猪产肠毒素大肠杆菌987P菌毛卵黄抗体的研究

【目的】探索产肠毒素大肠杆菌（ETEC）987P菌株培养的最佳条件及987P菌毛诱发蛋鸡制备卵黄抗体（IgY）的最佳免疫程序,为IgY的工业化、规模化生产提供参考。【方法】扩大培养987P菌株,抽提层析纯化987P菌毛蛋白,然后以其为抗原免疫20周龄开产海兰蛋鸡,采用间接ELISA检测987P菌毛蛋白免疫IgY效价。【结果】987P菌株的最佳培养条件为37℃下Slanctz固体培养基培养24 h;以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫20周龄开产蛋鸡,发现987P菌毛蛋白二免、三免IgY效价总体趋势基本一致,均在第3周达到峰值并维持1周,二免抗体峰值为213,三免抗体峰值是二免峰值的2倍（214）,但第4周过后三免IgY效价仍保持在213,且持续时间长,一般维持2～3周。【结论】以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫蛋鸡,能获得较高效价的IgY,且适当增加免疫次数能有效提高抗体水平和延长持续时间。     

猪产肠毒素大肠杆菌987P菌毛卵黄抗体的研究

【目的】探索产肠毒素大肠杆菌(ETEC)987P菌株培养的最佳条件及987P菌毛诱发蛋鸡制备卵黄抗体(IgY)的最佳免疫程序,为IgY的工业化、规模化生产提供参考。【方法】扩大培养987P菌株,抽提层析纯化987P菌毛蛋白,然后以其为抗原免疫20周龄开产海兰蛋鸡,采用间接ELISA检测987P菌毛蛋白免疫IgY效价。【结果】987P菌株的最佳培养条件为37℃下Slanctz固体培养基培养24h;以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫20周龄开产蛋鸡,发现987P菌毛蛋白二免、三免IgY效价总体趋势基本一致,均在第3周达到峰值并维持1周,二免抗体峰值为213,三免抗体峰值是二免峰值的2倍(214),但第4周过后三免IgY效价仍保持在213,且持续时间长,一般维持2～3周。【结论】以纯化987P菌毛蛋白为抗原免疫蛋鸡,能获得较高效价的IgY,且适当增加免疫次数能有效提高抗体水平和延长持续时间。     

高免卵黄抗体的应用及其展望（一）

高免卵黄抗体的应用及其展望（一）罗函禄（江苏省农业科学院畜牧兽医研究所南京２１００１４）卵黄抗体（ｅｇｇｙｏｌｋｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ简称ＩｇＹ）已经被越来越广泛地应用于许多疾病，尤其是家禽传染病的防治，并获得了显著的效果。不仅如此，ＩｇＹ亦...     

抗猪大肠杆菌卵黄抗体的研制及其高免蛋白粉生产技术

本项目以含有K88、K99和987P的猪大肠杆菌免疫健康蛋鸡,制备含有鸡抗猪大肠杆菌的卵黄抗体.免疫后的蛋鸡体内的特异性抗体水平能保持较长时间,水平稳定.     

仔猪产肠毒素大肠杆菌疫苗的研究进展

仔猪腹泻仍然是困扰世界养猪业的重要疾病之一,产肠毒素大肠杆菌（ETEC）是引起仔猪腹泻的重要病原菌。在饲料中添加抗生素、喂服特异性抗体、膳食调节、利用遗传育种选育等多种方法被用来预防和治疗ETEC引起的感染。相比其他预防措施,疫苗接种是防制ETEC引起仔猪腹泻的最经济和最有效的手段。就目前猪用ETEC疫苗的最新研究进展进行综述,并分析了ETEC疫苗研究中面临的挑战,提出了高效疫苗的研究策略,旨在为ETEC新型、安全、高效和广谱疫苗的研发提供依据。     

鸡抗猪大肠杆菌卵黄抗体的研制与应用

用猪致病性大肠杆菌 K88、K99、987P、F4 1 标准菌株制成的灭活油佐剂作为免疫原 ,待产蛋鸡免疫后收集高免卵黄 ,然后提取、纯化 ,精制成鸡抗猪大肠杆菌特异性高免卵黄抗体并用于临床 .结果表明该制剂安全性好 ,每头仔猪注射或口服 2-4m L剂量预防仔猪大肠杆菌性腹泻 ,效果明显     

肠毒素型大肠杆菌F18菌毛对产蛋鸡免疫的原性

提取猪源肠毒素型大肠杆菌(ETEC)标准株和临床分离株F18菌毛,并制备弗氏佐剂苗,分别免疫产蛋母鸡后用间接ELISA法定期检测母鸡卵黄抗体和血清抗体效价.结果表明:无论标准株还是分离株,F18菌毛对产蛋鸡均具有良好的免疫原性,卵黄抗体效价最高可达1∶25600,血清抗体效价高于卵黄抗体效价,最高可达1∶51200.     

抗大肠埃希氏菌987P粘着素单克隆抗体的产生及其特性测定

用饱和硫酸铵沉淀和葡聚糖凝胶柱层析法从987P~+大肠杆菌培养物中分离和提纯987P抗原。以此抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/O—Ag14融合,获得两株能分泌抗987P特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为EP-22和EP-G1。经多次克隆化后,他们在体外培养中能稳定分泌高效价的特异单克隆抗体,于液氮中冻存三多个月。复苏后其分泌抗体能力仍不变。EP—22和EP-G1的腹水单抗,免疫荧光滴度高达10~5-10~6,直接凝集滴度均为2—4×10~2。EP-22培养上清的单抗免疫荧光滴度可迭10~2-10~3,直接凝集滴度为16—32。在间接免疫荧光和琼扩试验中,这两株单抗对所试的987P~+标准菌株和野毒菌株均具有高度的特异性,对不含987P而含其它粘着素(K88或K99或F41)的菌株以及肠菌科之其他细菌都不发生交叉反应。他们对pH2-9.8及4-56℃有较强抵抗力。用EP-22株小鼠腹水单抗直接标记的单克隆荧光抗体效果好,特异性高。EP-22和EP-G1单抗的免疫球蛋白亚类均属IgG1。     

大肠杆菌987 P基因工程菌苗预防实验性仔猪黄痢试验

用基因工程技术构建的大肠杆菌HB101/pBP52菌株能产生987 P型菌毛,但不产生热稳定肠毒素(ST),用该茵株制备灭活苗,在产前21天免疫18头第一胎怀孕母猪.在分娩后24～48小时内,用产热稳定肠毒素(ST)大肠杆菌987菌株(O9:K103,987P:NM)人工感染所产仔猪102头,88头仔猪在观察期(攻毒后7天)结束时安全无恙,保护率达86.27％.结果表明:用无毒大肠杆菌HB 101/pBP 52菌株制备的灭活苗可以有效地预防987P菌毛型致病性大肠杆菌引起的仔猪黄痢.     

产肠毒素大肠杆菌F5菌毛基因的克隆与表达

应用PCR方法从产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)中扩增出不含信号肽序列的F5菌毛抗原基因片段,克隆测序后将其连接到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,转化工程菌BL21,经IPTG诱导表达。经SDS-PAGE和Western Blot分析,重组蛋白在BL21中得到表达并与F5菌毛单因子血清发生明显反应。     

鸡大肠杆菌(HJ20株)与人大肠杆菌(RHU845)P型菌毛同源性分析

运用Goldkey电脑软件对鸡源大肠杆菌与人源大肠杆菌P型菌毛蛋白结构基因序列、氨基酸序列、二级结构进行了比较分析,二者结构基因序列相似性82.5%.二者P型菌毛的信号肽序列基本相同,氨基酸序列相似性83.7%,并且菌毛蛋白在二级结构上存在较多的相似性.     

抗新城疫、禽流感(H5、H9)多价二联卵黄抗体的研制及应用

采用新城疫一禽流感(H9)二联油乳剂灭活苗和禽流感(H5)油苗免疫健康高产蛋鸡制备抗新城疫、禽流感(H5、H9)多价二联卵黄抗体,应用该卵黄抗体开展了鸡新城设和禽流感预防免疫和治疗试验.结果表明,该制剂对新城疫、禽流感预防保护率分别达90%～100%、95%～100%.治愈率分别达75%和80%;在45家规模化肉鸡场推广使用,对防治鸡新城疫、禽流感发挥了良好的作用.     

猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备

【目的】克隆猪Jiv蛋白核心区的2 112bp的基因片段,构建其原核表达载体后进行蛋白的表达和纯化,制备抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。【方法】利用RT-PCR方法,从猪脾脏组织RNA中扩增得到猪Jiv基因,将其克隆到pMD19-T载体并测序,以此为基础构建原核表达载体pET32a-Jiv,转化E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,利用IPTG诱导表达,获得大量包涵体形式的猪Jiv融合蛋白。通过镍离子螯合层析柱对表达的目的蛋白进行纯化,对纯化后的包涵体蛋白进行透析复性,以每只新西兰白兔400μg蛋白的初次免疫剂量和500μg蛋白的加强免疫剂量进行免疫,共免疫5次,采集血清,采用间接ELISA法检测抗体效价达到一定水平后,收集抗体,利用Western blot检测抗体特异性。【结果】克隆得到长度为2 112bp的猪Jiv基因片段;构建的pET32a-Jiv在E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞中经诱导后高效表达,SDS-PAGE结果显示,纯化得到分子质量约为95ku的猪Jiv融合蛋白;测得的猪Jiv蛋白多克隆抗体效价达1∶6 400;Western blot检测结果证实,所获得抗体能够有效地应用于猪Jiv蛋白抗原的检测。【结论】成功地克隆了猪Jiv基因,制备了抗猪Jiv蛋白的多克隆抗体。     

中草药添加剂对猪生产性能和猪瘟疫苗免疫效果的影响

90头健康三元杂交断奶仔猪被均分成9个栏,每栏10头猪,随机分成3组。在仔猪、生长猪和肥育猪阶段,对照组分别饲喂猪场自配的仔猪饲粮、生长猪饲粮和肥育猪饲粮;试验1组(中草药组)饲喂在3种对照饲粮基础上分别添加了3 500,3 000和2 500 mg·kg-1中草药饲料添加剂的试验饲粮,试验2组(植物提取物添加剂组)饲喂在3种对照饲粮基础上分别添加了800,600和500 mg·kg-1植物提取物添加剂的试验饲粮。对照组、试验1组和试验2组的全期平均日增重分别为(587.47±91.93),(604.78±91.06)和(601.44±72.26)g,料重比分别为3.42±0.11,3.23±0.26和3.41±0.22。在猪瘟疫苗免疫后29 d,猪瘟抗体阳性率分别为41.7%,83.3%和41.7%,中草药组猪瘟抗体阳性率显著高于对照组和植物提取物添加剂组。试验期间,中草药组猪的死亡率比对照组和植物提取物添加剂组下降66.7%和75.0%,淘汰率均降低33.3%。使用中草药饲料添加剂比对照组和植物提取物添加剂组增加经济效益40.96%和95.89%。表明中草药饲料添加剂具有改善猪生产性能、提高猪抗病能力和增...     

抗猪大肠杆菌高免卵黄的研制及对实验感染病例的疗效观察

本试验主要选择了引起猪黄白痢的常见致病菌株E.coli,K88,通过对其在专用培养基上增菌培养,制成油佐剂灭活苗免疫产蛋母鸡,运用微量凝集试验测母鸡抗体水平,待抗体水平达8 log2以上时,收取鸡蛋制成高免卵黄。选择6窝56头刚出生的未吮乳仔猪(母猪未免疫),第1,2窝16头用E.coli K88标准菌株500亿／头口服人工感染,第3,4窝18头口服E.coli K88标准菌株250亿／头,第5窝10头作为抗生素治疗对照组,第6窝12头为空白对照组,观察记录发病情况,待明显发病后,对第1~4窝仔猪用自制抗E.coli K88高免卵黄口服治疗。试验结果表明,口服抗E.coli K88菌株高免卵黄抗体对人工感染仔猪黄痢与白痢的治愈率分别为93.75％和88.89％,而应用抗生素庆大霉素的治愈率仅为50％。     

脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体对脂肪细胞增殖与凋亡的影响

以0.1、1.0和10.0 μg/mL 3种剂量脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体处理体外培养的3T3-L1前脂肪细胞或经其诱导分化的脂肪细胞,采用四唑盐(MTT)比色法检测3T3-L1前脂肪细胞增殖能力,以乳酸脱氢酶漏出率为指标观察脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体对脂肪细胞的细胞毒性,用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色分析脂肪细胞凋亡情况以及油红0染色法测定脂肪细胞脂肪含量.结果表明:用不同质量浓度(0.1、1.0和10.0μg/mL)的脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体处理可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,并影响脂肪细胞的脂肪合成(P<0.05),但对脂肪细胞无明显的细胞毒作用;还可见凋亡峰和典型的凋亡形态学改变,流式细胞仪检测出的脂肪细胞凋亡率分别为1.62%、2.33%和4.57%,呈浓度依赖性,与对照组(0.36%)比较,差异皆显著(P<0.01).提示:脂肪细胞膜蛋白卵黄抗体可抑制前脂肪细胞增殖,诱导脂肪细胞凋亡并影响脂肪合成.