磷固、液体培养基及各种基本培养基、磷源等对两株溶磷真菌（FC和H3）溶磷能力的影响,以获得最适合这些菌株发挥溶磷潜力的培养条件。【方法】采用钼蓝比色法测定菌株在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP和NBRIYP培养基及含不同磷源（磷酸三钙、磷酸铁、磷酸铝、磷酸氢钙和有机磷）、不同浓度磷酸三钙（0.3%、0.5%、0.7%、0.9%和1.1%）培养基的溶磷能力。【结果】FC和H3菌株菌丝在PDA培养基上的最适培养时间为5 d。分别在无机磷及有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP和NBRIYP培养基中培养7 d后,FC菌株的溶磷量大小依次为NBRIY>无机磷>NBRIP>SP>有机磷>NBRIYP,H3菌株的溶磷量大小依次为无机磷>NBRIP>SP>NBRIY>有机磷>NBRIYP。以4种不同磷酸盐为磷源,FC菌株对磷酸盐的溶解能力依次为磷酸氢钙>磷酸铝>磷酸铁>磷酸三钙,H3菌株溶解磷酸氢钙的能力较强,其次为磷酸三钙。在含不同浓度磷酸三钙的液体培养基中,两株菌株均能生长并具有溶磷能力,当磷酸三钙浓度为0.5%时,菌株溶磷能力最强。【结论】FC菌株的最适培养基为NBRIY,H3菌株的最适培养基为无机磷培养基。FC和H3菌株对难溶磷酸盐均有溶磷能力,而对磷酸氢钙的溶解能力较强;H3菌株对磷酸三钙的溶解能力较强。     

盐碱地中溶磷真菌的筛选及培养条件优化

为缓解板结土壤中由于不溶性磷酸盐的积累过多对土壤造成的板结问题,从东北长期板结土壤中筛选出多株具有溶磷能力的溶磷真菌。通过解磷圈测量及钼蓝比色法对分别以磷酸钙、磷酸铝及磷酸铁为主的培养物中可溶性磷含量进行测定,获得了1株溶磷能力较大的菌株P10,其对磷酸钙、磷酸铝及磷酸铁的分解能力分别为250,13,31μg/m L,经分子生物学鉴定,该菌株为具疣蓝状菌(Vorte plave gljivice)。该菌的最佳碳源、氮源、p H及底物磷酸钙用量分别为蔗糖、大豆粉、p H 6.0及10 g/kg,优化后,可溶性磷含量达378μg/m L。     

五株解磷真菌的分离鉴定及其溶磷能力分析

解磷菌能够溶解土壤中难溶性或不溶性磷,在促进土壤养分循环和植物生长方面起着重要作用,是生物肥料中重要的微生物资源。采用稀释涂布平板法筛选得到解磷真菌5株,对菌株进行分子生物学鉴定,并利用液体摇瓶法测量解磷真菌对磷酸三钙的溶磷能力。结果显示,5株解磷真菌的溶磷能力存在一定差异,其溶磷量为2.69 mg/L—58.30 mg/L。经鉴定5株解磷真菌分别属于Hongkongmyces snookiorum, Aspergillus versicolor, Hongkongmyces snookiorum,Trichoderma asperellum, Linnemannia exigua。本研究分离得到5株解磷真菌,为开发解磷生物肥料提供了菌种资源。     

2株蓝莓溶磷内生真菌的筛选、鉴定及溶磷效果评价

从蓝莓植株内生真菌中筛选出具有溶磷、耐盐功能的菌株,为研究和评价其溶磷效果,采用固体溶磷圈法,根据是否产生溶磷圈来筛选蓝莓溶磷内生真菌,选取具有溶磷圈的真菌进行经典形态学和内源转录间隔区(ITS)序列分析和鉴定;采用液体培养法测定发酵液的有效磷含量及pH值;采用超高效液相色谱仪测定有机酸的种类及其含量,分析菌株的溶磷机制;采用固体培养法,设置不同NaCl浓度梯度用于分析蓝莓溶磷内生真菌的耐盐性。经形态学和分子生物学鉴定,菌株G14为烟管菌(Bjerkandera adusta)、菌株FG54为阿达青霉(Penicillium adametzii)。菌株FG54于5 d后有效磷含量最高,达到587.315μg/mL,菌株G14于5 d后有效磷含量最高,达到523.730μg/mL。通过对2株菌株有机酸的测定,发现该菌株的溶磷能力主要通过自身分泌的丙二酸、甲基丙二酸和柠檬酸等有机酸降低菌株发酵液的pH值,从而达到溶解磷的效果。同时,菌株FG54能较好的适应不同含量氯化钠浓度,在较高浓度的氯化钠培养基中也能生长。在氯化钠低浓度情况下,菌株G14生长速度较快,FG54生长较慢。通过筛选得到了2...     

1株溶磷真菌的分离鉴定及溶磷特性分析

【目的】对从长春市农安县西盐碱地土壤样品中筛选出的溶磷能力强的菌株进行溶磷特性研究,为盐碱地改良提供菌种资源。【方法】以160份采自长春市农安县西的盐碱土为样品,利用NBRIP培养基对菌株进行筛选,对筛选出的菌种P1通过形态学特征、培养特征和ITSrDNA序列分析进行鉴定,分析该菌株溶解磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁的能力,通过L25(54)正交试验,以溶磷量为考察指标,碳源、氮源、pH和磷酸钙为考察因素,分析该菌株培养的最优条件,最后分析了该菌株利用硝酸盐的能力。【结果】从160份供试土壤中分离出307株溶磷菌,其中菌株P1生长表现最好。经鉴定菌株P1为绳状青霉(Penicillium funiculosum),其96h能将9cm培养皿内的白色无机磷固体培养基溶解至完全透明;在NBRIP液体培养基中培养168h,溶磷量可达1 064.21μg/mL。菌株P1对磷酸铝和磷酸铁有较好的溶解能力,最高溶磷量为96.02和15.34μg/mL;在磷酸钙、磷酸铝和磷酸铁的培养液中,菌株P1的溶磷量与pH值呈显著负相关。以可溶性淀粉为碳源、蛋白胨为氮源、初始pH值为7、底物磷酸钙用量为10g/L时,培养菌株P1的溶磷效果最好,溶磷量达1 276.75μg/mL。此外,菌株P1对硝态氮也有一定的利用能力,在以硝酸钠、硝酸钾为唯一氮源的液体培养基中培养168h后,使硝态氮含量分别下降了92.90和196.79μg/mL。【结论】从盐碱土中筛选到1株对难溶性磷酸盐有较强溶解能力、对硝态氮有一定利用能力的绳状青霉P1菌株,其具有良好的应用前景。     

溶磷真菌PFK-1的解磷能力及其对油菜的促生作用

利用固体、液体培养法测定溶磷真菌PFK-1的解磷能力;通过盆栽试验,研究其对油菜的促生作用及对土壤磷素变化的影响。试验结果表明,以Ca3(PO4)2为唯一磷源的液体培养基,接种参试菌株PFK-1,在28℃、120 r/min条件下培养144 h溶磷量高达768.1 mg/L;液体培养基中pH值随溶磷量的增加而下降,在144 h时液体培养基pH值降至1.87,以后仍继续保持在低pH值水平;盆栽试验表明,与单施硝基肥的处理相比,1%、2%微生物与硝基肥复配的处理,油菜鲜重和干重增长率分别为7.19%、22.15%和33.11%、40.88%;土壤有效磷分别增加了30.27%、52.36%。     

两株溶磷黑曲霉的生长特性及对不同难溶性磷酸盐的溶解作用

通过发酵培养实验对ML2、ML4两株溶磷黑曲霉的生长特性及对不同难溶性磷酸盐底物的溶解作用进行了研究。绘制了溶磷曲线,产酸、残糖变化曲线,菌体生长曲线,同时,结果表明：两株曲霉对Ca,（PO4）2、CaHPO4、FePO4、ALPO4,均有较好的溶解作用,说明它们可以适用于不同的土壤。     

千年桐内生真菌的分离鉴定及溶磷能力测定

【目的】对千年桐（Aleurites montana）内生真菌进行分离鉴定,初步筛选具有较高溶磷活性的 内生真菌。【方法】从福建省南平市建阳区的外墩采育场、湖桥工区和书坊林场的千年桐根、茎、叶中分离纯 化得到内生真菌。根据菌落在根、茎、叶中出现频率及其直径生长速度筛选优势菌株,进一步对优势菌进行溶 磷能力的定性测定。【结果】共分离出 155 株菌株,其中茎内生真菌 60 株（38.71%）、叶 50 株（32.26%）、 根 45 株（29.03%）。湖桥样地采集的内生真菌数量最多、外墩样地最少。选出 25 株优势菌株,经形态学和 18 SrDNA 分子鉴定分别为毛霉菌属（Mucor sp.）、青霉属（Penicillium sp.）、拟盘多毛孢属（Pestalotiopsis sp.）、生赤壳属（Bionectria sp.）、木霉属（Trichoderma sp.）、嗜热真菌属（Thermomyces sp.）、链格孢属（Alternaria sp.）、盾壳霉属（Coniothyrium sp.）和镰刀菌属（Fusarium sp.）。对优势菌株溶磷效果的试验表明,具有较强 溶磷活性的菌株分属青霉属（Penicillium sp.）和嗜热真菌属（Thermomyces sp.）。【结论】千年桐内生真菌数 量在不同地点和不同器官间分布各有不同,初步确定千年桐内生真菌菌属组成,得到具有较强溶磷活性的菌株 分属青霉属（Penicillium sp.）和嗜热真菌属（Thermomyces sp.）。     

一株溶磷黑曲霉的溶磷特性及溶磷机制初探

测定了溶磷黑曲霉ML4在不同的无机磷培养基摇瓶培养时pH的变化和磷浓度的变化。当以KH2 PO4 作为无机磷培养基的唯一磷源时,测试灭菌后的发酵液的溶磷能力,发现其溶磷量只有5 6 1.99mg/L。用液相色谱测定发酵液中有机酸的成分,发现发酵液中含有草酸、α-酮戊二酸等有机酸,分析得出:溶磷菌的溶磷机制除了有机酸的溶解作用外,还存在其他的溶磷机制,有待进一步探讨。     

2株溶磷真菌的筛选、鉴定、耐盐及促生效果

溶磷真菌能够溶解土壤中被固化的磷元素,在提高磷肥利用率和改善土壤环境方面具有重要意义。利用无机磷固体培养基从磷矿植物根际土壤中筛选得到2株高效溶磷真菌W10和W12,在液体培养基中检测菌株对不同难溶磷的溶解能力以及耐盐能力。结合形态学特征与ITS rDNA序列分析,W10与W12分别被鉴定为篮状菌(Talaromyces sp.)和黑曲霉(Aspergillus niger)。菌株W10和W12溶解Ca₃(PO₄)₂的最高溶解量分别为843.05 mg/L和1 187.09 mg/L,对AlPO₄和FePO₄的溶解量远远低于对Ca₃(PO₄)₂的溶解量;W10最高可耐受4%的盐浓度,W12在10%的盐浓度下对Ca₃(PO₄)₂仍有较强的溶解能力,没有达到耐盐极限,有开发为盐碱地微生物肥料的潜力;玉米盆栽试验结果显示,与CK2相比,10～40 d的W...     

耐寡营养高效解磷菌株XMT-5的分离鉴定及解磷特性

为获得更加适应寡营养的自然环境条件的解磷菌株,以1/4蒙金娜培养基从土壤中分离筛选高效解磷菌株,并对其进行鉴定,分析其生长条件及解磷机制。结果表明,从土壤中共分离获得解磷菌9株,通过对解磷量的定量测定确定高效解磷菌株XMT-5,其最大解磷量为195.63 mg/L;从菌落特征、生理生化特性及16S rRNA基因序列分析三方面鉴定菌株XMT-5为根瘤菌(Rhizobium sp.);菌株XMT-5在寡营养条件下可以分泌柠檬酸、酒石酸和乙酸3种有机酸,从而可使培养液pH值下降;菌株XMT-5可在温度4~42℃、pH值4~10、Na Cl质量浓度0~80 g/L以及寡营养条件下生长,环境适应能力较强,具有良好的应用前景。     

解磷芽孢杆菌YC４液体培养基及发酵条件的优化

对从养殖池塘中筛选出的一株具有解磷特性的芽孢杆菌YC4进行液体培养基和发酵条件的优化实验.在摇床培养条件下,研究了各营养源和主要影响因子对菌株YC4生长和芽孢形成的影响,并建立了菌株的生长曲线.结果显示:解磷芽孢杆菌YC4最佳发酵培养基配方为糖蜜10‰、大豆蛋白粉5‰、酵母膏5‰、磷酸二氢钾5‰、硫酸镁1.5‰、氯化钠15‰、玉米浆5‰;最适发酵条件为温度30℃,初始pH值为7.0～7.5,接种量1％,摇床转速200r/min;最适收获时间为24 h.优化后总菌量达1.23×109 CFU/mL,芽孢产量达1.01×109 CFU/mL,明显高于基础培养基发酵结果.     

溶磷细菌对复垦土壤有效磷及各形态无机磷含量的影响

为探索溶磷细菌在复垦土壤中对磷的作用效果,采用室内摇瓶培养的方法,研究了溶磷细菌及其组合对磷酸钙的溶解能力,从而确定最佳组合,并探讨最佳组合溶磷细菌对复垦土壤有效磷及各形态无机磷含量的影响。结果表明,拉恩式菌(W2)+荧光假单胞菌1(W3)+荧光假单胞菌2(W4)培养液的有效磷含量最高,为609.1 mg/L,其为最佳溶磷细菌组合。施用此溶磷细菌组合肥可以增加复垦土壤有效磷含量,复垦土壤有效磷含量表现为BG(溶磷细菌肥+磷酸钙)处理B(溶磷细菌肥)处理MG(基质+磷酸钙)处理M(基质)处理CK(空白),其中,B处理在苗期、拔节期、收获期分别比M处理显著增加15.7%、119.7%、54.1%,BG处理在苗期、拔节期、收获期分别比MG处理显著增加55.8%、91.8%、88.9%。在玉米苗期和收获期,施用溶磷细菌可以增加复垦土壤Ca_2-P、Ca_8-P、Fe-P、Al-P含量,其中收获期B处理比基质处理M分别显著增加86.6%、88.7%、38.6%、83.3%;复垦土壤O-P和Ca_(10)-P含量均表现为MGBGMBCK,溶磷细菌对复垦土壤O-P含量影响较小,对Ca_(10)-P含量影响较大,苗期和收获期B、BG处理Ca_(10)-P含量分别比对应的基质处理M、MG处理降低5.8%、23.1%和9.5%、24.4%,即溶磷细菌可以减少复垦土壤Ca_(10)-P的含量。土壤有效磷含量与土壤Ca_2-P、Ca_8-P、Al-P、Fe-P含量呈极显著正相关,与O-P、Ca_(10)-P含量无显著相关性。     

解磷真菌的研究进展与应用前景

磷是植物体生长发育所必需的三大元素之一。尽管绝大多数土壤中含有着丰富的磷元素,但因土壤中所含的磷元素易被固定且易形成沉淀,因此土壤中实际能被植物体利用的磷元素很少。目前多采用人工施用磷肥的方法。这是一种较快速的解决植物缺磷的手段,但长期施用会造成土壤污染,不利于植物的生长。近年研究表明,解磷微生物可以将土壤中难以被植物利用的无效磷转化为可被植物利用的有效磷,而解磷微生物中的解磷真菌的解磷能力高于解磷细菌和放线菌。笔者对解磷真菌的解磷机制、解磷能力、对植物的影响以及生态学意义等进行了综述。     

3株环链拟青霉固体培养条件的研究

通过测定菌落直径和产孢量,研究不同温度、培养基和光照时间对3株环链拟青霉的菌丝生长和产孢量的影响.结果表明,在23℃时,3个菌株菌落的直径生长最快,菌株Pc45和Pc287的产孢最多,而菌株Pc305在27℃下产孢最多.与常用的PDA和SDAY培养基相比,3个菌株在改良米饭-蛋白胨培养基上的菌落直径生长和产孢量均显著高于其他培养基;Mg2 和K 对产孢有重要影响.3个菌株均以光照24 h下的产孢量最高,而在0 h下,菌落直径最大,产孢量最小.     

香蕉组培苗根、叶在不同培养条件下的生长规律研究

以巴西蕉为试材,在人工气候箱香蕉组培苗生根培养试验,结果表明:在不同温度和不同光照条件下,香蕉组培苗生根表现出一定的规律,叶数、根数、根长3项指标与培养天数之间存在显著的线性关系。对各温度不同光照的生根指标与天数关系的散点图进行线性回归,建立两者关系的相应数学模型,统计分析结果显示,在25、28、31℃条件下香蕉组培苗的叶、根发生所需时间没有明显差异,不同光照之间也几乎没有差异;应用本试验建立的3个数学模型对不同培养条件下的香蕉生根组培苗进行检验,实测值与预测值的相对误差在10%以内。     

不同培养基组分对带叶兜兰离体培养效果的影响

【目的】探讨适宜带叶兜兰(Paphiopedilumhirsutissimum)离体培养的培养基组分,为规模化生产带叶兜兰组培苗提供技术支持。【方法】以带叶兜兰组培苗为外植体,筛选适合其丛生芽诱导、增殖和壮苗生长的基本培养基、附加物种类和生长激素组合。【结果】初步筛选出较适宜带叶兜兰丛生芽诱导的培养基为1/2MS+3.0 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+80.0 g/L香蕉汁+2.0 g/L活性炭,其诱导率较高,为36.1%,且丛生芽诱导出芽较多;丛生芽增殖培养基为1/2MS+0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2,4-D+80.0 g/L香蕉汁+2.0 g/L活性炭,其增殖系数为2.02,芽生长较快;壮苗生长最适宜培养基为1.0 g/L花宝1号+1.0 g/L花宝2号+MS培养基的有机、微量成分+1.0 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭+80.0 g/L香蕉汁+1.5 g/L蛋白胨,其幼苗生长较好,生物量大,生根率达75.5%。【结论】在1/2MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0 g/L活性炭培养基中添加香蕉汁较适宜带叶兜兰丛生芽诱导和增殖培养;在1/2MS+80.0 g/L香蕉汁培养基中添加0.1 mg/L TDZ+3.0 mg/L 2,4-D对带叶兜兰的增殖效果较佳;花宝改良培养基适宜带叶兜兰壮苗培养,结合添加NAA和活性炭培养效果更佳,但活性炭浓度不宜过高。     

不同林药套种模式下的根系土壤真菌群落组成及多样性分析

【目的】研究了四种不同林药复合经营模式下的根系土壤真菌群落组成及多样性变化,为科学评价这四种不同林药种植模式的生态风险提供了依据,也为不同林药复合经营模式提供了理论依据。【方法】基于高通量测序技术,分别对杜英套种多花黄精（G）,纯杜英林（g）;杉木套种草珊瑚（T）,纯杉木（t）;杉木套种灵芝（I）,纯杉木（i）;杉木套种铁皮石斛（J）,纯杉木（j）4组的根际土壤进行转录间隔区（ITS）测序,4组处理中分别得到68119、62710、64257、64035、63997、65701、62013和68366条有效序列,注释为1799、1662、1900、2237、2010、2440、1618和2068种真菌可操作分类单元（OTU）。【结果】杜英-多花黄精复合系统根系土壤真菌数量高于纯杜英林,chao 1指数、Ace 指数和Shannon 指数显著增加;与杉木林相比,杉木套种其他药材让土壤样本真菌群落丰富度指数(Ace、Chao)和多样性指数(Simpson、Shannon)降低。不同林药复合种植真菌组成在门分类上优势菌种较一致,均为子囊菌门和担子菌门。在纲分类水平上,杜英套种多花黄精的优势菌群为Sordariomycete（粪壳菌纲）和Mortierellomycetes（被孢霉纲）,与纯杜英林比较,Archaeorhizomycetes（古根菌纲）降低了498.31%。杉木套种其他药材的优势菌群为Agaricomycetes（伞菌纲）、Mortierellomycetes（被孢霉纲）和Sordariomycete（粪壳菌纲）;与纯杉木林相比,杉木套种草珊瑚中Archaeorhizomycetes（古根菌纲）降低了2701.79%。杉木套种灵芝中Geminibasidiomycetes增加了153倍。套种铁皮石斛中,真菌群落组成无明显变化。【结论】杜英-多花黄精复合系统有利于根系土壤真菌的生存,后期可以对此种复合经营模式进行更深的研究。     

固态发酵中碳氮源对黑曲霉解磷效果的影响

为探讨固态发酵中不同碳氮源对黑曲霉解磷效果的影响,采用碳酸氢钠浸提-钼锑抗比色法,以磷酸三钙为磷源,葡萄糖、纤维素和淀粉为外加碳源,硫酸铵、尿素和硝酸钠为外加氮源,取试验筛选的1株黑曲霉为菌种进行试验。结果表明,在麸皮发酵中,加淀粉、纤维素的培养基发酵液中的有效磷含量相对无外加碳源的对照培养基有效磷含量可分别增加0.77、0.51g/kg。在稻壳发酵中,加淀粉、葡萄糖的发酵液中有效磷含量可分别增加26.32、15.23g/kg,分别增加了4.3、2.5倍;加硫酸铵、尿素的发酵液中有效磷含量略有减少,加硝酸钠的发酵液中有效磷含量可增加4.60g/kg。在玉米芯发酵中,加淀粉、葡萄糖的发酵液中有效磷含量分别可增加8.20、12.23g/kg;外加的氮源各组有效磷含量均有减少,其中加尿素可使有效磷含量减少10.70g/kg。     

不同氮磷钾营养水平对铁皮石斛组培苗生长的影响

[目的]分析不同氮、磷和钾营养水平对铁皮石斛组培苗生长的影响,为其组培快繁及田间施肥管理提供参考依据.[方法]以铁皮石斛壮苗阶段的组培苗为材料,采用L9(33)正交设计研究培养基中氮、磷和钾三大元素含量配比对其株高、叶片数、新增根数、分蘖数和相对增重率的影响,并对其中影响显著的钾元素进行单因素多水平影响试验.[结果]极差分析结果显示,氮对铁皮石斛组培苗株高和分蘖数影响最大,钾对新增根数和相对增重率影响最大,磷对叶片数影响最大.方差分析结果表明,氮、磷和钾对铁皮石斛组培苗的叶片数及新增根数均无显著影响(P>0.05);氮对株高和分蘖数影响明显,以N2水平(氮30.0 mmol/L)的株高最高,N3水平(氮60.0 mmol/L)的分蘖数最多;钾对铁皮石斛组培苗相对增重率影响显著(P<0.05),以K3水平(钾20.0 mmol/L)的相对增重率最高.钾离子含量试验结果表明,在一定范围内,随着钾离子浓度的增加,组培苗的相对增重率呈上升趋势,以处理k5(钾40.0 mmol/L)组培苗的相对增重率最高.[结论]在铁皮石斛组培苗增殖阶段,培养基中最佳氮、磷和钾含量配比分别为60.0、1.2和20.0 mmol/L,在壮苗阶段,培养基中最佳氮、磷和钾含量配比分别为30.0、1.2和20.0 mmol/L.在铁皮石斛组培苗生产过程中,可在此含量配比基础上添加激素及其他有机或无机营养组分,以促进组培苗生长.